微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12通过干扰微管蛋白酪氨酸硝基化促进Hep-2细胞生长

硝基化酪氨酸与酪氨酸在结构上相似,它在病理情况下会出现,并在细胞内与微管蛋白结合,从而阻碍微管的正常功能.硝基化酪氨酸在肿瘤中的作用,目前研究甚少.本文利用头颈鳞癌Hep-2细胞株,研究微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12(tubulin tyrosine ligase like 12,TTLL12)和硝基化酪氨酸对头颈鳞癌Hep-2生长的影响,通过Western印迹试验和MTT试验发现,随着硝基化酪氨酸的浓度升高,细胞内生成的硝基化酪氨酸微管蛋白含量也增高,同时细胞生长受抑制的程度显著增高;对建立的TTLL12高表达细胞株加入硝基化酪氨酸培养,结果显示,TTLL12高表达细胞株内的硝基化酪氨酸微管蛋白含量明显低于对照组细胞;对照组细胞的生长明显受到抑制,而高表达细胞株的生长无明显改变,两者的细胞生长有显著性差异(P<0.05).本研究结果提示,TTLL12可通过阻碍硝基化酪氨酸与微管蛋白的结合,使头颈鳞癌Hep-2细胞逃避硝基化酪氨酸的打击.对这一调控机制的进一步研究,必将有助于控制肿瘤细胞的生长,为治疗肿瘤寻找到新的治疗靶点.

微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12和硝基化酪氨酸对前列腺癌细胞生长的影响

目的研究微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12(TTLL12)和硝基化酪氨酸对前列腺癌细胞生长的影响。方法利用正常前列腺上皮细胞株PWR1E、RWPE1和前列腺癌细胞株DU145,通过蛋白质印迹分析检测TTLL12和硝基化酪氨酸微管蛋白的表达量,用MTT实验检测细胞的增殖情况。结果在硝基化酪氨酸的作用下,DU145细胞的硝基化酪氨酸微管蛋白表达量低于PWR1E和RWPE1细胞(P<0.05)。和对照组(以含800μmol/L盐酸培养)相比,实验组(以含800μmol/L硝基化酪氨酸的培养液培养)PWR1E和RWPE1细胞增殖受到抑制(P<0.05),而DU145细胞无明显改变(P>0.05)。在有效沉默TTLL12后,实验组(用siTTLL-12转染)的硝基化酪氨酸微管蛋白表达量高于对照组(用siControl转染,P<0.05);实验组内,硝基化酪氨酸使DU145细胞增殖受到抑制(P<0.05),而对照组内,硝基化酪氨酸对细胞增殖改变较小(P>0.05)。结论 TTLL12可使前列腺癌细胞逃避硝基化酪氨酸的打击,从而使前列腺癌细胞逃脱机体监控作用,获得异常增殖机会。

一种以TTLL12为靶点的影响细胞微管抗癌药物筛选的实验方法

目的建立一种以TTLL12为靶点的新的体外抗癌药物筛选实验方法。方法以TTLL12过表达Hep-2细胞株为研究对象,Western Blot检测噻丙烯和紫杉醇对硝基化酪氨酸微管蛋白的影响,ELISA检测方法确定硝基化酪氨酸的最适浓度及药物的最适浓度,并检测新的体外药敏试验方法灵敏性、特异性和重复性。利用新的体外药敏试验筛选抗癌药物,利用Western Blot检测噻氨酯哒唑对硝基化酪氨酸微管蛋白的影响。结果Western Blot结果显示紫杉醇组发现有硝基化酪氨酸微管蛋白条带,噻丙烯组未发现硝基化酪氨酸微管蛋白条带,紫杉醇被确定为阳性对照。噻丙烯被确定为阴性对照。ELISA试验结果显示硝基化酪氨酸浓度为400μM,待测药物浓度为10μM。新的体外药敏试验方法的灵敏性、特异性和重复性均较好。新的体外药敏试验筛选出敏感药物噻氨酯哒唑。Western Blot结果表明,噻氨酯哒唑可增加硝基化酪氨酸微管蛋白,具有抑制TTLL12功能的作用。结论以TTLL12为靶点的新的体外抗癌药物筛选实验方法具有简单、快捷、稳定、敏感的的特点,对于抗癌药物的基础研究有良好的应用价值。

