神经干细胞定向分化神经元微管相关蛋白-tau的表达

目的:研究神经干细胞向神经元定向分化过程中微管相关蛋白-tau的表达变化。方法:采用细胞培养术、免疫荧光术及免疫印迹法对神经干细胞向神经元定向分化过程中微管相关蛋白-tau表达变化进行观察。结果:在神经干细胞向神经元定向分化过程中,tau蛋白在分化初期以核周附近分布明显,随神经元的成熟均匀密集分布于胞质中及突起内,tau蛋白的表达量逐渐增加。结论:在神经干细胞向神经元定向分化过程中伴随有微管相关蛋白-tau的表达变化,随着神经元的成熟,构成细胞骨架,维持细胞形态。

抑郁大鼠海马微管相关蛋白pMAP-2和p-Tau表达的研究

目的:观察微管蛋白p MAP-2和p-Tau在抑郁大鼠海马的表达变化情况,探讨海马微管蛋白与抑郁症的关系和意义。方法:通过利用慢性不可预见性温和应激(chronic unpredicted mild stress,CUMS)建立大鼠抑郁症模型,对照组和模型组分别采用糖水偏好实验、旷场实验以及Morris水迷宫对其行为进行学检测,采用尼氏染色观察海马神经元的形态学变化,对照组和模型组造模后1、7、14、28 d分批处死大鼠,用Western Blot方法检测海马组织中p-MAP-2和p-Tau的蛋白表达水平,免疫荧光双标观察海马组织中p-MAP-2和p-Tau定位分布。结果:糖水偏好实验:模型组糖水消耗量和糖水偏好百分比分别低于对照组(P<0.01);旷场实验:模型组行走总路程、中央活动时间、直立次数和修饰行为分别低于对照组(P<0.01);Morris水迷宫模型组平均逃避潜伏期高于对照组(P<0.01)。CUMS后1 d大鼠海马p-MAP-2和p-Tau蛋白的表达低于对照组,7 d后开始升高,14 d明显高于对照组,28 d仍略高于对照组。p-MAP-2和p-Tau免疫荧光双标结果显示:部分神经元的胞浆内p-MAP-2和pTau同时表达,表明p-MAP-2和p-Tau有部分共定位。结论:p-MAP-2和p-Tau在抑郁模型大鼠海马出现先降低后增高的现象,因此我们推测在应激抑郁症发病过程中,p-MAP-2和p-Tau蛋白表达的变化可能影响微管的稳定性,破坏细胞骨架稳态,从而影响海马神经元的结构改变。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对脑缺血再灌注大鼠脑皮质中热休克蛋白70、微管相关蛋白轻链3蛋白表达和神经元超微结构的影响

目的应用不同浓度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)干预脑缺血再灌注大鼠,检测热休克蛋白70(HSP70)和微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白的表达,观察其对神经元超微结构的影响。方法成年雄性SD大鼠60只,随机分成5组:假手术组(sham)、缺血再灌注组(IR),Cys C低浓度组(Cys C1)、Cys C中浓度组(Cys C2)、Cys C高浓度组(Cys C3),每组12只。采用线栓法制备脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h再灌注24 h后进行改良神经功能损伤严重程度评分(m NSS)。Western blotting半定量检测损伤中心脑皮质组织中HSP70、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达;免疫组织化学法检测HSP70、LC3的阳性细胞个数;免疫荧光双标记法检测皮质神经元自噬相关蛋白LC3和神经元核抗原(Neu N)共染的阳性细胞平均吸光度值;透射电子显微镜下观察神经元超微结构的变化。结果与IR组相比,Cys C1、Cys C2组m NSS评分明显减少(P<0. 05),HSP70的表达较IR组明显升高(P<0. 01);而Cys C3组m NSS评分升高,与IR组差别无显著性(P>0. 05); Cys C3组HSP70的表达明显降低(P<0. 01); Cys C各浓度组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达有不同程度的升高(P<0. 01); LC3和Neu N共染阳性细胞平均吸光度逐渐增强(P<0. 05);透射电子显微镜结果显示,Cys C1、Cys C2组神经细胞的超微结构有所改善,而Cys C3组脑皮质神经细胞损伤较重。结论 Cys C可能在一定浓度范围内对缺血再灌注损伤神经细胞有保护作用。浓度过高则导致神经细胞自噬性死亡。

