微管相关蛋白-1B在弥漫性轴索损伤中的表达变化与意义

目的 :观察微管相关蛋白-1B(microtubule-associate protein 1B,MAP1B)在SD大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后脑组织中表达的变化,探索其表达变化的意义。方法 :采用改良的Marmarou法建立SD大鼠DAI模型,分为空白对照组(10只,不予任何处理),假打击组(10只,给予致伤组相同的打击前准备,但不予以打击),致伤6 h组(10只),致伤1 d组(10只)和致伤3 d组(10只),分别于打击6 h、1 d、3 d后,处死动物,提取脑组织,结合Western blot和免疫组化方法,观察SD大鼠脑组织中MAP1B表达的变化。结果:Western blot结果显示致伤6 h组(0.50±0.07)、致伤1 d组(0.56±0.07)和致伤3 d组(0.50±0.06)中MAP1B表达水平较空白对照组(0.30±0.06;P=0.001,P=0.000,P=0.001)、假打击组(0.30±0.04;P=0.001,P=0.000,P=0.001)明显升高。免疫组化结果显示致伤6 h组(4.70±0.79)、致伤1 d组(4.78±0.86)和致伤3 d组(4.70±0.89)中MAP1B表达水平较空白对照组(4.06±1.15;P=0.023,P=0.007,P=0.023)、假打击组(3.90±1.46;P=0.002,P=0.000,P=0.002)明显升高。结论:SD大鼠DAI后脑组织中MAP1B表达水平上调,提示其参与了DAI后轴索损伤的病理改变过程,并可能在稳定、修复及再生受损轴索的机制中起着重要作用。

蛇毒神经生长因子对鼠视网膜神经节细胞微管相关蛋白-1B的影响

目的通过对视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）微管相关蛋白-1B（microtubule associated protein-1B,MAP-1B）的研究,观察蛇毒神经生长因子（venom nerve growth factor,vNGF）在鼠视神经夹伤后对RGCs的保护作用。方法将Wistar大鼠40只随机分为实验对照组、实验治疗组,每组20只。制作视神经夹伤模型,用头部宽1mm的微型血管夹夹伤大鼠右眼视神经后,实验治疗组向右眼玻璃体内注入vNGF 100 BU（0.025mL）。实验对照组向右眼玻璃体内注入0.025mL平衡盐液。2组的左眼均未做任何处理,作为正常对照组。于损伤后3d、7d、14d、30d、60d取材,在光镜下计数RGCs,透射电镜观察不同时间段各组视网膜形态学变化,并进行MAP-1B免疫组织化学染色分析。结果光镜下,伤后3～30d实验治疗组的RGCs数目高于实验对照组,差异有显著统计学意义（P〈0.01）,伤后2组RGCs数目均比正常对照组少,差异有显著统计学意义（P〈0.01）。伤后60d,实验治疗组与实验对照组之间的RGCs数目差异无统计学意义（P〉0.05）,实验治疗组、实验对照组与正常对照组差异有显著统计学意义（P〈0.01）。电镜下,伤后14d实验治疗组视网膜微管数目比实验对照组多,排列也较整齐。免疫组织化学结果：实验治疗组2周内MAP-1B表达逐渐增强,1个月时明显减弱;实验对照组3d时有MAP-1B表达,到2周时表达明显减弱。结论在视神经损伤早期,vNGF能减轻视神经夹伤后微管的损坏,提高MAP-1B的表达强度,提高RGCs的存活数量,对RGCs有明显的保护作用。

重症胰腺炎患者血清载脂蛋白B/载脂蛋白A1、微管相关蛋白1-轻链3和细胞间黏附分子-1水平在预测并发感染性胰腺坏死中的价值

目的观察重症胰腺炎(SAP)患者血清载脂蛋白B与载脂蛋白A1比值(ApoB/ApoA1)、微管相关蛋白1-轻链3(MAP1-LC3)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平,并分析其与患者并发感染性胰腺坏死(IPN)的关系和预测价值。方法选取2019年1月至2022年1月于该院收治的172例SAP患者作为SAP组。收集临床资料及外周静脉血标本,检测患者血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3和ICAM-1水平,同期选取该院70例体检健康者作为对照组。比较SAP患者与体检健康者的血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3和ICAM-1水平差异;根据SAP患者后续有无并发IPN分为IPN组和非IPN组。采用单因素及多因素分析比较两组患者临床资料,分析血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3、ICAM-1水平及其他相关因素与SAP患者并发IPN的关系;并通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清ApoB/ApoA1、LC3和ICAM-1水平用于预测SAP患者并发IPN的价值。结果SAP组血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3、ICAM-1水平均高于对照组(均P<0.05);单因素分析显示,IPN组ApoB/ApoA1、MAP1-LC3及ICAM-1水平均高于非IPN组(均P<0.05),多因素分析显示,ApoB/ApoA1(β=2.309,P=0.027)、MAP1-LC3(β=5.447,P=0.037)及ICAM-1(β=0.039,P=0.045)水平均是SAP患者并发IPN的影响因素。血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3及ICAM-1水平预测SAP患者并发IPN的曲线下面积(AUC)分别为0.761(95%CI:0.683~0.840)、0.765(95%CI:0.681~0.848)、0.882(95%CI:0.829~0.935);灵敏度分别为76.1%、68.7%、71.6%,特异度分别为61.0%、89.5%、91.4%。联合预测的AUC为0.957,灵敏度为85.1%,特异度为96.2%。结论血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3、ICAM-1水平是SAP患者并发IPN的影响因素,并发IPN的患者ApoB/ApoA1、MAP1-LC3和ICAM-1水平更高,这些指标对于预测SAP患者并发IPN具有一定的价值。

