大鼠睾丸间质tau蛋白和微管结合蛋白表达的变化

目的 :检查老龄和青年大鼠睾丸间质组织中tau蛋白和微管结合蛋白的表达情况 ,籍此评价老龄大鼠睾丸衰退的发生机制。 方法 :应用二步法免疫组化技术检查 6月龄SD雄性大鼠 (10只 ,青年组 )和 2 8月龄同品系大鼠 (10只 ,老龄组 )睾丸组织抗Tau蛋白和抗微管结合蛋白的抗体免疫反应情况。 结果 :老龄大鼠睾丸间质组织中tau蛋白免疫反应阳性细胞数明显高于青年组 (P <0 .0 0 1) ,而青年组大鼠睾丸间质组织中微管结合蛋白免疫反应阳性细胞数明显高于老龄组 (P <0 .0 1)。 结论

τ蛋白磷酸化位点与其促微管组装及与微管结合活性的体外分析

目的 探讨 Alzheimer病 (AD) τ蛋白异常磷酸化位点与其促微管组装及与微管结合活性抑制的关系。方法 采用超速离心和离子交换柱层析法分离制备重组 τ蛋白及 τ蛋白的体外磷酸化 ,以 Fe Cl3亲和柱分离纯化 32 Pτ肽 ,手工 Edman降解和氨基酸自动分析仪鉴定 32 Pτ肽磷酸氨基酸位点。结果 (1)酪蛋白激酶 - 1(CK- 1)、c AMP依赖性蛋白激酶 (PKA )和糖元合成酶激酶 - 3(GSK- 3)的磷酸化作用可不同程度地抑制τ蛋白的功能 ,CK - 1或 PKA的预处理可明显增强 GSK - 3对τ促微管组装活性的抑制 ,其中 PKA加 GSK- 3的抑制作用最强。 (2 )单纯GSK- 3磷酸化τ蛋白的位点为 :苏氨酸 (Thr) - 181,丝氨酸 (Ser) - 184,Ser- 2 6 2 ,Ser- 35 6和 Ser- 40 0 ,而 GSK- 3对PKA预处理τ蛋白的磷酸化位点为 :Ser- 195 ,Ser- 198,Ser- 199,Ser- 2 0 2 ,Ser- 2 35 ,Ser- 2 6 2 ,Ser- 35 6 ,Ser- 40 4,Thr-2 0 5和 Thr- 2 31。其中 Ser- 198,Ser- 199,Ser- 2 0 2 ,Thr- 2 0 5 ,Thr- 2 31,Ser- 2 35 ,Ser- 2 6 2 ,Ser- 40 0和 Ser- 40 4为 AD患者τ蛋白异常磷酸化位点。此外 ,Ser- 2 6 2磷酸化仅轻度抑制τ蛋白活性 ,而 Ser- 198,Ser- 199,Ser- 2 0 2 ,Thr- 2 31,Ser- 2 35 ,Ser- 40 0和 Ser- 40

植物微管结合蛋白AtMAP65-1在拟南芥气孔保卫细胞中的定位(简报)

植物细胞微管骨架的不同排列方式对细胞的生长分化及形态建成具有重要意义，微管的这种动态组织行为不仅需要自身的组成蛋白-微管蛋白（tubulin），还要有微管辅助蛋白MAPs（Microtubule—associated proteins）的参与。即MAPs是一类能够与微管骨架特异结合并调节其动态装配过程及其结构.

棉花微管结合蛋白基因GhMAP1-LC3的克隆与表达分析

应用RT-PCR从陆地棉（Gossypium hirsutum L．）石远321开花当天胚珠中分离到一个553bp的片段，含有一个360bp的开放读码框，推导的氨基酸序列（119个氨基酸）与水稻、拟南芥的MAP1-LC3（Microtubule-associated Protein 1-Light Chain3）分别具有94％与90％的同源性，由此推测该基因为编码棉花微管结合蛋白基因家族的一个成员，命名为GhMAP1-LC3。实时定量RT-PCR分析表明，该基因（GhMAP1-LC3）在棉花的胚根、叶片、花瓣、花药以及0—5DPA（开花后天数）胚珠、10-25DPA纤维中均有表达，其中以20DPA纤维中的表达量最高，而在下胚轴、-3DPA胚珠、30DPA纤维与35DPA纤维中没有表达。基于其表达模式以及对其他物种MAP1-LC3蛋白的认识，推测其对纤维初生壁的形成起着重要作用。

