自噬相关基因微管相关蛋白1A/1B轻链3B在结肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨自噬相关基因微管相关蛋白1A/1B轻链3B(MAP1LC3B)在结肠癌中的表达及临床意义。方法:采用癌症基因组图谱(TCGA)数据库中提供的临床和RNA-seq数据,以预测MAP1LC3B水平与结肠癌的关系。再利用免疫组织化学染色(IHC)、Western印迹等技术对人群样本(结肠癌组织40例,癌旁组织20例)中MAP1LC3B表达情况进行检测,验证其表达情况与临床病理参数包括肝转移与否、淋巴结转移与否及组织分化等的关系。结果:MAP1LC3B在结肠癌组织中的表达阳性率为72.5%,明显高于癌旁组织组,差异具有统计学意义(P=0.001);在MAP1LC3B阳性组中,21例(72.41%)合并肝转移(P=0.001),且患者的TNM分期多为Ⅴ期患者,占79.31%,与MAP1LC3B阴性组比较差异具有统计学意义(P=0.001),但MAP1LC3B的表达与结肠癌组织的分化程度(P=0.056)和淋巴结转移情况比较,差异无统计学意义(P=0.265)。与TCGA数据库等分析结果有所差异,但Kaplan-Meier生存分析表明,MAP1LC3B高表达与预后不良显著相关,差异有统计学意义(P<0.01),且MAP1LC3B表达水平与CD8+T细胞的功能最为密切。结论:自噬相关基因MAP1LC3B在结肠癌组织中异常表达,并参与介导了肿瘤的恶性生物学行为,影响患者预后。

电针对胰岛素抵抗大鼠肝脏组织自噬相关蛋白表达的影响

目的观察电针对胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)大鼠肝脏组织自噬相关蛋白表达的影响,探讨电针治疗IR的潜在机制。方法将Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,每组8只。电针干预选取中脘、关元、足三里及丰隆穴,每周干预3次,共8周。检测各组大鼠的餐后血糖(postprandial blood glucose,PBG)、腹腔糖耐量实验(intraperitoneal glucose tolerance test,IPGTT)血糖、葡萄糖输注率(glucose infusion rate,GIR)。采用高压尾静脉注射GFP-LC3质粒,观察肝细胞GFP-LC3荧光斑,Western Blot法检测大鼠肝脏组织中微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3B-Ⅱ,LC3B-Ⅱ)、p62(sequestosome 1,p62)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated-AKT,p-AKT)、胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)、磷酸化胰岛素受体底物-1(phosphorylated-IRS-1,p-IRS-1)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组PBG显著上升(P<0.01),GIR显著降低(P<0.01),IPGTT血糖水平明显上升(P<0.05),肝脏组织p62蛋白表达显著上升(P<0.01),LC3B-Ⅱ蛋白表达显著降低(P<0.01),IRS-1、p-AKT、p-IRS-1蛋白表达显著降低(P<0.01),GFP-LC3绿色荧光蛋白荧光密度显著降低(P<0.01);与模型组相比,电针组PBG显著降低(P<0.05),GIR显著上升(P<0.01),IPGTT血糖水平明显降低(P<0.05),肝脏组织p62蛋白表达显著降低(P<0.01),LC3B-Ⅱ蛋白表达显著上升(P<0.01),p-IRS-1蛋白表达显著上升(P<0.05),GFP-LC3绿色荧光蛋白荧光密度显著上升(P<0.01)。结论电针可以通过激活肝脏自噬提高全身与肝脏胰岛素敏感性,改善IR。

