结核分枝杆菌分泌蛋白抗原免疫电化学检测方法的建立

目的建立一种新型、快速的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)分泌蛋白抗原85B(Ag85B)免疫电化学检测方法。方法先在玻碳电极(Glassy carbon electrode,GCE)表面电沉积一层纳米金,通过静电吸附固定普鲁士蓝壳聚糖(Chitosan-prussian blue,CS-PB)纳米复合物,利用壳聚糖的氨基功能团固定微米金磁微粒(Au-Fe3O4),再吸附兔抗Ag85B多克隆抗体,制得电流型免疫传感器。测定电极制备过程的电化学特征,通过原子力显微镜对免疫传感器进行表征,确定免疫传感器的最佳pH值、反应时间、检测线性响应范围及检测下限,验证该方法的特异性和重复性,并与ELISA检测结果进行比较。结果原子力显微镜结果表明,Au-Fe3O4与兔抗Ag85B多克隆抗体可连接到电极表面。在最佳pH值(pH7.5)和反应时间(12min)的条件下,该传感器响应的峰电流值与Ag85B浓度在10～500ng/ml的范围内呈良好的线性关系,检测下限可达10ng/ml,且具有良好的特异性和重复性。免疫传感器与ELISA检测结果的吻合性较好。结论已成功制备了检测Ag85B的免疫传感器,该传感器制备简单,操作便捷,灵敏度高。