8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与T2MD患者血糖在目标范围内时间的相关性及预测糖尿病周围神经病变的价值

目的探讨8-异前列腺素F2α(8-isoPGF2α)、镍纹样蛋白(Metrnl)、微管相关蛋白3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)/微管相关蛋白-Ⅰ(LC3B-Ⅰ)与2型糖尿病(T2MD)患者血糖在目标范围内时间(TIR)的相关性及对糖尿病周围神经病变(DPN)预测价值。方法选取2020年5月至2022年10月新乡医学院第一附属医院收治的187例T2DM患者进行前瞻性研究,根据是否合并DPN分为DPN组(n=48)和无DPN组(n=139)。比较两组患者及根据TIR四分位数分组的患者8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ水平,采用Pearson相关性分析8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与TIR相关性,采用多因素Logistic回归分析DPN的相关影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)评价8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ预测DPN的价值。结果DPN组患者的TIR为(51.43±7.68)%,明显低于无DPN组的(56.94±8.12)%,差异有统计学意义(P<0.05);DPN组患者的8-isoPGF2α、Metrnl分别为(162.78±51.33)pg/mL、(259.18±74.42)pg/mL,明显高于无DPN组的(129.56±43.00)pg/mL、(208.37±65.61)pg/mL,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ为0.89±0.27,明显低于无DPN组的1.15±0.31,差异均有统计学意义(P<0.05);根据TIR第25、50、75百分位数将全部患者分为Q1~Q4四组,8-isoPGF2α、Metrnl在Q4组最低,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ在Q4组最高;8-isoPGF2α、Metrnl随着TIR降低逐渐升高,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ随着TIR降低而降低,四组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,8-isoPGF2α、Metrnl与TIR呈显著负相关(r=-0.786、-0.665,P<0.01),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与TIR呈显著正相关(r=0.711,P<0.01);多因素Logistic回归分析结果显示,TIR、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ是DPN的独立相关保护因素(P<0.05),8-isoPGF2α、Metrnl是DPN的独立相关危险因素(P<0.05);ROC分析结果显示,单一指标中,Metrnl预测DPN的AUC最大(0.830),特异度最高(87.05%),8-isoPGF2α+Metrnl+LC3B-Ⅱ预测DPN的AUC为0.923(95%CI:0.875~0.957),大于Metrnl,预测敏感度为87.50%,特异度为85.61%(P<0.05)。结论8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与T2MD患者TIR有关,均是患者并发DPN的预警因素。联合检测三者能为临床分层管理和早期识别DPN高风险人群提供参考。

重症胰腺炎患者血清载脂蛋白B/载脂蛋白A1、微管相关蛋白1-轻链3和细胞间黏附分子-1水平在预测并发感染性胰腺坏死中的价值

目的观察重症胰腺炎(SAP)患者血清载脂蛋白B与载脂蛋白A1比值(ApoB/ApoA1)、微管相关蛋白1-轻链3(MAP1-LC3)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平,并分析其与患者并发感染性胰腺坏死(IPN)的关系和预测价值。方法选取2019年1月至2022年1月于该院收治的172例SAP患者作为SAP组。收集临床资料及外周静脉血标本,检测患者血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3和ICAM-1水平,同期选取该院70例体检健康者作为对照组。比较SAP患者与体检健康者的血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3和ICAM-1水平差异;根据SAP患者后续有无并发IPN分为IPN组和非IPN组。采用单因素及多因素分析比较两组患者临床资料,分析血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3、ICAM-1水平及其他相关因素与SAP患者并发IPN的关系;并通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清ApoB/ApoA1、LC3和ICAM-1水平用于预测SAP患者并发IPN的价值。结果SAP组血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3、ICAM-1水平均高于对照组(均P<0.05);单因素分析显示,IPN组ApoB/ApoA1、MAP1-LC3及ICAM-1水平均高于非IPN组(均P<0.05),多因素分析显示,ApoB/ApoA1(β=2.309,P=0.027)、MAP1-LC3(β=5.447,P=0.037)及ICAM-1(β=0.039,P=0.045)水平均是SAP患者并发IPN的影响因素。血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3及ICAM-1水平预测SAP患者并发IPN的曲线下面积(AUC)分别为0.761(95%CI:0.683~0.840)、0.765(95%CI:0.681~0.848)、0.882(95%CI:0.829~0.935);灵敏度分别为76.1%、68.7%、71.6%,特异度分别为61.0%、89.5%、91.4%。联合预测的AUC为0.957,灵敏度为85.1%,特异度为96.2%。结论血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3、ICAM-1水平是SAP患者并发IPN的影响因素,并发IPN的患者ApoB/ApoA1、MAP1-LC3和ICAM-1水平更高,这些指标对于预测SAP患者并发IPN具有一定的价值。