胃癌组织中自噬相关蛋白与上皮间质转化的关系及意义

目的探讨胃癌组织中自噬蛋白微管相关蛋白轻链3B(LC3B)和上皮间质转化(EMT)标志物的表达及其临床意义。方法随机选取2018年1月—2019年12月我院收治的胃癌患者术后癌组织110例和癌旁组织40例,采用免疫组织化学法检测LC3B、E-cadherin和vimentin的表达,并分析这些标志物与胃癌患者临床病理特征的关系。结果与癌旁正常组织相比,胃癌组织中LC3B和vimentin蛋白表达水平显著升高,E-cadherin表达水平显著降低(P<0.05);LC3B、E-cadherin和vimentin表达水平与肿瘤分化程度、T分期、TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),与年龄、性别和肿瘤大小无关(P>0.05);LC3B表达与vimentin呈正相关(r=0.320,P=0.001),与E-cad‐herin呈负相关(r=-0.484,P<0.001)。结论胃癌组织中LC3B、vimentin表达上调,E-cadherin表达下调,且三者与肿瘤分化程度、T分期、TNM分期及淋巴结转移密切相关,可能作为预测胃癌的潜在生物标志物。

人自噬相关基因LC3B真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建人自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B,MAP1LC3B)真核表达栽体,并鉴定其生物学功能。方法:通过RT-PCR方法扩增得到人MAP1LC3B cDNA;应用基因重组技术构建pEGFP-N1-LC3B真核表达载体,通过酶切和测序进行鉴定;倒置荧光显微镜下观察EBBS诱导4 h后pEGFP-N1-LC3B表达载体转染的HepG2.2.15细胞质中GFP-LC3B分布的变化。结果:通过测序鉴定,pEGFP-N1-LC3B真核表达载体序列正确,编码框正确;转染后的HepG2.2.15细胞经EBBS诱导4 h后,倒置荧光显微镜检测发现GFP-LC3B由散在分布向点状分布改变。结论:成功构建了人自噬相关基因LC3B真核表达载体,为进一步研究自噬在乙型肝炎病毒中的作用机制奠定了基础。

自噬相关基因LC3B真核表达载体构建及胃癌细胞自噬的观察

目的:构建人自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B,LC3B)真核表达载体,并鉴定其生物学功能。方法:通过RT-PCR方法扩增得到人LC3B c DNA,应用基因重组技术构建p EGFP-C1-LC3B真核表达载体,通过酶切和测序进行鉴定。将p EGFP-N1-LC3B表达载体转染胃癌细胞MKN1,倒置荧光显微镜观察饥饿诱导后细胞中EGFP-LC3B的表达及分布变化。结果:通过测序鉴定,p EGFP-N1-LC3B真核表达载体序列正确,编码框正确。转染后的MKN1细胞经饥饿诱导后,检测发现EGFP-LC3B由散在分布向点状分布改变,即生成细胞自噬体。结论:成功构建了人自噬相关基因LC3B真核表达载体,并证实饥饿诱导胃癌细胞自噬的发生,为进一步研究自噬在肿瘤中的作用机制奠定了基础。

黄芪多糖抑制黄嘌呤氧化酶诱导的肺癌A549细胞自噬并调节自噬相关蛋白的表达

目的探讨黄芪多糖(APS)对黄嘌呤氧化酶(XOD)诱导的肺癌A549细胞的自噬作用及微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、beclin1蛋白表达的影响。方法 A549细胞分为对照组、模型组、100μg/mL APS处理组、200μg/mL APS处理组及400μg/mL APS处理组,除对照组,其余4组均需XOD诱导24 h建立自噬模型。采用透射电镜观察自噬体的形态、单丹磺酰尸胺(MDC)染色荧光显微镜观察自噬体数量的变化, Western blot法检测LC3B、mTOR、beclin1蛋白水平。结果与空白组比较,模型组细胞自噬体数量增多,且LC3B、beclin1蛋白水平升高, mTOR蛋白水平降低;与模型组比较,(200、400)μg/mL APS处理组细胞自噬体数量显著减少, LC3B、beclin1蛋白水平降低, mTOR蛋白水平升高。结论 APS可降低XOD诱导的A549肺癌细胞自噬水平,并降低LC3B、beclin1蛋白表达、增加mTOR蛋白表达。