膀胱癌组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白的表达及与患者肿瘤特征、预后的相关性分析

目的观察膀胱癌组织中自噬基因Beclin1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白表达状况,并分析两者与预后的相关性。方法选取2020年1月—2021年8月新疆医科大学附属肿瘤医院病理资料完整的110例膀胱癌患者。观察患者膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达状况,记录病理参数,并对患者进行为期1年的随访。统计预后情况,观察不同病理参数及预后的膀胱癌患者膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达,并分析两者与患者预后的相关性。结果膀胱癌组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白高表达率较癌旁组织低,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白中低表达率较癌旁组织高(P<0.05)。高组织学分级、T_(2)~T_(4)分期、浸润性、淋巴结转移、预后不良的膀胱癌患者Beclin1蛋白高表达率低于低组织学分级、T_(a)~T_(1)分期、非浸润性、无淋巴结转移、预后良好的患者(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径、血管侵犯的膀胱癌患者Beclin1蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高组织学分级、T_(2)~T_(4)分期、浸润性、淋巴结转移、预后不良的膀胱癌患者LC3Ⅱ蛋白高表达率低于低组织学分级、T_(a)~T_(1)分期、非浸润性、无淋巴结转移、预后良好的患者(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径、血管侵犯的膀胱癌患者LC3Ⅱ蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。经Phi系数相关性分析,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白与预后不良均呈负相关(Phi=-0.277和-0.222,均P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:Beclin1高表达[O^R=3.892(95%CI:1.504,10.072)]、LC3Ⅱ蛋白中低表达[O^R=3.358(95%CI:1.165,9.677)]是预后不良的危险因素(P<0.05)。结论膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ表达与预后密切相关,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白中低表达是预后不良的危险因素。

失荅剌知丸对动脉粥样硬化模型大鼠微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ表达的影响

目的:观察失荅剌知丸对动脉粥样硬化模型大鼠自噬因子微管相关蛋白1轻链(LC3-Ⅱ)表达的影响。方法:将动脉粥样硬化模型SD大鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、失荅剌知丸组,采用光镜进行主动脉病理形态学观察,采用Westernblot检测LC3-Ⅱ表达情况。结果:大鼠主动脉病理检查结果显示,模型组内膜增厚,可见斑块,且斑块纤维帽破裂;阿托伐他汀组与失荅剌知丸组内膜均稍有增厚,可见少量脂质沉积,外膜基本完整。Westernblot检测结果显示,阿托伐他汀组与失荅剌知丸组的LC3-Ⅱ表达水平上调(P<0.05),且失荅剌知丸组上调更为明显(P<0.05)。结论:失荅剌知丸抗动脉粥样硬化斑块的形成机制与上调自噬因子LC3-Ⅱ有关。

血清微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3及高迁移率族蛋白B1在不同程度急性胰腺炎中的表达及意义

目的:探讨血清微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在不同程度急性胰腺炎(AP)中的表达及意义。方法:选取AP患者135为病例组,根据病情严重程度又分为轻症急性胰腺炎(MAP)组、中度重症急性胰腺炎(MSAP)组以及重症急性胰腺炎(SAP)组三个亚组,每组45例。选取同期体检健康者135例为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)对血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平进行测定。采用急性生理学和慢性健康状况评估Ⅱ(APACHEⅡ)对病例组患者进行评估。比较病例组与对照组血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平。比较不同程度AP患者血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平及APACHEⅡ评分。采用Spearman法分析血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1与AP患者APACHEⅡ评分的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1对AP的预测价值。结果:与对照组相比,病例组患者血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平明显升高(均P<0.05)。血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平及APACHEⅡ评分在不同程度AP患者中由高到低依次为SAP组、MSAP组、MAP组,各组间比较差异有统计学意义(均P<0.05)。血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1与AP患者APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.704、0.642、0.723,均P<0.05)。血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1对AP具有良好的预测价值。结论:血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1水平在AP患者中升高,且与病情严重程度呈正相关,对AP具有良好的预测价值。