血清α-突触核蛋白、微管相关蛋白1轻链3、载脂蛋白A1与帕金森病认知功能、疾病进展的关系

目的检测α-突触核蛋白(α-synuclein)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、载脂蛋白A1(Apo A1)水平在帕金森病(PD)患者血清中的表达情况,以及三者与PD患者发生认知功能障碍(CI)、疾病进展的相关性。方法选取96例PD患者作为研究组,另外选取同期体检健康者90例为对照组。根据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分将患者分为CI组(42例)和认知功能正常组(54例)。根据Hoehn-Yahr(H-Y)分期量表将PD患者分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ期,其中Ⅰ~Ⅱ期PD患者纳入早期PD组(57例),Ⅲ~Ⅴ期PD患者纳入中晚期PD组(39例)。测定PD患者血清中α-synuclein、LC3、Apo A1水平。分析α-synuclein、LC3、Apo A1与H-Y分期的相关性。采用多因素Logistic回归分析筛选PD患者发生CI的影响因素。结果研究组α-synuclein水平高于对照组,LC3、Apo A1水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);早期PD组α-synuclein水平低于中晚期PD组,LC3与Apo A1水平高于中晚期PD组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清α-synuclein水平与H-Y分期呈正相关(P<0.05)。三者联合预测PD患者发生CI的曲线下面积(AUC)为0.925,大于α-synuclein、LC3、Apo A1单独预测的AUC(P<0.05)。α-synuclein、LC3、Apo A1、高血压史是PD患者发生CI的影响因素(P<0.05)。结论α-synuclein在PD合并CI患者血清中呈高表达,LC3、Apo A1呈低表达,三者与PD认知功能、疾病进展的关系密切。

腹腔镜结直肠癌根治术后患者组织中微管相关蛋白轻链3-Ⅱ表达水平与其临床病理特征及预后的关系

目的 探究腹腔镜结直肠癌根治术后患者组织中微管相关蛋白轻链3-Ⅱ表达水平与临床病理特征及预后的关系。方法 选取结直肠癌患者60例,收集患者临床资料,免疫组化法检测组织微管相关蛋白轻链3-Ⅱ水平,分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果 组织LC3表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤分化程度等临床病理特征均无相关性(P>0.05),与肿瘤分期、淋巴结远处转移相关(P<0.05)。单因素分析发现:肿瘤分化程度、肿瘤分期、淋巴结远处转移、LC3表达是影响腹腔镜结直肠癌根治术后患者预后的因素(P<0.05)。多因素分析显示:肿瘤分化程度、淋巴结远处转移、肿瘤分期和LC3表达情况表达是影响腹腔镜结直肠癌根治术后患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 腹腔镜结直肠癌根治术后患者组织中微管相关蛋白轻链3-Ⅱ表达水平与临床病理特征有关,微管相关蛋白轻链3-Ⅱ表达可作为预测腹腔镜结直肠癌根治术后患者预后的生物标志物,具有重要的临床意义。

失荅剌知丸对动脉粥样硬化模型大鼠微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ表达的影响

目的:观察失荅剌知丸对动脉粥样硬化模型大鼠自噬因子微管相关蛋白1轻链(LC3-Ⅱ)表达的影响。方法:将动脉粥样硬化模型SD大鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、失荅剌知丸组,采用光镜进行主动脉病理形态学观察,采用Westernblot检测LC3-Ⅱ表达情况。结果:大鼠主动脉病理检查结果显示,模型组内膜增厚,可见斑块,且斑块纤维帽破裂;阿托伐他汀组与失荅剌知丸组内膜均稍有增厚,可见少量脂质沉积,外膜基本完整。Westernblot检测结果显示,阿托伐他汀组与失荅剌知丸组的LC3-Ⅱ表达水平上调(P<0.05),且失荅剌知丸组上调更为明显(P<0.05)。结论:失荅剌知丸抗动脉粥样硬化斑块的形成机制与上调自噬因子LC3-Ⅱ有关。

血清微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3及高迁移率族蛋白B1在不同程度急性胰腺炎中的表达及意义