基于mTOR/Beclin1/LC3信号轴探讨制萎扶胃丸对胃癌前病变大鼠胃窦组织自噬的影响

目的:探讨制萎扶胃丸(ZWFW)对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃窦组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1轻链3(LC3)信号轴关键分子表达的影响。方法:SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,叶酸组,ZWFW低、中、高剂量组,除正常组常规饲养外,模型组、叶酸组、ZWFW低、中、高剂量组,采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)联合饥饱失常、乙醇灌胃、氨水自由饮用以及雷尼替丁饲料喂养五因素复合造模法建立PLGC大鼠模型后,分别用生理盐水、叶酸片水溶液(0.002 g/kg)、ZWFW低、中、高剂量水溶液(0.42,0.84,1.67 g/kg)予以治疗4周后剖腹取胃。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胃窦组织病理学变化,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化检测大鼠胃窦组织mTOR、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃窦组织胀大,胃壁变薄,胃黏膜色泽苍白,皱襞萎缩浅平,走行紊乱,可见结节及赘生物;HE染色示:与正常组比较,模型组胃黏膜腺体排列拥挤、紊乱,细胞形态不一,可见大量杯状细胞,细胞浆嗜碱性,细胞核大、深染、不规则,黏膜肌层浸润破坏;与模型组比较,ZWFW显著改善了胃黏膜腺体结构排列紊乱和细胞异型性等病理表现。与正常组比较,模型组大鼠胃窦组织m TOR mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),Beclin1和LC3B mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,ZWFW中、高剂量组胃窦组织mTOR mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),ZWFW低剂量组胃窦组织Beclin1、LC3B蛋白表达升高(P<0.05),中、高剂量组胃窦组织Beclin1、LC3B mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论:ZWFW可显著改善PLGC模型大鼠胃黏膜异常组织病理学表现,其机制可能与下调mTOR表达,上调Beclin1、LC3B表达进而促进自噬相关。

口腔扁平苔藓病损组织自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3B、p62和Beclin1的表达及意义

目的了解自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B, LC3B)、p62及自噬关键分子Beclin1在口腔扁平苔藓(oral lichen planus, OLP)病损组织中的表达变化及其与OLP临床病理特征的关系, 探讨细胞自噬在OLP病因机制中的作用及意义。方法于贵州医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙周黏膜科2017年10月至2019年12月的就诊患者中, 选取41例OLP患者的病损组织(OLP组, 21例糜烂型OLP, 20例非糜烂型OLP)及15例来自贵州医科大学附属口腔医院口腔颌面外科手术中收集的正常口腔黏膜组织(对照组), 采用免疫组织化学技术(immunohistochemistry, IHC)与实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-qPCR)检测OLP组织中LC3B、p62、Beclin1的蛋白及mRNA水平, 采用蛋白质印迹法检测上述41例OLP病损的16例组织(8例糜烂型OLP, 8例非糜烂型OLP)中LC3B、p62、Beclin1的蛋白表达量及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值。分析LC3B、p62、Beclin1及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值与OLP临床病理特征的关系。结果 IHC结果显示, OLP病损组织中LC3B、p62蛋白阳性表达率[分别为68%(28/41)、59%(24/41)]均显著高于对照组(分别为5/15、3/15)(χ^(2)=5.55, P=0.019;χ^(2)=5.55, P=0.015);糜烂型OLP组织中LC3B、p62蛋白阳性表达率[分别为86%(18/21)、76%(16/21)]均显著高于非糜烂型OLP[分别为50%(10/20)、40%(8/20)](χ^(2)=4.50, P=0.034;χ^(2)=5.53, P=0.019);OLP病损组织中Beclin1蛋白的阳性表达率[20%(8/41)]较对照组(7/15)显著降低(χ^(2)=4.13, P=0.042), 但Beclin1蛋白阳性表达率在OLP两型间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-qPCR结果显示, OLP组织中LC3B、p62 mRNA表达水平[分别为2.78(1.59, 6.15)、4.30(2.34, 6.29)]均显著高于对照组[分别为1.05(0.88, 1.21)、1.12(0.89, 1.36)](Z=-4.56, P<0.001;Z=-4.78, P<0.001), 糜烂型OLP组LC3B、p62 mRNA表达水平均显著高于非糜烂型OLP(Z=-2.87, P=0.004;Z=-2.95, P=0.003), 而Beclin1在OLP组织中的mRNA表达显著低于对照组(Z=-2.43, P=0.015), 但在OLP两型间差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白质印迹法结果显示, OLP组织中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值显著高于对照组(t=-2.45, P=0.021), 非糜烂型OLP组织中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值显著高于糜烂型OLP(t=-2.38, P=0.032)。Spearman相关性分析显示, LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值与OLP临床分型、基底细胞液化变性程度均呈显著负相关关系(r=-0.57, P=0.021;r=-0.54, P=0.032), 与病程及淋巴细胞浸润程度无显著相关性(P>0.05)。结论自噬相关因子LC3B、p62与Beclin1在OLP病损形成及发展中可能发挥了一定作用;与非糜烂型OLP相比, 糜烂型OLP的自噬水平相对不足, 这可能导致糜烂型OLP局部病损破坏程度加重;细胞自噬异常可能在OLP病损形成中起重要作用。