艾灸对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响

目的观察艾灸对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠炎症因子白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)及滑膜细胞中自噬相关因子Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)表达的影响,探索艾灸治疗RA的作用机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、甲氨蝶呤组、艾灸组,每组9只。采用弗氏完全佐剂造模法制备RA大鼠模型。造模成功后艾灸组予艾灸足三里、关元,每次20 min,每天1次;甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤0.35 mg/kg灌胃,每周2次。空白组、模型组、甲氨蝶呤组每天给予艾灸组大鼠同样时长及强度的捆绑。每组均干预3周。观察大鼠一般情况,采用足趾容积测量仪检测大鼠左后肢足趾容积,ELISA法检测血清中IL-2含量,Western blot检测大鼠踝关节滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白相对表达量。结果与模型组比较,甲氨蝶呤组及艾灸组精神一般,反应尚可,体质量恢复,较活跃,摄食、饮水尚可,足部肿胀、红肿缓解,其局部炎症及全身多发性关节炎情况均轻于模型组。与空白组比较,模型组大鼠于造模后第3、10、17、24天足趾容积明显增大(P<0.01),结合一般情况,提示模型制备成功;甲氨蝶呤组、艾灸组足趾容积于第24天增大(P<0.05)。与模型组比较,甲氨蝶呤组造模后第17、24天足趾容积降低(P<0.05,P<0.01),艾灸组第10、17、24天足趾容积明显降低(P<0.01)。干预3周后,与空白组比较,模型组血清中IL-2含量明显升高(P<0.01),滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量明显上升(P<0.01);与模型组比较,甲氨蝶呤组、艾灸组血清中IL-2含量降低(P<0.05),艾灸组滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量下降(P<0.05)。结论艾灸能改善RA大鼠关节肿胀,降低IL-2含量,其作用机制可能是通过调节自噬因子Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量有关。

血清甲胎蛋白、p62及LC3-Ⅱ在HBV相关慢加急性肝衰竭预后评估中的应用

目的探讨血清甲胎蛋白(AFP)、自噬相关蛋白p62及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)在HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者预后评估中的应用价值。方法回顾性选取2020年1月—2023年1月云南省滇南中心医院(红河州第一人民医院)收治的102例HBV-ACLF患者作为观察组,另选取同期收治的慢性乙型肝炎患者、同期健康体检者各50例分别作为疾病对照组和健康对照组。测定并对比3组的血清AFP、p62及LC3-Ⅱ水平。对观察组患者的预后情况进行随访,对比预后良好与预后不良患者的血清AFP、p62及LC3-Ⅱ水平,并通过受试者工作特征曲线(ROC)分析血清AFP、p62及LC3-Ⅱ水平对HBV-ACLF患者预后良好的预测效能。结果3组的血清AFP、LC3-Ⅱ均有观察组>疾病对照组>健康对照组,血清p62有观察组<疾病对照组<健康对照组,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。随访显示观察组死亡31例(预后不良),生存71例(预后良好),病死率30.39%。预后良好组的血清AFP、p62水平高于预后不良组,血清LC3-Ⅱ水平低于预后不良组(P<0.05)。ROC曲线显示,当AFP值>115.65 ng/mL、p62>1.12 ng/mL、LC3-Ⅱ<53.07时,对HBV-ACLF患者预后良好均有一定的预测价值(AUC均>0.7)。与3项指标单用比较,3项联合对HBV-ACLF患者预后良好的诊断效能更高(AUC=0.878),诊断灵敏度、特异度分别为92.17%和85.68%。结论血清AFP、p62及LC3-Ⅱ均对HBV-ACLF患者预后有一定的预测价值,3项联合的预测效能更高。