目的:探讨血清微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在不同程度急性胰腺炎(AP)中的表达及意义。方法:选取AP患者135为病例组,根据病情严重程度又分为轻症急性胰腺炎(MAP)组、中度重症急性胰腺炎(MSAP)组以及重症急性胰腺炎(SAP)组三个亚组,每组45例。选取同期体检健康者135例为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)对血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平进行测定。采用急性生理学和慢性健康状况评估Ⅱ(APACHEⅡ)对病例组患者进行评估。比较病例组与对照组血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平。比较不同程度AP患者血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平及APACHEⅡ评分。采用Spearman法分析血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1与AP患者APACHEⅡ评分的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1对AP的预测价值。结果:与对照组相比,病例组患者血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平明显升高(均P<0.05)。血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平及APACHEⅡ评分在不同程度AP患者中由高到低依次为SAP组、MSAP组、MAP组,各组间比较差异有统计学意义(均P<0.05)。血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1与AP患者APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.704、0.642、0.723,均P<0.05)。血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1对AP具有良好的预测价值。结论:血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1水平在AP患者中升高,且与病情严重程度呈正相关,对AP具有良好的预测价值。

血清甲胎蛋白、p62及LC3-Ⅱ在HBV相关慢加急性肝衰竭预后评估中的应用

目的探讨血清甲胎蛋白(AFP)、自噬相关蛋白p62及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)在HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者预后评估中的应用价值。方法回顾性选取2020年1月—2023年1月云南省滇南中心医院(红河州第一人民医院)收治的102例HBV-ACLF患者作为观察组,另选取同期收治的慢性乙型肝炎患者、同期健康体检者各50例分别作为疾病对照组和健康对照组。测定并对比3组的血清AFP、p62及LC3-Ⅱ水平。对观察组患者的预后情况进行随访,对比预后良好与预后不良患者的血清AFP、p62及LC3-Ⅱ水平,并通过受试者工作特征曲线(ROC)分析血清AFP、p62及LC3-Ⅱ水平对HBV-ACLF患者预后良好的预测效能。结果3组的血清AFP、LC3-Ⅱ均有观察组>疾病对照组>健康对照组,血清p62有观察组<疾病对照组<健康对照组,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。随访显示观察组死亡31例(预后不良),生存71例(预后良好),病死率30.39%。预后良好组的血清AFP、p62水平高于预后不良组,血清LC3-Ⅱ水平低于预后不良组(P<0.05)。ROC曲线显示,当AFP值>115.65 ng/mL、p62>1.12 ng/mL、LC3-Ⅱ<53.07时,对HBV-ACLF患者预后良好均有一定的预测价值(AUC均>0.7)。与3项指标单用比较,3项联合对HBV-ACLF患者预后良好的诊断效能更高(AUC=0.878),诊断灵敏度、特异度分别为92.17%和85.68%。结论血清AFP、p62及LC3-Ⅱ均对HBV-ACLF患者预后有一定的预测价值,3项联合的预测效能更高。

膀胱癌组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白的表达及与患者肿瘤特征、预后的相关性分析

目的观察膀胱癌组织中自噬基因Beclin1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白表达状况,并分析两者与预后的相关性。方法选取2020年1月—2021年8月新疆医科大学附属肿瘤医院病理资料完整的110例膀胱癌患者。观察患者膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达状况,记录病理参数,并对患者进行为期1年的随访。统计预后情况,观察不同病理参数及预后的膀胱癌患者膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达,并分析两者与患者预后的相关性。结果膀胱癌组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白高表达率较癌旁组织低,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白中低表达率较癌旁组织高(P<0.05)。高组织学分级、T_(2)~T_(4)分期、浸润性、淋巴结转移、预后不良的膀胱癌患者Beclin1蛋白高表达率低于低组织学分级、T_(a)~T_(1)分期、非浸润性、无淋巴结转移、预后良好的患者(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径、血管侵犯的膀胱癌患者Beclin1蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高组织学分级、T_(2)~T_(4)分期、浸润性、淋巴结转移、预后不良的膀胱癌患者LC3Ⅱ蛋白高表达率低于低组织学分级、T_(a)~T_(1)分期、非浸润性、无淋巴结转移、预后良好的患者(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径、血管侵犯的膀胱癌患者LC3Ⅱ蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。经Phi系数相关性分析,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白与预后不良均呈负相关(Phi=-0.277和-0.222,均P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:Beclin1高表达[O^R=3.892(95%CI:1.504,10.072)]、LC3Ⅱ蛋白中低表达[O^R=3.358(95%CI:1.165,9.677)]是预后不良的危险因素(P<0.05)。结论膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ表达与预后密切相关,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白中低表达是预后不良的危险因素。