青光安颗粒剂对兔抗青光眼术后滤过道Beclin1和LC3B表达的影响

目的观察青光安颗粒剂对抗青光眼术后滤过道组织自噬相关蛋白Beclin1/微管相关蛋白轻链B(light chain 3B,LC3B)表达的影响。方法将30只成功建立慢性高眼压模型的新西兰白兔随机平均分为5组,除空白组(A组)外,其余各组均行常规小梁切除术,阳性对照组(B组)术中放置丝裂霉素C棉片,单纯手术组(C组)仅行常规小梁切除术,青光安组(D组)术后灌胃青光安颗粒剂混悬液,阴性对照组(E组)术后灌胃蒸馏水。干预14 d后,Western blot法检测滤过道组织Beclin1、LC3B-I、LC3B-II的表达量,RT-qPCR法检测Beclin1及LC3B mRNA的相对表达量。结果各手术组Beclin1蛋白平均表达量均显著高于A组(P<0.05),B组Beclin1蛋白平均表达量显著高于C组、D组与E组(P<0.05),D组Beclin1蛋白平均表达量高于C、E组(P<0.05);各手术组LC3B-II/LC3B-I均显著高于A组(P<0.05),B组LC3B-II/LC3B-I显著高于C、D、E组(P<0.05),D组LC3B-II/LC3B-I高于C、E组(P<0.05)。各手术组Beclin1 mRNA相对表达量均显著高于A组(P<0.05),B组Beclin1 mRNA相对表达量显著高于C组与E组(P<0.05),B组Beclin1 mRNA相对表达量与D组无明显区别(P>0.05);各手术组LC3B mRNA相对表达量均显著高于A组(P<0.05),B组LC3B mRNA相对表达量显著高于C组与E组(P<0.05),B组LC3B mRNA相对表达量与D组无明显区别(P>0.05)。结论青光安颗粒剂能通过促进滤过道组织Beclin1蛋白及mRNA的表达,诱导瘢痕组织的自噬,维持滤过道的通畅。

胃癌组织中miR-184、Beclin1、LC3B的表达及临床意义

目的探讨胃癌组织中miR-184、自噬相关基因Beclin1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达及临床意义。方法收集103例胃癌患者的临床及病理资料,通过荧光实时定量PCR技术测量miR-184、Beclin1及LC3B的表达情况,并分析其临床特征。采用Pearson相关分析法检验miR-184、Beclin1及LC3B的相关性。结果胃癌组织中miR-184、Beclin1及LC3B的表达量较癌旁组织下降(P均<0.05)。存在淋巴结转移及TNM分期Ⅲ-Ⅳ期患者胃癌组织中miR-184、Beclin1及LC3B的表达降低(P均<0.05)。miR-184和Beclin1、miR-184和LC3B、Beclin1和LC3B的表达量均呈显著正相关(r分别为0.845、0.787、0.793,P均<0.05)。结论胃癌组织中miR-184、Beclin1及LC3B的表达均降低,且与淋巴结转移和TNM分期密切相关,能够在一定程度上评估患者病情。