miRNA-17-5p在慢加急性肝衰竭合并乙型病毒性肝炎患者中的表达及与自噬相关蛋白表达的关系

目的:探讨微小RNA-17-5p(miRNA-17-5p)在慢加急性肝衰竭合并乙型肝炎(HBV-ACLF)患者中的表达水平及其与自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)表达的相关性。方法:选取2019年2月至2020年5月HBV-ACLF住院患者82例为HBV-ACLF组,选取同期住院治疗的慢性乙型肝炎(CHB)患者79例作为CHB组,选取同期健康体检者86例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miRNA-17-5p水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清Beclin1、LC3-Ⅱ、总胆红素、白蛋白水平;PCR结合荧光探针的体外扩增技术测定血清HBV DNA载量;Pearson法分析HBV-ACLF患者血清miRNA-17-5p与Beclin1、LC3-Ⅱ、总胆红素、白蛋白、HBV DNA载量的相关性;受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miRNA-17-5p、Beclin1、LC3-Ⅱ水平对HBV-ACLF的诊断价值;多因素Logistic回归分析影响HBV-ACLF发生的因素。结果:HBV-ACLF组患者血清Beclin1、LC3-Ⅱ、总胆红素水平高于CHB组和对照组,miRNA-17-5p、白蛋白低于CHB组和对照组(P<0.05);CHB组患者血清Beclin1、LC3-Ⅱ、总胆红素水平高于对照组,miRNA-17-5p、白蛋白低于对照组(P<0.05);HBV-ACLF组患者血清HBV DNA载量高于CHB组(P<0.05)。HBV-ACLF组患者血清miRNA-17-5p水平与Beclin1、LC3-Ⅱ呈负相关(r=-0.580、-0.511;均P<0.05);Beclin1、LC3-Ⅱ与总胆红素、HBV DNA载量均呈正相关,与白蛋白呈负相关(P<0.05);miRNA-17-5p与总胆红素、HBV DNA载量均呈负相关,与白蛋白呈正相关(P<0.05)。血清miRNA-17-5p、Beclin1、LC3-Ⅱ水平诊断HBV-ACLF的曲线下面积(AUC)分别为0.862、0.784、0.886,特异性分别为88.4%、80.2%、81.4%,敏感度分别为74.4%、63.4%、81.7%;三者联合诊断的AUC为0.915,特异性为88.4%,敏感度为82.9%。Beclin1、HBV DNA载量是影响HBV-ACLF发生的独立危险因素(P<0.05),miRNA-17-5p是影响HBV-ACLF发生的保护因素(P<0.05)。结论:HBV ACLF患者血清miRNA-17-5p表达水平降低,与Beclin1、LC3-Ⅱ呈明显负相关,且三者均对HBV-ACLF有一定的诊断价值。

平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响

目的:通过测定Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,探讨平喘颗粒对哮喘大鼠自噬的抑制机理。方法:随机将30只Wistar大鼠分为3组,正常组、模型组、平喘颗粒组,每组10只。在第2次致敏后第4天开始给予给与中药药液灌胃。平喘颗粒组按体质量给予平喘颗粒溶液1 mL/100 g灌胃,激发阶段则每次激发前1h灌胃;正常组与模型组均予等量生理盐水灌胃。各组均于末次激发24 h后处死,取肺组织,光镜下观察肺组织的病理学改变。采用免疫组化SP法检测肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。结果:平喘颗粒组和模型组大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达均高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);平喘颗粒组Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达较模型组明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:平喘颗粒能减轻哮喘后的炎症反应,并且可抑制细胞自噬信号通路,从而保护肺部组织细胞,减轻哮喘发作。

冠心病患者不同支架置入术后对支架内内膜增生及外周血Beclin-1,LC3-Ⅱ水平的影响

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病,CHD)患者不同支架置入术后对支架内内膜增生及外周血血清自噬相关蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)水平的影响。方法选取2018年1月至2021年1月于新乡市第二人民医院介入放射科收治的符合纳入标准的114例CHD患者作为研究对象,按照植入支架类型不同分为聚合物可降解药物涂层支架(BP-DES)组(n=51)和永久性聚合物药物涂层支架(PP-DES)组(n=63)。记录两组患者手术过程中靶血管病变相关情况及置入支架长度等,术后12个月采用血管内超声技术比较两组内膜增生情况,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血血清中Beclin-1,LC3-Ⅱ水平,术后随访1年,记录期间两组发生的主要不良心血管事件(MACE)以及支架内血栓等终点事件发生情况。结果BP-DES组靶血管病变总数大于PP-DES组,置入支架长度、病变长度小于PP-DES组(P<0.05);经超声造影检测,BP-DES组内膜中度增生率为56.86%,高于PP-DES组的38.10%,BP-DES组内膜重度增生率为19.61%,低于PP-DES组的39.68%(P<0.05);BP-DES组外周血Beclin-1,LC3-Ⅱ水平均低于PP-DES组(P<0.05);BP-DES组支架内血栓发生率为1.96%,低于PP-DES组的12.70%(P<0.05)。两组靶血管病变位置、程度、长度、内膜轻度增生率以及总MACE发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论与PP-DES相比,冠心病患者置入BP-DES可有效改善支架内内膜增生情况,抑制其过度增生,降低Beclin-1,LC3-Ⅱ水平以抑制心肌细胞自噬,同时还可减少支架内血栓的发生。