艾灸对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响

目的观察艾灸对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠炎症因子白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)及滑膜细胞中自噬相关因子Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)表达的影响,探索艾灸治疗RA的作用机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、甲氨蝶呤组、艾灸组,每组9只。采用弗氏完全佐剂造模法制备RA大鼠模型。造模成功后艾灸组予艾灸足三里、关元,每次20 min,每天1次;甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤0.35 mg/kg灌胃,每周2次。空白组、模型组、甲氨蝶呤组每天给予艾灸组大鼠同样时长及强度的捆绑。每组均干预3周。观察大鼠一般情况,采用足趾容积测量仪检测大鼠左后肢足趾容积,ELISA法检测血清中IL-2含量,Western blot检测大鼠踝关节滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白相对表达量。结果与模型组比较,甲氨蝶呤组及艾灸组精神一般,反应尚可,体质量恢复,较活跃,摄食、饮水尚可,足部肿胀、红肿缓解,其局部炎症及全身多发性关节炎情况均轻于模型组。与空白组比较,模型组大鼠于造模后第3、10、17、24天足趾容积明显增大(P<0.01),结合一般情况,提示模型制备成功;甲氨蝶呤组、艾灸组足趾容积于第24天增大(P<0.05)。与模型组比较,甲氨蝶呤组造模后第17、24天足趾容积降低(P<0.05,P<0.01),艾灸组第10、17、24天足趾容积明显降低(P<0.01)。干预3周后,与空白组比较,模型组血清中IL-2含量明显升高(P<0.01),滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量明显上升(P<0.01);与模型组比较,甲氨蝶呤组、艾灸组血清中IL-2含量降低(P<0.05),艾灸组滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量下降(P<0.05)。结论艾灸能改善RA大鼠关节肿胀,降低IL-2含量,其作用机制可能是通过调节自噬因子Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量有关。

血清wnt5a和LC3-Ⅱ联合MELD评分预测慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者短期预后价值探讨

目的探讨血清无翅型MMTV整合位点5a(wnt5a)和微血管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)水平联合终末期肝病模型(MELD)评分预测慢加急性乙型肝炎肝衰竭(HBV-ACLF)患者短期预后的价值。方法2018年1月~2022年12月我院诊治的152例HBV-ACLF患者,常规内科和人工肝治疗,计算MELD评分,采用ELISA法检测血清wnt5a和LC3-Ⅱ水平,应用Logistic回归分析影响HBV-ACLF患者短期预后的因素,应用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清wnt5a和LC3-Ⅱ联合MELD评分预测HBV-ACLF患者短期预后的效能。结果在治疗3个月内,本组HBV-ACLF患者死亡40例(26.3%);死亡组年龄、肝性脑病发生率、INR、血清总胆红素水平、MELD评分和wnt5a水平分别为(51.3±5.1)岁、70.0%、(3.2±0.9)、(441.5±89.7)μmol/L、(28.2±4.3)分和(2.8±1.5)ng/mL,均显著大于生存组【分别为(45.4±4.6)岁、20.0%、(1.7±0.3)、(280.6±73.1)μmol/L、(19.7±2.8)分和(1.3±0.2)ng/mL,P<0.05】,而外周血血小板计数和血清LC3-Ⅱ水平分别为(77.8±10.3)×10^(9)/L和(20.6±2.1)μg/mL,显著低于生存组【分别为(116.4±11.7)×10^(9)/L和(32.5±3.9)μg/mL,P<0.05】;多因素Logistic回归分析显示,年龄大、并发肝性脑病和血清wnt5a升高或血清LC3-Ⅱ水平降低为影响HBV-ACLF患者短期预后的独立影响因素(P<0.05);以MELD评分大于26.9分为截断点,其预测ACLF患者短期死亡的灵敏度和特异度分别为80.0%和92.9%,而检测血清wnt5a和LC3-Ⅱ水平也可以协助判断。结论血清wnt5a和LC3-Ⅱ联合MELD评分对HBV-ACLF患者短期预后具有较好的预测价值。