TTLL12在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨鼻咽癌患者中微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12(tubulin tyrosine ligase like 12,TTLL12)的表达及临床意义。方法利用免疫组织化学法研究TTLL12在鼻咽慢性炎症组织和鼻咽癌组织中的表达,分析其在不同鼻咽组织中的表达差异及与鼻咽癌患者临床特征之间的相关性。从GEO数据库中筛选合适的鼻咽癌基因芯片数据集GSE102349,分析不同临床分期中TTLL12基因在转录水平上的表达差异、TTLL12与鼻咽癌患者无进展生存的相关性及可能参与的通路。结果免疫组织化学结果显示,与鼻咽慢性炎症组织相比,TTLL12蛋白在鼻咽癌组织中表达明显上调(P<0.001)。TTLL12高表达鼻咽癌患者的T_(3)-T_(4)、N_(2)-N_(3)、Ⅲ~Ⅳ期的占比显著高于TTLL12低表达患者(P<0.05)。TTLL12高表达患者的总生存显著低于低表达患者(P=0.027)。TTLL12高表达和N分期均是影响鼻咽癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。在基因芯片数据集中,TTLL12 mRNA在鼻咽癌组织中的表达与临床分期呈正相关(P=0.033),TTLL12高表达的鼻咽癌患者无进展生存率显著低于TTLL12低表达患者(P=0.041)。KEGG富集分析显示TTLL12高表达基因样本主要富集在趋化因子信号通路,与人类T细胞白血病病毒1型感染及EB病毒感染密切相关。结论TTLL12表达上调作为不利因素可促进鼻咽癌的发生发展。

TTLL12过表达对口腔鳞癌SCC-25细胞株生物学特性的影响

目的检测微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12(TTLL12)过表达对人舌磷癌SCC-25细胞株生物学特性的影响。方法建立TTLL12稳定过表达的SCC-25细胞株,采用间接免疫荧光法和Western blot检测TTLL12在SCC-25细胞内的分布,MTT检测沉默TTLL12对SCC-25细胞生长的影响,Boyden小室侵袭试验检测沉默TTLL12对SCC-25细胞侵袭的影响,采用SPSS10.0软件包对数据进行统计学分析。结果间接免疫荧光法和Western blot结果均显示TTLL12在细胞质、细胞核及细胞核膜均有分布。间接免疫荧光法结果显示α微管蛋白(α-tubulin)的分布与TTLL12重合。MTT实验结果显示沉默组(沉默TTLL12基因的SCC-25细胞)的SCC-25细胞生长较对照组(未作任何处理的SCC-25细胞)受到明显抑制(P<0.05)。Boyden小室侵袭实验结果显示沉默组的穿膜细胞百分比明显小于对照组(P<0.05)。结论沉默TTLL12可有效抑制SCC-25细胞的生长和侵袭能力。

TTLL12在肝门部胆管癌中的表达及临床意义

目的分析肝门部胆管癌及癌旁组织中微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12(TTLL12)的表达,并探讨其与肝门部胆管癌患者临床病理特征和预后之间的关系。方法收集青岛市市立医院2016年1月至2020年12月45例肝门部胆管癌患者术后癌组织及癌旁组织制备石蜡切片,其中男性27例,女性18例,年龄(58.8±8.5)岁。采用免疫组化染色检测TTLL12和增殖细胞核抗原(Ki-67)的表达,45例患者依据癌组织TTLL12表达情况分为阴性组(n=15)和阳性组(n=30)。分析TTLL12阳性表达与淋巴结转移、肿瘤分化程度等临床病理特征的关系。采用Spearman相关分析癌组织中TTLL12与Ki-67表达的相关性。Kaplan-Meier法进行生存分析,生存率比较采用log-rank检验。结果免疫组化染色显示,45例肝门部胆管癌患者癌组织中,TTLL12与Ki-67表达明显高于癌旁组织。肝门部胆管癌患者癌组织中的TTLL12与Ki-67表达呈正相关(相关系数为0.601,P<0.001)。TTLL12、Ki-67在45例肝门部胆管癌组织中的阳性表达率分别为66.7%(30/45)、77.8%(35/45),高于癌旁组织中阳性率11.1%(5/45)、15.6%(7/45),差异具有统计学意义(χ^(2)=11.25、29.01,均P<0.001)。肝门部胆管癌患者癌组织中TTLL12、Ki-67阳性表达与淋巴结转移、肿瘤分化程度相关(均P<0.05),存在淋巴结转移和分化程度低的患者癌组织阳性表达率高。TTLL12癌组织表达阴性组中位总生存期为44个月,TTLL12阳性组中位总生存期为21个月。TTLL12癌组织表达阴性组术后5年累积生存率为33.1%,优于阳性组的18.3%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.12,P=0.013)。结论肝门部胆管癌组织中TTLL12的表达高于癌旁组织,并且癌组织中TTLL12与Ki-67表达呈正相关。TTLL12阳性表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和患者不良预后密切相关。TTLL12可能成为肝门部胆管癌患者预后预测的标志物。