微管结合蛋白Tau磷酸化位点突变体的构建及鉴定

目的:构建带有Myc标签的Thr-213、Thr-235、Ser-404磷酸化位点突变为Ala的Tau蛋白真核表达质粒,并在真核细胞中表达Myc-Tau3m蛋白。方法:利用重组PCR方法得到Thr-213、Thr-235、Ser-404磷酸化位点突变为Ala的编码序列,将其插入经Bam HⅠ和KpnⅠ酶切的p XJ40-Myc表达载体,在人293T细胞中转入空载体和重组质粒,利用Western印迹检测其表达及功能。结果:测序和酶切结果证实Myc-Tau3m真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后获得表达,表达产物可促进微管的乙酰化。结论:构建了Thr-213、Thr-235、Ser-404磷酸化位点突变的Myc-Tau3m真核表达载体,为进一步研究Tau蛋白磷酸化的生理机能奠定了基础。

原生动物细胞微管蛋白的修饰和微管结合蛋白的研究

原生动物细胞微管结构和功能的多样化与编码α-、β-微管蛋白基因的种间差异和微管蛋白翻译后的修饰有关。微管蛋白翻译后的修饰包括蛋白亚基的剪切和拼接以及微管蛋白的乙酰化、多聚谷氨酰化、多聚甘氨酰化、酪氨酸化和去酪氨酸化等。此外，在微管的功能发挥过程中，两类重要的蛋白与之关联：一类是分子马达，另一类是微管相关蛋白家族。

人微管结合蛋白4微管结合区的体外表达

目的 :构建表达人微管结合蛋白 4微管结合区 (Microtubule -bindingdomain ,MTB)的大肠杆菌工程菌。方法 :将 1.2 7Kb编码MTB的DNA片段按正确方向亚克隆到原核生物表达载体pET - 3a。得到表达质粒JS3,并转化大肠杆菌BL2 1(DE3)。结果 :IPTG诱导下 ,表达产物的SDS -PAGE分子量大约是 4 0kD ,并能被抗MAP4抗体特异地识别。此外 ,重组MTB蛋白能在体外结合微管。结论 :人微管结合蛋白 4微管结合区具有微管结合活性。

一个棉花微管结合蛋白基因GhSP1L5的克隆及表达分析

利用RT-PCR技术从处于快速伸长发育时期的棉花纤维组织中克隆得到Spiral1-Like(SP1L5)基因(GhSP1L5),其开放读码框为315 bp,编码105个氨基酸的蛋白质,生物信息学分析表明,GhSP1L5蛋白N端和C端较为保守,并含有SCOP结构域,是典型的微管结合蛋白。进化树分析表明该基因与SP1L5家族基因的亲缘关系较近。构建原核表达载体pET28a-GhSP1L5,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,获得分子质量约为12 kD的重组蛋白。QRTPCR结果分析表明GhSP1L5基因在开花后15和20 dpa的纤维组织中表达量较高,在棉纤维发育的其他时期及根、茎、叶组织中表达量较低。

伊氏锥虫微管结合蛋白p15基因的分子克隆与表达

根据报道的布氏锥虫(Trypanosoma brucei)微管结合蛋白p15(Tb-MAPp15)基因及其3′非翻译区保守序列设计引物,采用PCR法从伊氏锥虫云南水牛株(Trypanosoma evansi stock YNB)基因组DNA中克隆得到伊氏锥虫微管结合蛋白p15(Te-MAP p15)基因。克隆片段长273bp,编码90个氨基酸,预测分子量9.0kDa。经同源性比较,所得基因与Tb-MAP p15基因同源率达到94%。抗原性分析Te-MAP p15基因表达的氨基酸序列比T.brucei微管结合蛋白p15多5个,均参与组成其中1个抗原决定簇,并且此抗原决定簇序列形成在蛋白中常作为识别位点的α螺旋。将该基因亚克隆到pGEX-6P-1原核表达载体,转化大肠杆菌E.coli RS21宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达。重组融合蛋白大小为35kDa,与预期大小一致,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定为重组伊氏锥虫微管结合p15蛋白。