血清可溶性髓系细胞触发受体-1、血管紧张素转化酶2、微管相关蛋白1轻链3与重症急性胰腺炎预后的关系

目的研究血清可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)、血管紧张素转化酶2(ACE2)、微管相关蛋白1轻链3(MAP1-LC3)与重症急性胰腺炎(SAP)患者预后的关系。方法将丹东市第一医院重症医学科2019年3月至2021年3月收治的92例SAP患者纳入研究(研究组),同一时段在我院体检的健康人员90例作为对照组。检测并比较两组受检者的血清sTREM-1、ACE2及MAP1-LC3水平。将研究组患者按照入院后28 d的预后分为死亡组20例和存活组72例,采用单因素、多因素Logistic回归分析SAP患者预后的影响因素。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sTREM-1、ACE2及MAP1-LC3预测SAP患者预后的效能。结果研究组患者的血清sTREM-1、MAP1-LC3水平分别为(91.23±18.47)ng/L、(0.90±0.21)ng/mL,明显高于对照组的(44.06±13.22)ng/L、(0.22±0.06)ng/mL,而ACE2水平为(195.23±61.71)pg/mL,明显低于对照组的(370.48±103.26)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,急性生理学及慢性健康状况评分系统(APACHEⅡ)评分、序贯器官衰竭(SOFA)评分、血清sTREM-1、MAP1-LC3、ACE2水平是SAP患者死亡的影响因素(P<0.05);经ROC曲线分析结果显示,APACHEⅡ评分、SOFA评分联合血清sTREM-1、ACE2、MAP1-LC3预测SAP患者死亡的曲线下面积高于上述各指标单独检测。结论SAP患者血清sTREM-1、MAP1-LC3呈高表达,而ACE2呈低表达,其均为SAP患者死亡的影响因素,联合检测上述三项指标水平对SAP患者的预后有一定的评估价值。

miRNA-191-5p与微管相关蛋白1轻链3及Beclin-1在脓毒症急性肺损伤中的相关性

目的:探究脓毒症急性肺损伤患者miRNA-191-5p表达量与微管相关蛋白1轻链3及Beclin-1表达量的相关性。方法:收集2017年1月~2019年5月收治的80例确诊脓毒症急性肺损伤患者空腹血清,提取RNA,逆转录后应用荧光定量PCR检测脓毒症急性肺损伤患者miRNA-191-5p、微管相关蛋白1轻链3及Beclin-1表达水平,分析miRNA-191-5p表达量与微管相关蛋白1轻链3及Beclin-1表达量的相关性。结果:miRNA-191-5p高表达组和低表达组在年龄、性别、体质指数、心率、呼吸及体温方面比较,无显著差异(P>0.05);miRNA-191-5p高表达组微管相关蛋白1轻链3、Beclin-1表达量均高于miRNA-191-5p低表达组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:miRNA-191-5p可能与MAPLC3及Beclin-1在脓毒症急性肺损伤患者中的表达水平呈正相关。

自噬基因微管相关蛋白1轻链3参与模型兔激素性股骨头缺血坏死的发生与发展

背景:激素性股骨头缺血坏死至今仍是很棘手的难题,关于其发病机制的研究仍然具有重要意义。目的:探讨在兔激素性股骨头缺血坏死模型中,自噬基因微管相关蛋白1轻链3所发挥的作用及3-甲基腺嘌呤对其的影响。方法:健康5月龄新西兰大耳白兔36只,随机分成3组,每组12只。对照组单纯肌肉注射生理盐水,2 mL/只,每周1次,共4次;股骨头坏死组肌肉注射甲基强的松龙4 mg/kg,每周1次,共4次;3-甲基腺嘌呤组肌肉注射甲基强的松龙4 mg/kg,之后随即肌肉注射3-甲基腺嘌呤2μL/只,每周1次,共4次。实验第1,2,3,4周,各组每次分别处死3只兔,取双侧后肢股骨头。光镜下计数各组空缺骨陷窝;实时荧光定量PCR检测各组细胞内微管相关蛋白1轻链3基因的表达,Western blot鉴定各组微管相关蛋白1轻链3蛋白表达。结果与结论:①光镜观察结果显示:与对照组相比,股骨头坏死组和3-甲基腺嘌呤组标本空缺骨陷窝率均显著升高(P <0.05),但3-甲基腺嘌呤组上升率低于股骨头坏死组(P <0.05);②股骨头坏死组的微管相关蛋白1轻链3 mRNA呈高表达,同时表达量较3-甲基腺嘌呤组高(P <0.05),表示细胞自噬激活,3-甲基腺嘌呤对这一过程起到抑制作用;③结果检测到模型中微管相关蛋白1轻链3的表达,证实了细胞自噬在激素性股骨头缺血坏死发病过程中发挥了一定作用;3-甲基腺嘌呤抑制了微管相关蛋白1轻链3的表达,可以抑制激素性股骨头缺血坏死的发生及发展。