饥饿诱导胃癌细胞自噬发生及Beclin-1表达的变化

目的探讨饥饿诱导胃癌细胞MKN1自噬的发生及自噬相关蛋白Beclin-1表达的变化。方法培养胃癌细胞MKN1至对数生长期后,以无氨基酸培养液EBSS代替RPMI1640培养液培养细胞,培养12h后收集细胞,应用Western印迹和定量PCR(qRT-PCR)方法分别检测特异性标记自噬的微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)以及自噬相关蛋白Beclin-1的蛋白和mRNA表达。免疫荧光检测饥饿诱导后细胞自噬体的产生。结果饥饿处理12 h后,Western印迹和qRT-PCR检测LC3B和Beclin-1蛋白和mRNA表达与对照组比较均明显增加(P<0.05)。免疫荧光下可见点状自噬体。结论饥饿可以诱导胃癌细胞MKN1发生自噬,Beclin-1与饥饿诱导胃癌细胞MKN1的自噬相关,为进一步研究Beclin-1在胃癌细胞自噬中的作用机制奠定了基础。

LC3B、HDAC6和Nrf2在慢性阻塞性肺疾病急性加重患者外周血中的表达

目的研究自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)和核因子E2相关因子2(Nrf2)在慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)患者外周血中的表达水平及其临床意义。方法通过qRT-PCR检测21例健康体检组和36例AECOPD患者外周血单个核细胞(PBMC)中LC3B、HDAC6和Nrf2的表达水平,比较其在健康体检组和AECOPD患者间的差异;分析AECOPD患者外周血LC3B、HDAC6和Nrf2的表达水平与白细胞总数、单核细胞百分比、淋巴细胞百分比及中性粒细胞绝对值的相关性。结果 AECOPD患者外周血LC3B和HDAC6的表达水平均显著高于健康体检组(P<0.05),Nrf2的表达水平低于对照组(P<0.05);AECOPD患者外周血LC3B的表达水平与白细胞总数和中性粒细胞绝对值均呈正相关(P<0.05),AECOPD患者外周血Nrf2的表达水平与单核细胞百分比和淋巴细胞百分比均呈负相关(P<0.05)。结论 LC3B、HDAC6和Nrf2可能参与了AECOPD炎症反应的过程,这将为进一步研究自噬在AECOPD发病中的作用提供理论依据。

达氏鲟自噬基因MAP1LC3B克隆及其组织表达分析

【目的】掌握达氏鲟微管相关蛋白1A/1B轻链3B基因(MAP1LC3B)的表达模式,为后续研究MAP1LC3B基因功能及揭示达氏鲟的抗病分子机制提供理论依据。【方法】采用RACE技术从达氏鲟组织中克隆MAP1LC3B基因,通过ProtParam、TMpred、Phyre2及Singal 4.1等在线软件进行生物信息学分析,同时借助实时荧光定量PCR检测MAP1LC3B基因在达氏鲟不同组织中的表达情况。【结果】达氏鲟MAP1LC3B基因cDNA序列全长2208 bp,包含378bp的开放阅读框(ORF)、202 bp的5’端非编码区(5’-UTR)和1628 bp的3’端非编码区(3’-UTR),编码125个氨基酸。MAP1LC3B氨基酸序列含有GABARAP泛素结构域、Agt7结合位点、脂化位点和维管束蛋白结合位点。达氏鲟MAP1LC3B蛋白由18种氨基酸组成,其中谷氨酸(Glu)含量最高(占9.6%)、丙氨酸(Ala)含量最低(占1.6%);蛋白分子量为14743.01 Da,理论等电点(pI)为8.92,不稳定系数为65.12,总平均亲水性为-0.484,是一种不稳定的疏水性蛋白,且不存在跨膜结构,也无信号肽序列。MAP1LC3B基因在达氏鲟鳃、脑、皮肤、头肾、前肾、脾脏、中肾、心脏和肠道等组织中均有表达,以在鳃和肠道组织中的相对表达量较高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05)。【结论】达氏鲟MAP1LC3B基因具有较高的保守性,在鳃和肠道黏膜免疫组织中高表达,表明自噬参与达氏鲟黏膜免疫过程,调节机体免疫反应。