心衰宁合剂对慢性心力衰竭大鼠心肌自噬相关蛋白表达的影响

目的探讨心衰宁合剂(XSNM)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌自噬效应蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链(LC)3-Ⅱ表达的影响。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照(卡托普利组,10 mg/kg),XSNM低、中、高剂量组(15.6、31.2、62.4 g/kg),采用阿霉素(ADR,2.5 mg/kg)腹腔注射复制CHF大鼠模型,空白组注射等量生理盐水,每周1次,造模6 w。模型复制结束后各组按剂量灌胃,空白组及模型组灌胃生理盐水,灌胃4 w。采用超声心动图检测大鼠心功能;苏木素-伊红(HE)及Masson染色观察大鼠心肌病理学变化情况;透射电镜观察大鼠心肌组织超微结构;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK)-MB含量;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western印迹检测大鼠心肌Beclin1、LC3-Ⅱ基因及蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)均显著增加(P<0.01),左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短分率(LVFS)显著降低(P<0.01),血清CK-MB明显升高(P<0.01),Beclin1、LC3-Ⅱ基因及蛋白表达较空白组明显升高(P<0.01);与模型组比较,XSNM各剂量组和卡托普利组LVEDD、LVESD均降低,LVEF、LVFS均升高,除XSNM低剂量组LVEDD外,差异均有统计学意义(P<0.01),XSNM显著降低血清CK-MB水平(P<0.01),XSNM各剂量组均降低Beclin1、LC3-Ⅱ基因及蛋白表达水平(P<0.01)。电镜结果显示模型组亚细胞结构损伤较重,XSNM有一定的改善作用,自噬小体数量有减少。结论XSNM可以改善CHF大鼠心脏功能,降低血清CK-MB含量,其机制可能与调节心肌细胞自噬有关。

维持性血液透析患者血清Beclin1和LC3-Ⅱ表达水平与血管钙化的相关性分析

目的探究维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者血清Beclin1和微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)表达水平与血管钙化(vascular calcification,VC)的相关性。方法选取2017年4月~2020年9月三河市燕郊人民医院收治的MHD患者145例作为研究对象,根据是否发生VC,将患者分为MHD未并发VC组(n=75)和MHD并发VC组(n=70)。根据VC评估结果将MHD并发VC患者分为轻度VC组(n=36)、中度VC组(n=24)、重度VC组(n=10);另选取同期在该院进行体检的健康人80例作为对照组。收集受试者一般资料,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测受试者血清Beclin1和LC3-Ⅱ的水平,Pearson法分析MHD患者血清Beclin1和LC3-Ⅱ水平与VC相关指标的相关性,二元logistic回归分析MHD患者发生VC的影响因素。结果与对照组相比,MHD未并发VC组和MHD并发VC组血清肌酐(serum creatinine,SCr)(72.48±18.26μmol/L vs 685.30±192.42μmol/L,733.98±206.35μmol/L)、血磷(1.28±0.42mmol/L vs 2.08±0.71mmol/L。2.86±0.87mmol/L)、血钙(1.54±0.45mmol/L vs 2.46±0.62mmol/L,2.98±0.77mmol/L)、全段甲状旁腺激素(intact parathyroid hormone,iPTH)(58.10±17.36pg/ml vs 634.58±172.44pg/ml,769.48±195.02pg/ml)水平升高,差异有统计学意义(F=100.197~500.960,均P<0.05);血清血红蛋白(hemoglobin,Hb)(134.82±35.16g/L vs 112.78±32.85g/L,103.66±27.91g/L),Beclin1(8.09±2.16μg/L vs 5.65±1.43μg/L,2.56±0.73μg/L)和LC3-Ⅱ(45.16±5.15μg/L vs 36.31±3.42μg/L,27.47±2.76μg/L)水平降低,差异有统计学意义(F=18.748~372.522,均P<0.05);与MHD未并发VC组相比,MHD并发VC组血磷、血钙及iPTH水平升高(t=7.136~9.723,均P<0.05),血清Beclin1和LC3-Ⅱ水平降低(t=16.605,18.982,均P<0.05)。轻度VC组、中度VC组和重度VC组血清Beclin1(4.35±0.71μg/L,3.49±0.57μg/L和1.91±0.26μg/L)和LC3-Ⅱ(31.12±3.32μg/L,25.65±2.62μg/L vs 20.47±1.76μg/L)水平依次降低,差异均有统计学意义(F=366.298,296.025,均P<0.05)。MHD患者血清Beclin1水平与血磷、血钙及iPTH均呈负相关(r=-0.674,-0.682,-0.597,均P<0.05);血清LC3-Ⅱ水平与血磷、血钙及i PTH也呈负相关(r=-0.648,-0.703,-0.674,均P<0.05)。二元logistic回归分析发现,Beclin1和LC3-Ⅱ水平偏低是MHD患者发生VC的危险因素(P<0.05)。结论MHD并发VC患者血清Beclin1和LC3-Ⅱ水平降低,与VC严重程度有关,是MHD患者发生VC的危险因素,可作为预测MHD患者发生VC的潜在生物学标志物。