冠心病患者不同支架置入术后对支架内内膜增生及外周血Beclin-1,LC3-Ⅱ水平的影响

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病,CHD)患者不同支架置入术后对支架内内膜增生及外周血血清自噬相关蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)水平的影响。方法选取2018年1月至2021年1月于新乡市第二人民医院介入放射科收治的符合纳入标准的114例CHD患者作为研究对象,按照植入支架类型不同分为聚合物可降解药物涂层支架(BP-DES)组(n=51)和永久性聚合物药物涂层支架(PP-DES)组(n=63)。记录两组患者手术过程中靶血管病变相关情况及置入支架长度等,术后12个月采用血管内超声技术比较两组内膜增生情况,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血血清中Beclin-1,LC3-Ⅱ水平,术后随访1年,记录期间两组发生的主要不良心血管事件(MACE)以及支架内血栓等终点事件发生情况。结果BP-DES组靶血管病变总数大于PP-DES组,置入支架长度、病变长度小于PP-DES组(P<0.05);经超声造影检测,BP-DES组内膜中度增生率为56.86%,高于PP-DES组的38.10%,BP-DES组内膜重度增生率为19.61%,低于PP-DES组的39.68%(P<0.05);BP-DES组外周血Beclin-1,LC3-Ⅱ水平均低于PP-DES组(P<0.05);BP-DES组支架内血栓发生率为1.96%,低于PP-DES组的12.70%(P<0.05)。两组靶血管病变位置、程度、长度、内膜轻度增生率以及总MACE发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论与PP-DES相比,冠心病患者置入BP-DES可有效改善支架内内膜增生情况,抑制其过度增生,降低Beclin-1,LC3-Ⅱ水平以抑制心肌细胞自噬,同时还可减少支架内血栓的发生。

子痫前期患者胎盘中微小RNA-34a的表达及相关机制

目的探讨子痫前期孕妇胎盘组织中微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)表达改变的临床意义。方法选取东莞市人民医院2017年9月至2018年6月诊治的子痫前期产妇30例,另取正常行剖宫产的产妇30例作为对照。实时荧光定量PCR检测miR-34a和髓细胞白血病因子-1(myeloid cell leukemia-1,MCL-1)的表达,蛋白质印迹(Western blot)检测MCL-1蛋白和自噬相关蛋白微管相关蛋白I轻链3Ⅱ(microtubule associated protein 1 lightchain 3Ⅱ,LC3Ⅱ)的表达。计量资料采用t检验,相关性比较采用Spearman相关分析。结果子痫前期组胎盘组织中,其miR-34a的2-△△Ct值为0.217±0.035,高于对照组的0.126±0.028(P<0.01);MCL-1的2-△△Ct值为0.208±0.037,低于对照组的0.316±0.054(P<0.01);miR-34a表达与MCL-1表达呈负相关(r=-0.412,P<0.05);MCL-1蛋白表达灰度值为0.413±0.072,低于对照组的0.826±0.142(P<0.01);LC3Ⅱ蛋白表达灰度值为0.316±0.048,高于对照组的0.152±0.024(P<0.01)。Spearman相关分析显示子痫前期组胎盘组织中LC3Ⅱ蛋白表达与MCL-1蛋白表达呈负相关(r=-0.607,P<0.05),与miR-34a表达呈正相关(r=0.582,P<0.05)。结论miR-34a在子痫前期患者胎盘组织中高表达,可能抑制MCL-1基因,激活自噬,参与子痫前期的致病过程。

平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响

目的:通过测定Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,探讨平喘颗粒对哮喘大鼠自噬的抑制机理。方法:随机将30只Wistar大鼠分为3组,正常组、模型组、平喘颗粒组,每组10只。在第2次致敏后第4天开始给予给与中药药液灌胃。平喘颗粒组按体质量给予平喘颗粒溶液1 mL/100 g灌胃,激发阶段则每次激发前1h灌胃;正常组与模型组均予等量生理盐水灌胃。各组均于末次激发24 h后处死,取肺组织,光镜下观察肺组织的病理学改变。采用免疫组化SP法检测肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。结果:平喘颗粒组和模型组大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达均高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);平喘颗粒组Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达较模型组明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:平喘颗粒能减轻哮喘后的炎症反应,并且可抑制细胞自噬信号通路,从而保护肺部组织细胞,减轻哮喘发作。