Beclin-1、P62、LC3B在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达变化

目的:探讨自噬相关蛋白Beclin-1、P62及微管相关蛋白轻链3B(microtubule-associated protein light chain 3B,LC3B)在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达及意义。方法:生长至对数生长期的肺炎链球菌标准株D39用无菌PBS调节浓度为1.5×109CFU/mL,采用鼻滴的方法对50只SPF级雌性Balb/c鼠(6~8周,16~20 g)进行处理,分别在感染后0、6、12、24、48 h收集Balb/c小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及肺组织,瑞氏-吉姆萨染色进行BALF细胞计数,HE染色观察肺组织病理学改变,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、P62、LC3B在肺组织中的表达水平,免疫荧光观察LC3B在肺组织中的表达情况。结果:HE染色显示,小鼠鼻饲肺炎链球菌后12 h及24 h后肺组织内出现大量炎症细胞浸润。BALF中总细胞数量及中性粒细胞数量于感染后6 h开始增高[(1.280±0.506)vs.(6.272±1.312),P=0.000;(0.000±0.000)vs.(3.456±1.308),P=0.000],在12 h时达到高峰[(1.280±0.506)vs.(19.456±0.997),P=0.000;(0.000±0.000)vs.(15.040±1.012),P=0.000],48 h后基本恢复正常水平[(1.280±0.506)vs.(3.520±0.933),P=0.005;(0.000±0.000)vs.(0.128±0.175),P=0.835]。Western blot结果显示:自噬相关蛋白Beclin-1于感染后6 h开始增加[(0.626±0.078)vs.(0.921±0.093),P=0.002],48 h时达到最高水平[(0.626±0.078)vs.(1.884±0.158),P=0.000];自噬相关蛋白P62于感染后6 h开始减少[(2.915±0.094)vs.(2.275±0.269),P=0.000],48 h时降低至最低水平[(2.915±0.094)vs.(1.178±0.142),P=0.000];自噬相关蛋白LC3B于感染后12 h开始升高[(0.747±0.197)vs.(1.429±0.318),P=0.006],24 h时达到高峰[(0.747±0.197)vs.(2.002±0.451),P=0.000],48 h后降低[(0.747±0.197)vs.(1.563±0.501),P=0.002]。免疫荧光显示:小鼠感染后12 h与24 h,肺组织中LC3B蛋白表达水平增加。结论:肺炎链球菌感染小鼠肺部后激活自噬的发生,且自噬在免疫调节过程中发挥着重要作用。

miR-155通过激活缺血性脑组织中的自噬参与神经损伤

目的探讨自噬与脑缺血之间的关系,以及miR-155在缺血脑组织中对自噬的影响。方法线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,行为学测试包括神经功能缺损评分和转角试验测评,Western blotting测定LC3B和p62蛋白表达,RT-PCR测定ULK1和Beclin基因水平。结果与MCAO组相比,过表达miR-155组自噬相关蛋白LC3 II和ULK1、Beclin 1基因显著增高,神经功能缺损评分升高;miR-155敲除小鼠中自噬蛋白LC3 II和ULK1、Beclin 1基因降低;而添加自噬抑制剂抑制miR-155诱导缺血自噬后,神经功能缺损评分降低,自噬相关蛋白LC3 II和ULK1、Beclin 1基因均下降。结论证实miR-155激活了缺血诱导的自噬,而应用自噬抑制剂可以阻滞miR-155的有害作用。在缺血性脑组织中沉默miR-155不仅可以抑制自噬,还可以减轻神经功能缺损评分,改善自噬导致的脑缺血损伤。

