青蒿素对鸡柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子微线基因mRNA转录及鸡盲肠组织结构的影响

拟探讨青蒿素抗鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的作用机制。将试验鸡随机分为空白对照组、攻毒对照组和青蒿素药物组,于攻毒后120h,收集试验鸡的盲肠并提取E.tenella第二代裂殖子。通过红细胞计数法计算第二代裂殖子数量;SYBR Green I荧光定量PCR检测第二代裂殖子微线基因(EtMIC1、EtMIC2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC5)mRNA相对转录量及扫描电镜观察试验鸡盲肠组织的病理学变化。结果表明:与攻毒对照组比较,青蒿素组的球虫第二代裂殖子数量降低了25.37%(P<0.05),同时裂殖子中微线基因EtMIC1、EtMIC2、EtMIC4的mRNA转录水平均显著下调(P<0.05),EtMIC3、EtMIC5则极显著下调(P<0.01);青蒿素组盲肠的病理组织结构也得到改善。青蒿素减轻鸡盲肠组织病变可能与其下调EtMICs mRNA转录并使裂殖子数量减少有关。

鸡球虫微线基因mic2-7h在大肠杆菌中的表达

本文在大肠杆菌中表达了鸡球虫孢子化7h微线基因mic2-7h.质粒pmic2-7h经AatⅡ酶切线化,用Sl核酸酶切平DNA分子,再用NotⅠ切出mic2-7h片段,插入表达质粒pET28-a(+)的6xHis下游NheⅠ处构建成表达载体pET28-mic2-7h.IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE分析表明表达的重组蛋白大小为45kD,约比理论推算值(37kD)小,但Western-blotting杂交表明重组蛋白能与兔抗Etmic-2抗体反应.这进一步说明了Mic2-7h可能是Etmic-2的一种蛋白异形体.

柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中的Etmic-2基因克隆及测序

作者根据子孢子微线基因 (Etmic- 2 )的 c DNA序列 ,利用计算机设计出 1对引物 ,从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中用 RT- PCR技术扩增出 1个片段 (m ic2 - m z)。把这个片段克隆到 p GEM- T- Easy Vector中后 ,我们得到 1个阳性克隆 pmic2 - mz,酶切分析证明 pm ic2 - m z含有 m ic2 - m z,并且外源片段以反方向插入 T载体中。核苷酸序列测定结果表明 m ic2 - m z与 Etmic- 2基因的编码区序列一样长 ,分子量都为 112 7bp,并且两序列之间也只有 3个碱基不同 ,也没有造成氨基酸编码错位 ,这说明球虫从子孢子到第二代裂殖子的二次无性生殖过程中 ,微线基因Etm ic- 2 c NDA序列没有发生太大的变化。

柔嫩艾美耳球虫LZ株MIC-5基因的克隆与表达

提取柔嫩艾美耳球虫兰州株孢子化卵囊总RNA，运用RT-PCR技术扩增＆MIC-5基因片段进行测序，并克隆入大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达．结果表明，该基因片段长918bp，编码306个氨基酸．与GenBank报道的柔嫩艾美耳球虫Houghton株MIC-5基因相比，核苷酸和推导的氨基酸序列同源性为99．2％和99．6％．在推导的MIC-5氨基酸序列中，第15～89、90～160、173～242和245～306位保守的cys残基形成4个Apple样结构域（A-domain）．推测该蛋白可能在虫体与宿主细胞的黏附中起重要作用．转化重组质粒pETMIC-5的BL21（DE3）经IPTG诱导后，SDS—PAGE和western blot分析证实目的蛋白成功表达，重组蛋白的表达量可占菌体蛋白的15．2％．

携带兔斯氏艾美耳球虫MIC-5基因减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗的安全性、稳定性与免疫原性

对携带兔斯氏艾美耳球虫微线蛋白-5基因(MIC-5)真核表达质粒asd-pBMIC-5-IL-15的减毒鼠伤寒沙门菌X4550(X4550/asd-pBMIC-5-IL-15)进行了安全性、稳定性与免疫原性试验。结果显示,重组菌在109CFU剂量以下对家兔安全;连续培养30代重组菌,重组表达质粒可稳定存在于X4550内,具有良好的遗传稳定性;用重组菌2次免疫动物后,既能诱导机体产生抗兔斯氏艾美耳球虫抗体,也能显著增强淋巴细胞增殖水平,抗球虫指数为164.4。试验表明,减毒沙门菌介导的兔球虫调节型DNA疫苗具有良好的安全性、稳定性和免疫原性。