IFN-γ,caspase-3,LC3-II在原发性干燥综合征唇腺中的表达及其相关性

目的:检测干扰素γ(IFN-γ)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3-I I (LC 3-I I)在原发性干燥综合征(p r i m a r ySj?g re n’ ss y n d ro m e, p S S)与非干燥综合征患者唇腺中的表达,探讨三者与唇腺灶性指数、血清抗核抗体滴度、补体及免疫球蛋白之间的关系,为进一步探索p SS发病机制提供依据。方法:收集p SS患者及怀疑p SS但最终排除诊断的患者的唇腺各19例,应用免疫组织化学检测组织样本中IFN-γ,caspase-3,LC3-II的表达,统计分析p SS患者及非p SS患者之间三者表达的差异性及三者与唇腺淋巴细胞浸润程度及自身免疫活化程度之间的相关性。结果:IFN-γ主要表达于唇腺中浸润的炎性细胞的细胞质中,caspase-3主要表达于唇腺腺泡上皮细胞及导管上皮细胞的细胞质中,LC3-II在炎性细胞和唇腺上皮细胞的细胞质中均有表达。IFN-γ,caspase-3,LC3-II(上皮细胞)、LC3-II(炎性细胞)在p SS及非p SS患者唇腺中的表达具有显著差异(均P<0.001)。IFN-γ在唇腺中的表达与caspase-3,LC3-II(上皮细胞)、LC3-II(炎性细胞)、灶性指数、抗核抗体滴度存在正相关性(r=0.549,0.822,0.757,0.762, 0.560,均P <0.001)。Caspase-3在唇腺中的表达除与I F N-γ之外,还与LC3-II (上皮细胞)、LC3-II(炎性细胞)、灶性指数、血清Ig A、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)水平呈正相关(r=0.646,P<0.001;r=0.454,P=0.004;r=0.688,P<0.001;r=0.376,P=0.020;r=0.337,P=0.039)。LC3-II (上皮细胞)在唇腺中的表达除与IFN-γ, caspase-3之外,还与L C 3-I I (炎性细胞)、灶性指数、抗核抗体滴度呈正相关(r=0.800,P<0.001;r=0.788,P<0.001;r=0.467,P=0.003)。LC3-II (炎性细胞)在唇腺中的表达除与I F N-γ, caspase-3, LC3-II (上皮细胞)之外,还与灶性指数、抗核抗体滴度、类风湿因子呈正相关(r=0.727,P<0.001;r=0.459,P=0.004;r=0.410, P=0.011)。结论:I FN-γ, caspase-3, LC3-I I在pSS患者唇腺中高表达,三者之间存在相关性,且三者均与唇腺灶性指数及抗核抗体滴度呈正相关,提示II型干扰素通路的活化及唇腺上皮细胞的凋亡和自噬及炎性细胞自噬可能在p SS自身免疫活化中发挥重要作用,值得进一步探索。

BDNF促进新生期视网膜神经细胞MAP-1B表达的实验研究

目的研究脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对视网膜神经细胞生长的影响及其可能机制,为治疗相关视网膜疾病提供依据。方法以新生小牛视网膜为研究对象,以细胞培养、神经营养因子药物诱导、PCR和免疫组化为研究手段,检测BDNF作用2d、5d、7d后,微管相关蛋白-1B(microtubule associated proteins-1B,MAP-1B)的表达情况,以明确BDNF对视网膜神经细胞生长和轴突延伸的影响。结果BDNF作用2d后,视网膜神经细胞贴壁迅速,PCR结果显示MAP-1B的cDNA表达含量增加,表达强度之比为0.338±0.010;BDNF作用5d后,视网膜神经细胞内MAP-1B基因表达量继续增加,表达强度之比为0.383±0.020;BDNF作用7d后,视网膜神经细胞内MAP-1B基因表达量仍继续增加,表达强度之比为0.474±0.030;均明显高于对照组。蛋白表达增多、密度增大和分布改变亦呈规律性,MAP-1B在生长比较旺盛的区域分布偏多。随时间推移,蛋白分布由核周向胞浆和突起部位扩展,呈极性分布。50μg·L-1的BDNF对神经细胞生长和轴突延伸起到促进作用。结论BDNF对小牛视网膜神经细胞生长有明显的促进作用,能加速细胞增生,增强细胞活性,并能促进突起延伸,增强轴突延伸的极性。