沉默多嘧啶束结合蛋白相关剪切因子诱导结肠癌细胞增殖抑制和凋亡的作用及机制

目的 探讨沉默多嘧啶束结合蛋白相关剪切因子（PSF）后对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 对人结肠癌DLD-1细胞构建针对PSF的小干扰RNA （siRNA-PSF）,转染48 h后,观察PSF基因沉默前后对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响,同时应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和Western blot检测PSF基因沉默前后结肠癌细胞中自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）的表达变化.结果 与未转染组和转染siRNA-vector组比较,转染siRNA-PSF后,结肠癌DLD-1细胞PSF表达明显下降（P＜0.05）,同时其增殖明显抑制,DNA增殖荧光值为25.05±3.94比132.88±8.73、127.61±8.02（P ＜0.05）,而凋亡明显增加,凋亡率为（54.6±5.5）％比（8.5±1.3）％、（10.1±2.0）％（P＜0.05）.FQ-PCR和Western blot检测显示沉默PSF后,结肠癌DLD-1细胞的LC3B表达也明显减少（P＜0.05）.结论 沉默PSF后通过抑制自噬蛋白LC3B表达诱导结肠癌细胞增殖抑制和凋亡.

带状疱疹病毒感染患者血清NF-κB和CXCL10与LC3B水平及其诊断价值

目的分析带状疱疹病毒感染患者核因子-κB(NF-κB)、趋化因子10(CXCL10)、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)及其诊断价值.方法选取2020年4月-2021年4月西南医科大学附属中医医院收治的113例带状疱疹病毒感染患者为研究组,另选取同期于医院体检的80名健康者为对照组;采用酶联免疫吸附法检测NF-κB、CXCL10、LC3B表达水平,分析其对带状疱疹病毒感染的诊断价值.结果研究组数字(NRS)评分、疼痛视觉模拟(VAS)评分、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)高于对照组(P<0.05),卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)低于对照组(P<0.05);与对照组相比,研究组NF-κB、CXCL10表达量高于对照组,LC3B表达量低于对照组(P<0.05);Logistic回归分析NF-κB、CXCL10、TNF-α,LC3B、FSH、LH、E2与带状疱疹病毒感染具有相关性(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线分析NF-κB、CXCL10、LC3B及三项联合预测带状疱疹病毒感染的曲线下面积(AUC)分别为0.850、0.825、0.816、0.937.结论带状疱疹患者血清NF-κB、CXCL10,LC3B对带状疱疹病毒感染具有较高预测价值.

芪玉三龙汤调节Beclin1,Atg5,LC3B表达以抑制肺癌肿瘤生长机制

目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(autophagy related genes,Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,LC3B)表达的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞(lewis lung cancer cell,LLC)构建肺癌移植瘤小鼠模型,造模成功后随机分为模型组、芪玉三龙汤组、顺铂组及联合组,每组18只移植瘤小鼠。模型组每日按照生理盐水20 mL·kg^-1灌胃;芪玉三龙汤组每日按照80.48 g·kg^-1灌胃;顺铂组在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液(DDP)0.4 mL;联合组每日按80.48 g·kg^-1灌胃给药,并分别在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液0.4 mL;连续治疗21 d剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态学改变。免疫组化检测肿瘤组织中Beclin1,LC3B蛋白表达和定位。蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Beclin1,Atg5,微管相关蛋白1轻链3-I(LC3B-Ⅰ)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)蛋白表达,并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织Beclin1,Atg5 mRNA转录水平。结果:芪玉三龙汤具有温和的移植瘤抑制作用,抑瘤率为31.2%;镜下观察芪玉三龙汤组肿瘤组织可见片状坏死的肿瘤细胞;免疫组化及Western blot实验表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够上调Beclin1,Atg5,LC3B蛋白的表达(P<0.01),并且能促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ;Real-time PCR结果表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够促进Beclin1,Atg5 mRNA的转录(P<0.01)。结论:芪玉三龙汤对肺肿瘤生长具有温和地抑制作用,其作用机制可能与上调自噬关键分子Beclin1,Atg5,LC3B表达,促进LC3B-Ⅰ向LC3B-Ⅱ转化有关。