MCAO模型大鼠不同缺血时相、不同脑区Thrombin与LC3Ⅱ/Ⅰ表达的相关性研究

目的研究缺血性中风瘀毒互结模型(简称“IS-YD”)大鼠在不同缺血时相、不同脑区凝血酶(Thrombin)与微管相关蛋白1轻链3(light chain 3,LC3)的动态性变化及二者的相关性。方法将128只SD雄性大鼠随机分为假手术组、IS-YD(2 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h)组,每组16只。分别于术后2、4、8、12、24、48、72 h取材前进行神经功能缺损评分,随即处死大鼠取出脑组织并分出大脑皮质与海马,2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色观察并计算每组大鼠的脑梗死体积,Western blot法检测大脑皮质与海马的Thrombin、LC3Ⅱ/Ⅰ比值的表达。结果与假手术组相比,IS-YD 12 h、24 h、48 h组神经功能缺损评分升高(P<0.05)。与假手术组及IS-YD 2 h、4 h组相比,IS-YD 8 h、12 h、24 h、48 h、72 h组脑梗死体积显著增大(P<0.01);与IS-YD 8 h组相比,IS-YD 12 h、24 h、48 h、72 h组脑梗死体积显著增大(P<0.01);与IS-YD 12 h组相比,IS-YD 48 h、72 h组脑梗死体积显著增大(P<0.01);与IS-YD24 h组相比,IS-YD 48 h、72 h组脑梗死体积显著增大(P<0.01);与IS-YD 48 h组相比,IS-YD 72 h组脑梗死体积显著增大(P<0.01)。与假手术组相比,IS-YD 12 h、24 h组皮质和海马Thrombin、LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著增强(P<0.05);与IS-YD 2 h、4 h组相比,ISYD 12 h、24 h组皮质和海马Thrombin、LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著增强(P<0.05);与IS-YD 8 h组相比,IS-YD 12 h、24 h组皮质LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著增强(P<0.01);与IS-YD 12 h组相比,IS-YD 48 h、72 h组皮质Thrombin、LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低(P<0.05),海马LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低(P<0.05);与IS-YD 24 h组相比,IS-YD 48 h、72 h组皮质和海马Thrombin、LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低(P<0.05)。两种蛋白呈现直线相关性,且皮质Thrombin与LC3Ⅱ/Ⅰ的密切程度为56.7%,海马Thrombin、LC3Ⅱ/Ⅰ的密切程度为53.3%。结论脑损伤后Thrombin与自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ在7个不同缺血时间点动态表达规律相似,并且具有高度相关性,同时明确了自噬变化最明显的两个时间点,也为进一步研究治疗脑梗死筛选了最佳药物反应时间点。

自噬相关基因LC3Ⅱ和LAMP-2a在鼻息肉中的表达及意义

目的探讨自噬相关基因LC3Ⅱ和LAMP-2a在慢性鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)中的表达及临床意义。方法应用HE染色将20例鼻息肉组织(实验组)区分成非嗜酸粒细胞性鼻息肉(non-eosinophilic nasal polyps,nENP)组、嗜酸粒细胞性鼻息肉(eosinophilic nasal polyps,ENP)组,每组10例,10例鼻中隔偏曲患者的下鼻甲组织(inferior turbinate,IT)作为对照组,应用IHC染色检测每例中LC3Ⅱ和LAMP-2a的表达强度,分别比较鼻息肉组和下鼻甲组之间差异以及nENP组、ENP组和IT组之间的差异。结果LC3Ⅱ在每组中的表达结果如下:nENP组为2.40±0.84,ENP组为3.30±0.67,NP(nENP+ENP)组为2.85±0.86,IT组为3.50±0.71,仅nENP组与ENP组、nENP组与IT组的表达强度差异有统计学意义(P<0.05)。LAMP-2a在每组中的表达结果如下:nENP组为0.80±0.63,ENP组为1.50±0.84,NP(nENP+ENP)组为1.15±0.81,IT组为1.70±0.82,仅nENP组与IT组的表达强度差异有统计学意义(P<0.05)。鼻息肉(nENP+ENP)中LC3Ⅱ和LAMP-2a的表达结果如下:LC3Ⅱ的表达强度(2.85±0.86)明显强于LAMP-2a(1.15±0.81),且它们之间的差异有统计学意义(P<0.05),但它们之间并没有显著的直线相关性(r=0.375,P>0.05)。结论自噬相关基因LC3Ⅱ和LAMP-2a在非嗜酸粒细胞性鼻息肉组织中的表达水平较下鼻甲组织显著降低,提示非嗜酸粒细胞性鼻息肉组织中大自噬以及分子伴侣介导自噬(chaperon-mediated autophagy,CMA)水平是降低的,而嗜酸性粒细胞(eosnophils,EOS)的浸润可能会促使鼻息肉组织中已经降低的大自噬水平提高,但不影响CMA。鼻息肉的自噬途径以大自噬为主,分子伴侣介导自噬(CMA)为辅。