新型微管结合蛋白在肿瘤发生与发展中的研究进展

新型微管结合蛋白(NuSAP)是一种重要的有丝分裂调节蛋白,在细胞分裂间期定位于核仁,在有丝分裂期与纺锤体的微管共同定位于胞质。NuSAP磷酸化和去磷酸化可动态调节其在细胞内功能。越来越多的研究表明,NuSAP选择性地在增殖性细胞中表达,其不仅参与纺锤体的稳定组装,而且与肿瘤组织的血管形成、增殖和侵袭有一定的相关性。随着分子生物学的发展,NuSAP有望成为新的肿瘤生物标志物和临床治疗的靶点,为肿瘤的早期诊断、临床治疗和预后提供新的方向。

拟南芥微管结合蛋白MAP70-4的生物信息学分析

微管结合蛋白对微管蛋白的结构及功能至关重要。为能较全面地揭示拟南芥微管结合蛋白MAP70-4的结构和功能,利用生物信息学方法对该蛋白的理化性质、亲水/疏水性,信号肽,跨膜区域,磷酸化位点,卷曲螺旋结构,蛋白质二级、三级结构,亚细胞定位,表达模式,分子功能及其参与的生物学功能,以及与其它蛋白的相互作用关系进行了预测分析。结果显示,拟南芥MAP70-4蛋白是一种无信号肽,不含跨膜螺旋区域的不稳定蛋白质,属于碱性、亲水性蛋白质,翻译后会产生磷酸化修饰,该蛋白二级结构含有11个α螺旋区和5个β折叠,以及7个卷曲螺旋结构。亚细胞定位显示该蛋白主要分布在细胞质中,具有促进微管结合等功能,和其有相互作用关系的蛋白可能与叶绿体生命活动及胚胎、种子发育有关。从表达模式上看,该蛋白主要在花、果实、叶片中大量表达,根中有少量表达。通过对拟南芥微管结合蛋白MAP70-4进行系统性预测分析,可为下一步对该蛋白功能的深入研究提供理论基础和借鉴。

陆地棉微管结合蛋白CLASP家族基因的鉴定及表达分析

CLASP蛋白(CLIP-associated protein,CLASP)是一种调节微管结构与功能的微管结合蛋白,在植物生长发育及形态建成过程中起着至关重要的作用。本研究利用生物信息学的方法,在陆地棉基因组数据库中鉴定出6个编码CLASP蛋白的基因。多重序列比对及系统进化树分析表明,陆地棉CLASPs可分为2个亚家族(I和II),亚家族I含有HEAT重复结构域和典型的CLASP-N端结构域,亚家族II只含有CLASP-N端结构域。实时荧光定量PCR结果表明,6个CLASPs基因在棉花各组织中均有表达,但表达模式各不相同,其中CotAD_63740(Gen Bank登录号为KX881965)和CotAD_04861(Gen Bank登录号为KX881961)在纤维中优势表达,CotAD_48232(Gen Bank登录号为KX881962)、CotAD_48665(Gen Bank登录号为KX881963)、CotAD_55570(Gen Bank登录号为KX881964)和CotAD_68468(Gen Bank登录号为KX881966)在茎中优势表达,表达模式的不同表明CLASPs在棉花不同组织中功能不同。本研究为深入研究棉花CLASPs的功能奠定了基础。

He-Ne激光和增强UV-B辐射对小麦幼苗微管结合蛋白MAP65s的影响

分别采用5 mW/mm2He-Ne激光辐照、10.08 kJ/m2.d增强UV-B辐射及二者组合对"临优2018"小麦幼苗进行处理,通过紫外吸收法测定各处理组幼苗中微管结合蛋白MAP65s的含量,并且采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对MAP65s蛋白进行鉴定,进一步分析He-Ne激光对增强UV-B辐射引起的小麦幼苗微管骨架损伤的修复效应。结果显示:经UV-B处理(B)后,小麦幼苗中的MAP65s蛋白含量低于对照组(CK)(P<0.01);单独激光(L)处理,MAP65s蛋白含量高于对照组(CK)(P<0.05);经He-Ne激光和UV-B复合处理(BL)后,MAP65s蛋白含量高于UV-B处理组,低于CK组。该结果表明:一定剂量的He-Ne激光辐照能够促进小麦幼苗微管结合蛋白MAP65s的合成,并且可能在一定程度上修复增强UV-B辐射对小麦幼苗微管骨架系统造成的损伤。