Lnc001209调控PI3K/AKT/mTOR通路对Aβ清除在铝致认知功能损害中的影响

目的观察铝暴露导致认知功能损害中Lnc001209和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、β-淀粉样蛋白(Aβ)等在其中的作用机制。方法将无特定病原体级成年雄性SD大鼠随机分为对照组、空载体组、腺相关病毒(AAV)组、麦芽酚铝组、AAV+麦芽酚铝组,每组10只。采用侧脑室立体定位注射法,AAV组和AAV+麦芽酚铝组大鼠予5μL滴度为1×10^(12)vg/mL的过表达Lnc001209的AAV;空载体组大鼠予5μL滴度为1×10^(12)vg/mL的空载体AAV;对照组和麦芽酚铝组大鼠只进行侧脑室手术操作,不注射任何试剂。饲养14 d后按照1 mL/kg体质量给药体积,麦芽酚铝组和AAV+麦芽酚铝组大鼠隔天腹腔注射20μmol/kg体质量麦芽酚铝溶液;对照组、空载体组和AAV组大鼠隔天腹腔注射等体积0.9%氯化钠溶液,持续3个月。其后采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;取大鼠海马组织,采用酶联免疫吸附测定法检测Aβ表达,免疫荧光法检测微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)表达,蛋白质印迹法检测PI3K、AKT、mTOR及其对应磷酸化蛋白表达,反转录聚合酶链式反应法检测Lnc001209表达。结果(1)与对照组比较,麦芽酚铝组大鼠从Morris水迷宫实验第2天起逃避潜伏期均延长(P值均<0.05),海马组织中Aβ40、Aβ42、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化AKT(p-AKT)和磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白相对表达水平均增加(P值均<0.05),LC3B平均荧光强度和PI3K、AKT、mTOR蛋白相对表达水平均降低(P值均<0.05),Lnc001209相对表达水平亦降低(P<0.05)。(2)与麦芽酚铝组比较,AAV+麦芽酚铝组大鼠从Morris水迷宫实验第2天起逃避潜伏期均缩短(P值均<0.05),海马组织中Aβ40、Aβ42、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白相对表达水平均降低(P值均<0.05),LC3B平均荧光强度和PI3K、AKT蛋白相对表达水平均增加(P值均<0.05),Lnc001209相对表达水平亦增加(P<0.05)。结论铝可通过Lnc001209影响PI3K/AKT/mTOR蛋白通路,从而引起Aβ增多和神经元自噬减少,最终导致大鼠认知功能损害。

胆固醇转运抑制剂U18666A对星形胶质细胞自噬-溶酶体的影响

目的观察胆固醇转运抑制剂U18666A(UA)对星形胶质细胞自噬-溶酶体活性的影响。方法用5μg·mL-1UA作用于原代培养的星形胶质细胞12,24和48 h,用Western blot检测自噬标志蛋白LC3和溶酶体标志蛋白LAMP1的表达,用免疫荧光检测微管相关蛋白1A/1B轻链3(LC3)及溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)与淀粉样前体蛋白(APP)的定位表达。结果5μg·mL-1UA能增加星型胶质细胞LC3和LAMP1的蛋白表达,且LC3及LAMP1与APP在细胞内共定位表达。结论UA可能通过激活自噬-溶酶体系统活性,增强APP的代谢,促进β淀粉样蛋白的生成。