高脂血症性急性胰腺炎大鼠胰腺组织NCX1、LC3 Ⅱ、Beclin-1、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达观察

目的观察高脂血症性急性胰腺炎大鼠胰腺组织钠钙交换蛋白1(NCX1)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、自噬相关基因Beclin-1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)蛋白表达。方法清洁级健康雄性SD大鼠40只随机分为A、B、C、D组各10只;A组制作高脂血症性急性胰腺炎模型,B组制作急性胰腺炎模型、C组制作高脂血症模型,D组仅禁食、禁饮后麻醉大鼠,1 m L/kg注射生理盐水。造模12 h时处死各组大鼠取胰腺组织,采用Western blotting法检测各组胰腺组织NCX1、LC3Ⅱ、Beclin-1、Caspase-3、Caspase-9蛋白。结果 A、B组NCX1、LC3Ⅱ、Beclin-1、Caspase-3、Caspase-9蛋白的相对表达量均高于C、D组,P均<0.05。A组LC3 II、Beclin-1、Caspase-3、Caspase-9蛋白的相对表达量均高于B组,P均<0.05。C、D两组NCX1、LC3Ⅱ、Beclin-1、Caspase-3、Caspase-9比较,P均>0.05。结论高脂血症性急性胰腺炎大鼠胰腺组织中NCX1、LC3Ⅱ、Beclin-1、Caspase-3、Caspase-9均高表达。NCX1、LC3Ⅱ、Beclin-1、Caspase-3、Caspase-9可能在高脂血症性急性胰腺炎的发生发展中发挥作用。

自噬相关基因Atg12和LC3-Ⅱ在脑缺血再灌注大脑表达的实验研究

目的:探讨局灶性脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIR)时大脑皮质自噬相关蛋白-12(autophagy related protein-12,Atg12)和自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ(autophagy microtubule-associated protein light chain 3 antibodyⅡ,LC3-Ⅱ)的激活规律,在此基础上探讨其对脑组织自噬的影响。方法:实验分为假手术组(sham组)和缺血再灌注组(CIR组),且CIR组下设CIR 0、6、12、24、48、72h共6个亚组。除sham组和CIR 24h组为每组20只外(其中10只用于模型鉴定),其余为每组10只。采用大脑中动脉栓塞术制备局灶性脑缺血再灌注模型,再灌注24 h后采用神经功能评分、2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色、脑组织含水量来鉴定脑缺血模型是否成功。采用免疫组化和免疫印迹方法检测大脑皮质Atg12和LC3-Ⅱ的表达规律。结果:与sham组比较,CIR 24h组可见明显的神经功能缺损、脑梗死和明显的脑水肿。免疫组化结果显示,Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6 h开始表达[阳性率分别为(15.49±4.18)%、(18.54±3.62)%],在24~48 h达高峰[(33.63±3.26)%、(29.62±1.73)%],72 h之后逐渐减弱[(24.90±3.96)%、(20.36±3.51)%]。免疫印迹结果显示,Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6 h开始表达[表达量为(0.372 3±0.076 5)、(0.148 4±0.011 5)],在24~48 h达高峰[(0.741 7±0.071 8)、(0.451 3±0.019 0)],72 h之后逐渐减弱[(0.365 0±0.042 0)、(0.245 1±0.030 3)]。结论:脑缺血时Atg12和LC3-Ⅱ在调节脑缺血的脑组织自噬方式中具有重要的作用。