GFP与微管结合蛋白和肌动蛋白结合区融合蛋白载体构建与表达

以pCAMBIA1 30 0、pBA0 0 5、pActl D和pMECA等 4个质粒载体为基础 ,根据不同需要 ,选择特定的限制性内切酶作完全或部分酶切 ,通过多步骤的酶切、连接、转化等过程 ,构建完成 2个可通过农杆菌介导转化的植物表达载体。分别命名为 :pActl GFPTALIN和pActl GFP2 MAP4BD。在洋葱表皮细胞中的瞬间表达结果显示 ,两个载体均可正常工作。

小麦幼苗微管结合蛋白MAP65s体外对微管聚合影响的研究

微管结合蛋白与微管特异地结合在一起,参与调节微管的结构与功能,目前已成为植物细胞骨架研究的前沿领域。以"临优2018"小麦幼苗为材料,通过免疫印迹实验鉴定了小麦幼苗中微管结合蛋白MAP65s的存在并利用紫外吸收法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法初步探究了小麦幼苗MAP65s体外对微管聚合的影响,为进一步研究MAP65s蛋白的生理功能提供了重要的依据。

拟南芥微管结合蛋白CSll维持微管稳定性

微管是由α、β微管蛋白异二聚体通过非共价键形成的管状结构。微管结合蛋白通过调控微管的排列以及聚合一解聚状态，在许多生理活动（如细胞形态与结构、胞质流动、细胞分裂、细胞极性生长、细胞壁构建、细胞分化、信号转导等等）中起到调控作用。

微管结合蛋白DCAMKL1调节成骨细胞功能

据上海生命科学研究院2013年8月15日（JExpe Med，2013 Aug5．）报道，中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所邹卫国研究组发现．微管结合蛋白DCAMKL1通过抑制转录因子RUNX2活性进而调控成骨细胞的功能。骨的生长发育和新陈代谢是机体重要的生命活动。成骨细胞来源于中胚层间充质干细胞，能够分泌骨基质并使之发生矿化，

微管结合蛋白NuSAP的组织表达谱分析

目的探讨微管结合蛋白NuSAP的组织分布特征。方法利用组织斑点杂交和Northern杂交分析NuSAP在多种组织中的分布情况,RT-PCR分析NuSAP在多种肿瘤细胞系中的mRNA水平,Western印迹分析NuSAP在多种肿瘤细胞系中的蛋白水平。结果 NuSAP的组织表达谱分析表明该基因在胸腺、胎肝、骨髓中高表达,提示NuSAP在造血免疫中可能发挥重要功能;在多数肿瘤细胞中均可检测到NuSAP的表达,为分析该基因的功能提供了线索。结论本研究揭示了NuSAP是一种组织特异性的微管结合蛋白,可能在造血/免疫组织中发挥重要功能,研究结果对肿瘤、免疫等疾病的防治具有一定的科学意义。

植物微管结合蛋白

本文介绍了植物微管结合蛋白MAP65家族的各个成员WVD2、SPR1、EB1、MOR1、MAP200/TMBP200、AtMAP18、PLD、MAP190和SB401的研究进展。

低能量氦-氖激光照射对体外培养大鼠海马神经元微管结合蛋白表达的影响

目的探讨氦-氖激光照射对体外培养神经元微管结合蛋（MAP2）表达的影响。方法采用无血清细胞培养方法，分离并体外培养新生大鼠海马神经元，并以低能量氦-氖激光对其照射，于培养后14d神经元生长旺盛时期取出各组培养皿内盖玻片进行MAP2免疫学组织化学染色，光镜下观察，拍照计数，与其他对照组比较，观察激光照射对神经元微管结合蛋白（MAP2）表达的影响。结果将氦-氖激光照射组与对照组比较，阳性表达细胞轮廓清晰，照射后阳性表达MAP2的培养神经元数目为（15．85±2．79）个／高倍视野，明显高于对照组[（9．23±2．56）个／高倍视野]的数量，且组间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论氦-氖激光照射能促进体外培养新生大鼠海马神经元MAP2的表达。