大鼠蛛网膜下腔出血后细胞外调节蛋白激酶1/2激活介导海马区神经细胞自噬

目的探讨大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后海马区细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)激活与神经细胞自噬的关系。方法 120只雄性SD大鼠随机分成假手术组、SAH组、ERK1/2抑制剂U0126组、自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)组。采用枕大池二次注血法制作SAH大鼠模型;U0126组和Rap组分别于造模前30min侧脑室注射U0126(5μg/μL)和Rap(10nmol/μL)。光镜观察海马区神经细胞形态结构;免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测海马区磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、ERK1/2 mRNA和自噬标志蛋白(Beclin-1和Beclin-1mRNA、LC3-Ⅱ和LC3mRNA)表达水平。结果与假手术组比较,SAH组神经细胞死亡率增加(14.9%±5.7%,28.3%±9.8%,44.2%±10.9%)(q值依次为27.56、35.65、44.81;均P<0.05),ERK1/2 mRNA、Beclin-1 mRNA和LC3 mRNA水平增加(1.83±0.01,2.82±0.06,1.34±0.04;1.46±0.02,1.76±0.02,1.35±0.02;1.52±0.04,1.89±0.01,1.31±0.04)(q值依次为42.99、60.66、48.08,71.26、72.46、49.50,48.49、82.40、41.18;均P<0.05),p-ERK1/2、Beclin-1和LC3–Ⅱ蛋白水平增加(均P<0.05);与SAH组比较,U0126组神经细胞死亡率增加(19.6±6.5%,36.2±7.7%,58.2±12.7%)(q值依次为9.59、10.43、14.66;均P<0.05),U0126组ERK1/2 mRNA、Beclin-1 mRNA和LC3 mRNA表达降低(1.23±0.02,1.40±0.02,1.12±0.02;1.22±0.04,1.48±0.06,1.24±0.03;1.34±0.04,1.33±0.02,1.14±0.04)(q值依次为75.66、65.35、31.11,37.18、26.70、15.56,16.79、51.85、22.58;P<0.05),p-ERK1/2、Beclin-1和LC3–Ⅱ蛋白水平降低(P<0.05);与SAH组比较,Rap组神经细胞死亡率降低(9.1%±4.6%,18.8%±8.6%,28.21%±9.2%)(q值依次为11.86、12.54、16.74;均P<0.05),Rap组Beclin-1mRNA和LC3mRNA增加(1.78±0.02,2.27±0.05,1.86±0.04;1.97±0.06,2.31±0.08,1.85±0.00)(q值依次为49.57、48.63、72.12、41.96、38.88、71.73;P<0.05),Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白增加(P<0.05),ERK1/2 mRNA变化差异无统计学意义(q值依次为2.63、2.65、2.83,P>0.05),p-ERK1/2蛋白变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SAH后激活的ERK1/2激活,可促进Beclin-1和LC3-Ⅱ表达介导神经细胞丢失。

吉西他滨+顺铂与紫杉醇+顺铂方案治疗复发鼻咽癌的疗效及对Beclin-1、LC3-Ⅱ和CYFRA21-1水平的影响

目的探讨吉西他滨+顺铂(GP)方案与紫杉醇+顺铂(TP)方案治疗复发鼻咽癌的疗效及对血清Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)水平的影响。方法选取2015年1月至2017年3月在秦皇岛市海港医院治疗的110例复发鼻咽癌患者作为研究对象,根据化疗方案不同分为GP组(n=56)和TP组(n=54)。其中,GP组给予GP方案治疗,TP组给予TP方案治疗,3周为1个疗程,共治疗3个疗程。比较两组患者的近期疗效,治疗前后血清Beclin-1、LC3-Ⅱ、CYFRA21-1水平,不良反应发生率及生存情况。结果GP组的总有效率为60.71%(34/56),TP组为53.70%(29/54),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。化疗后3个月,两组患者的血清Beclin-1、LC3-Ⅱ、CYFRA21-1水平均降低,且GP组低于TP组[(53±20)ng/L比(79±20)ng/L,(68±24)ng/L比(80±21)ng/L,(31±10)mg/L比(67±10)mg/L],各指标组间、时点间、组间和时点间交互作用差异有统计学意义(P<0.01)。两组患者白细胞减少、胃肠道反应、血小板减少和肝功能异常的发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。GP组和TP组的中位生存时间分别为31个月(95%CI 28.36~33.64)和30个月(95%CI 28.43~31.57),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论GP与TP方案治疗复发鼻咽癌的疗效相似,相较于TP方案,GP方案能明显降低患者的血清Beclin-1、LC3-Ⅱ、CYFRA21-1水平。

