微细胞介导染色体转移法提高AT5 BIVA细胞对电离辐射的抗性

ＡＴ５ＢＩＶＡ细胞是一株经ＳＶ４０病毒转化的ＡＴ病人皮肤成纤维细胞，对γ射线高度敏感。实验用ＦＤ３（含人第１１号染色体的人鼠杂种细胞）、ＦＤ８（不含人第１１号染色体的人鼠杂种细胞）、ＬＭ／ＴＫ鼠细胞）为洪体，通过微细胞介导染色体转移（ＭＭＣＴ）向ＨＴ５ＢＩＶＡ细胞导入人或鼠的完整染色体，经两次３Ｇｙγ射线照射筛选后，获得ＡＴ５ＢＩＶＡ与ＦＤ３微细胞融合的杂合细胞ＡＴ／ＦＤ３－１，对γ射线抗性有显著提高。而ＦＤ８或ＬＭ／ＴＫ的微细胞与ＡＴ５ＢＩＶＡ细胞的杂合细胞，对γ射线抗性未增加。枝型分析表明ＡＴ／ＦＤ３—１细胞中包含了来源于ＦＤ３细胞的人第１１，１４号染色体和数条鼠染色体。通过对照实验，排除了人１４号和鼠染色体提高ＡＴ／ＦＤ３－１细胞对γ射线抗性的可能性．确认人第１１号染色体与ＡＴ细胞对电离辐射敏感性相关，提示人第１１号染色体上可能存在决定细胞对γ射线抗性的相关基因。

一种适用于生产转染色体动物的微细胞制备方法(英文)

微细胞介导的染色体转移技术(MMCT)是一项将外源染色体转入哺乳动物细胞的技术,具有广阔的应用前景.与体细胞核移植技术结合,MMCT可用于生产具有重要医学药用价值和优良农业生产性状的转染色体动物.制备高质量的微细胞是关系MMCT技术成功的关键步骤之一.通过荧光染色和吉姆萨染色分析,结果表明,A9(neo12)细胞经0.2mg/L秋水仙素酰胺处理48h后,89%的细胞产生微核化,每个细胞平均形成10个微核.微核化的细胞在含有20mg/L细胞松弛B的Percoll密度梯度介质中,经39000g高速离心后,包含微细胞、完整细胞、细胞核和细胞碎片的混合液,依次通过8μm和5μm孔径的滤膜过滤后可获得纯化的微细胞溶液.通过光学显微镜和吉姆萨染色观察,可见微细胞为一群直径约为3～5μm的类细胞核的球形物质.微细胞PCR技术首次用于检测微细胞溶液的质量,检测结果显示,所制备的溶液中均匀分布着带有目的染色体的微细胞,适用于进一步作转染色体动物实验.

产生人抗体的转染色体动物研究进展

现已证明,应用抗体治疗疾病是一种非常成功的方法。单克隆抗体的生产使免疫治疗达到一个新水平,但鼠源单抗在治疗人体疾病方面有很多问题,而人源化抗体可以解决这些问题。目前抗体人源化已由鼠嵌合抗体发展到了转基因动物表达完全人抗体阶段,而人类人工染色体(HAC)载体的发展和微细胞介导的转染色体技术使得产生携带人类免疫球蛋白基因位点的转染色体动物成为可能。通过HAC将人的免疫球蛋白基因转入后,这类转染色体动物可以产生大量人源化多克隆抗体,这对预防及治疗疾病,甚至防御生物武器都有很重要的作用。转染色体技术可以使动物携带大而复杂的人类基因或基因簇,这些转基因动物有助于研究人类基因组在体内的功能作用,并用于各种疾病研究和生产药物蛋白。

肝癌细胞微细胞介导染色体转移方法学的建立与探讨

目的建立肝癌细胞微细胞介导染色体转移方法,为肝癌转移抑制基因的染色体功能定位建立技术平台。方法人单染色体供体细胞通过微核化、出核、融合步骤将随机标记有耐药neo基因的正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞系C5F中,对微细胞杂交克隆进行药物筛选和单细胞克隆,并用序列标签位点-PCR和全染色体涂染荧光原位杂交方法验证人染色体转移的结果。结果获得具有G418和HAT双重抗性的微细胞杂交细胞,通过单细胞分离克隆方法获得15个具有双重抗性的微细胞杂交克隆,序列标签位点-PCR结果发现导入染色体的随机片段丢失,全染色体涂染荧光原位杂交结果发现导入的人8号染色体与大鼠染色体发生了稳定的重组。结论成功建立微细胞介导的染色体转移技术,为肝癌转移抑制基因的染色体功能定位奠定了技术基础。