磁刺激对小鼠海马原代神经元即刻早期基因和细胞骨架蛋白表达的影响

目的：观察磁刺激对小鼠海马原代神经元c-fos、活性调节的细胞骨架蛋白（Arc）和微管相关蛋白2（MAP2）的表达及神经元突起生长的影响，探讨磁刺激对细胞突起生长的影响机制。方法：体外培养的海马原代神经元，分为对照组，假刺激组，20％（20％强度组）、30％（30％强度组）、40％最大刺激强度组（40％强度组），24h后开始刺激，频率1Hz，最大输出强度3．7T。连续刺激5d后应用荧光显色检测c-fos、Arc和MAP2阳性神经元免疫荧光强度，计数MAP2阳性神经元多突起神经元个数及细胞突起长度，并应用免疫印迹和RT-PCR技术对免疫荧光显色结果进行验证。结果：磁刺激能促进小鼠海马原代神经元突起数目和长度的生长，3个强度组多突起神经元（n≥2）占总神经元的比例以及海马原代神经元突起长度均高于对照组，且30％强度组高于20％、40％强度组，结果有统计学意义。免疫荧光显色30％强度组c-fos阳性神经元比例、Arc和MAP2免疫荧光强度高于相关对照组，差异有统计学意义。免疫印迹和RT-PCR结果同免疫荧光显色结果一致。结论：磁刺激能促进体外培养的海马原代神经元突起生长，其机制可能和c-fos、Arc和MAP2的表达上调有关。

灵芝酯溶性提取物诱导PC12细胞分化的研究

目的研究灵芝酯溶性提取物对PC12细胞分化的影响。方法采用PC12细胞分散培养法，观察PC12细胞在灵芝的酯溶性提取物及其灵芝有效部位B2的诱导下突起生长阳性细胞的百分比，用神经元特异性标记物微管相关蛋白-2（MAP-2）单克隆抗体进行免疫荧光标记，荧光显微镜下观察MAP-2阳性的细胞。结果生长在DMEM培养基的PC12细胞，呈圆形或椭圆形，无突起或短突起（小于胞体直径1倍）生长；加入10ng/ml NGF 72h后，可见PC12细胞呈现扁平多角形，有多个细长突起生长，突起生长阳性细胞的百分比显著增高79．67±4．36；

GP73及肿瘤相关巨噬细胞在肝癌组织中的表达及临床意义

目的检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中高尔基体蛋白73(GP73)、CD68、CD206的表达情况,并探讨GP73与CD68、CD206的相关性及临床意义。方法采用基于酪氨酸信号放大(tyramide signal amplifica-tion,TSA)技术的多标记免疫荧光染色方法,在129例包含肝癌及其癌旁正常组织的组织芯片(TMA)上同时区别标记GP73、CD68、CD206 3种抗原及4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色,并使用自动MSI系统(Vectra,Perkin Elmer,Waltham,MA)定量分析三者表达的相关性,判断与肿瘤预后的相关性。结果肝癌组织CD206的表达含量与GP73水平呈正相关(P <0. 001),而CD68的表达与GP73无明显相关性(P=0. 1414);低表达GP73的肝癌患者生存率与GP73高表达的肝癌患者差异无统计学意义(P=0. 8078),低表达CD206的肝癌患者生存率高于CD206高表达肝癌患者(P=0. 0445); GP73、CD206均高表达的患者生存率显著低于GP73、CD206低水平表达的患者(P=0. 0243)。结论 GP73含量与肿瘤相关巨噬细胞(TAM)富集程度呈正相关,且富集程度越高的肝癌患者生存率越低。

形态学检测在自噬研究中的应用

自噬是降解损伤及丧失功能的细胞器或蛋白,维持细胞更新和稳态的关键细胞过程。自噬可分为三个相对独立的步骤:自噬泡起始形成阶段、自噬小体形成阶段以及成熟降解阶段,每个阶段都有其相对独特的形态学特征或分子标志物变化。本文综述了自噬研究中常用的形态学研究方法、结果阐释及这些过程中的关键注意事项。