新风胶囊通过调节自噬相关蛋白的表达改善佐剂关节炎大鼠的肺功能

目的观察新风胶囊(XFC)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜、肺组织自噬相关基因(ATG)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)和beclin 1的影响。方法将大鼠随机分为正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、来氟米特(LEF)组、XFC组,每组10只,除NC组外均将Freund完全佐剂(0.1 m L/只)注射于每只大鼠右后足跖皮内以致炎,第10天在尾根部注射Freund完全佐剂0.05 m L加强免疫,复制AA模型。致炎后第13天给药。NC组、MC组给予生理盐水灌胃,每天1次;LEF、XFC组给予相应药物灌胃,每天1次,连续给药30 d。观察大鼠足跖肿胀度、关节炎指数、肺功能,ELISA检测血清细胞因子B细胞刺激因子(BAFF)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-4、IL-10表达,透射电镜观察滑膜、肺组织自噬小体,反转录PCR检测大鼠滑膜、肺组织ATG5、ATG7、ATG12 mRNA,Western blot法检测大鼠滑膜、肺组织LC3-Ⅱ、beclin 1的蛋白表达。结果 XFC组大鼠肺功能参数、血清IL-4、IL-10表达升高;滑膜、肺组织自噬体及自噬溶酶体较MC组增加;血清IL-1β、BAFF表达及滑膜组织ATG7、ATG12 mRNA降低,肺组织ATG5、ATG7 mRNA降低,ATG12 mRNA升高;滑膜组织、肺组织LC3-Ⅱ、beclin 1升高。结论 XFC通过调节AA大鼠滑膜、肺组织细胞自噬,改善肺功能。

大鼠蛛网膜下腔出血后海马区磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2表达与细胞自噬的关系

目的探讨大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后海马区细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)表达与神经细胞自噬的关系。方法采用枕大池二次注血法制作SAH大鼠模型,将120只雄性SD大鼠采用数字表法分成假手术组(Sham)、SAH组、U0126(ERK1/2抑制剂)低剂量组及U0126高剂量组。低剂量和高剂量U0126组分别于造模前30min侧脑室注射U0126 5和10g/L。水迷宫行为学测试大鼠的行为学变化;光镜观察海马区神经细胞形态结构;免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)和自噬标志蛋白(Beclin-1及LC3-Ⅱ)的表达水平。结果与Sham组比较,SAH组大鼠在72h的逃避潜伏期时间明显延长、穿台次数明显减少(P<0.05),各时间点神经元存活比率均明显降低,且SAH组p-ERK1/2,Beclin-1及LC3-Ⅱ表达均增加,于24h达高峰;与SAH组比较,低、高剂量U0126组大鼠相应时间点的潜伏期明显延长、穿台次数明显减少(P<0.05),各时间点神经元存活比率均明显降低,且p-ERK1/2,Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达及存活神经细胞比率降低(P<0.05);与低剂量U0126组比较,高剂量U0126组的大鼠相应时间点的逃避潜伏期明显延长、穿台次数明显减少(P<0.05),p-ERK1/2及存活神经细胞比率降低(P<0.05),但2组间的Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白比较差别均无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠SAH后海马区p-ERK1/2激活对神经细胞有保护作用,且这种保护作用与神经细胞自噬有关。

慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者血清自噬相关蛋白水平及其临床意义探讨

目的探讨慢加急性乙型肝炎肝衰竭(HBV-ACLF)患者血清p62、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和Beclin1水平变化及其临床意义。方法2018年9月~2020年9月我院收治的HBV-ACLF患者60例和同期体检的健康人65例,计算终末期肝病模型评分(MELD),采用ELISA法测定血清p62、Beclin1和LC3-Ⅱ水平;应用受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)评估指标对HBV-ACLF患者预后的预测效能。结果60例HBV-ACLF患者血清LC3-Ⅱ和Beclin1水平分别为(66.8±13.5)ng/mL和(11.7±3.6)ng/mL,均显著高于健康人【分别为(35.8±6.2)ng/mL和(8.2±2.9)ng/mL,P<0.05】,而血清p62水平为(2.5±0.9)ng/mL,显著低于健康人【(4.5±1.6)ng/mL,P<0.05】;在治疗观察90 d,本组HBV-ACLF患者死亡18例(30.0%);入院时死亡组血清LC3-Ⅱ、Beclin1和MELD评分为(76.25±12.1)ng/mL、(10.9±3.2)ng/mL和(20.1±3.3)分,均显著高于生存组【分别为(62.8±10.2)ng/mL、(13.4±3.5)ng/mL和(16.7±4.6)分,P<0.05】,而血清p62水平为(1.7±0.6)ng/mL,显著低于生存组【(2.9±0.8)ng/mL,P<0.05】;ROC曲线分析发现,以血清p62<2.2 ng/mL、LC3-Ⅱ>70.3 ng/mL和Beclin1>12.6 ng/mL为截断点,预测HBV-ACLF患者预后不良的AUC分别为0.856、0.820和0.765,三者联合预测的AUC为0.910,与以MELD评分>18.3分为截断点的预测效能为0.917相差无几。结论应用血清p62、LC3-Ⅱ和Beclin1水平预测HBV-ACLF患者预后有一定的实用意义,值得进一步动态观察。