重度子痫前期胎盘合体滋养细胞微绒毛膜脱落与Rho/ROCK分子表达的关系

目的探讨重度子痫前期(sPE)患者合体滋养细胞表面微绒毛膜(STBM)脱落水平与胎盘组织Rho/ROCK分子表达的关系。方法收集sPE产妇(sPE组)和正常产妇(对照组)胎盘组织各20例,透射电镜下观察胎盘合体滋养细胞表面微绒毛结构变化,应用体视学方法分析细胞表面微绒毛数密度(Nv)、表面积密度(Sv)和体积密度(Vv),通过Western blotting和免疫组化检测胎盘组织中Rho亚家族蛋白成员(RhoA、RhoB、RhoC)及Rho激酶(ROCKI、ROCKⅡ)的表达水平。应用Spearman等级相关分析法检验Rho、ROCK蛋白表达水平与STBM脱落水平的相关性。结果 sPE组患者胎盘合体滋养细胞表面微绒毛的Nv、Sv、Vv均显著小于对照组(P<0.05),胎盘组织中RhoA、RhoB、ROCKI、ROCKⅡ蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。sPE组患者胎盘组织中RhoB、ROCKI、ROCKⅡ的表达水平与STBM的脱落水平均呈正相关(r=0.631,r=0.826,r=0.865,P<0.05)。结论 RhoB及其与下游分子ROCKI、ROCKⅡ构成的信号通路可能在sPE时胎盘STBM脱落过程中发挥重要作用。

小鼠合体滋养细胞微绒毛膜制备方法的研究

目的建立一种制备小鼠合体滋养细胞微绒毛膜(STBM)的方法。方法收集足月孕小鼠的胎盘,利用机械分离法剪碎胎盘进行差速离心,分离小鼠STBM。用Lowry法测定制备的小鼠STBM蛋白水平,用组织多肽抗原作为小鼠STBM的标记物,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测STBM的水平,利用电镜观察并分析小鼠STBM的形态结构。结果实验获得的小鼠STBM制剂的蛋白水平为(0.69±0.12)mg/mL,TPA水平为(61.49±9.78)ng/mL。电镜下小鼠STBM的直径为(228.52±90.06)nm的囊泡状结构。结论制备的小鼠STBM与人STBM高度相似,可为子痫前期致病机制的探索提供在体研究的实验基础。

合体滋养细胞微绒毛膜与子痫前期

子痫前期是严重危害母儿健康的产科常见病,是导致孕产妇和围生儿发病率和死亡率升高的主要原因之一,其病因至今未明。近年来合体滋养细胞微绒毛膜(STBM)与子痫前期发病密切相关得到重视,合体滋养细胞微绒毛膜是胎盘合体滋养细胞碎片脱落进入母体血循环后形成的,可经多种途径损害母体血管内皮细胞,影响母体自身免疫系统,从而在子痫前期的发病中起重要作用。就合体滋养细胞微绒毛膜与子痫前期的关系综述。

抗蛋白吸附PLLA-MPEG微绒毛膜的制备

在左旋聚乳酸(PLLA)膜上采用朗格缪尔-布洛杰特(LB)技术、浇铸和化学接枝的方法制备了左旋聚乳酸-甲基端聚乙二醇(PLLA-MPEG)共聚物微绒毛膜。通过原子力显微镜(AFM)和水接触角测量等方法考察了制备方法及条件对绒毛层性能的影响,对绒毛层的亲水性、稳定性和抗蛋白吸附性能进行了对比分析。结果表明:通过这3种方法均能获得较亲水的抗蛋白吸附表面。PLLA-MPEG单分子LB微绒毛必须在热水中处理后才能牢固地黏附于PLLA膜上;浇铸的PLLA-MPEG成膜性好,但遇水易脱落,稳定性差;紫外光催化接枝的微绒毛制备简便、铆接牢固,可用于医疗器械或生物埋置材料的表面修饰。

胎盘滋养细胞微绒毛膜和基底膜的制备

目的改良制备胎盘滋养细胞微绒毛膜(microvillous membranes,MVM)和基底膜(basal membranes,BM)的技术,建立一个研究母胎界面物质交换的细胞分子模型。方法在Illsley法基础上改良缓冲液成分,延长镁离子螯合BM的时间,低速离心后的上清液用于制备MVM,沉淀用蔗糖梯度纯化制备BM。结果每克胎盘制备的MVM平均量为0.55 mg,其标记酶碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)为空白对照的16.87倍;BM的平均量为0.54 mg,其标记酶腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC)为空白对照的11.19倍。结论改良的Illsley法可以简单地同时制备较高质量的MVM和BM,有利于在细胞分子水平更好地研究胎盘滋养细胞功能。

胎盘微绒毛膜蛋白和基底膜层蛋白联合制备

目的探讨胎盘微绒毛膜和基底膜联合分离及其蛋白提取方法．方法采用差速离心法和蔗糖密度梯度离心法，并对所提取的膜进行电镜观察和酶学鉴定．结果电镜观察两种膜已基本分离开．酶学鉴定：ＡＫＰ酶绒毛膜为２０．０６４±８．９９６ｕ·ｍｇ－１蛋白，基底膜为０．３２３±０．１４６ｕ·ｍｇ－１蛋白．绒毛膜ＡＫＰ较基底膜高约７０倍．基底膜含少量ＡＫＰ表示有少许绒毛膜污染，表明两种膜的提取成功．结论本方法可用于联合制备胎盘绒毛膜和基底膜．

人胎盘微绒毛膜的制备及其转铁蛋白受体研究

作者分别用差速离心法及蔗糖梯度离心法制备胎盘微绒毛膜(PMM),用受体放射分析法研究了PMM的转铁蛋白受体(TfB),结果表明:两种方法制备的PMM均可用于受体分析,但差速离心法更为简便。测定60例产妇PMM的TfR,其数目为3.53±1.98×10^(12)个位点/mg膜蛋白,最大结合容量为6.33±4.21×10^(-12)mol/mg膜蛋白,Kd值为4.95±3.39×10^(-9)mol/L。受体结合反应体系最适实验条件为,膜蛋白浓度每管50μg,标记物浓度每管50 000cpm,孵育30分钟,B/F分离的聚乙二醇浓度为12％(W/V)。对TfR的特性研究表明:TfR与转铁蛋白的结合具有高度亲和力、高度特异性及可饱和性。

胎盘微绒毛膜铁蛋白受体表达及其在母-胎铁转运中的作用

目的：进一步探讨胎盘微绒毛膜铁蛋白受体的表达及其意义。方法：采用放射配体结合分析法，以１２５Ｉ－马脾去铁铁蛋白作为标记配体，在经过选择的最适测定条件下进行了中孕期胎盘微绒毛膜铁蛋白受体（ＦｎＲ）表达及特性的研究。结果：①正常中孕期胎盘微绒毛膜ＦｎＲ位点数为（９．６３±４．７２）×１０１２个／ｍｇ膜蛋白，解离常数（Ｋｄ）为：（９．４７±５．２７）×１０－８ｍｏｌ／Ｌ；②正常中孕期胎盘ＦｎＲ表达与正常足月孕胎盘相似（Ｐ＞０．２５），二者的Ｋｄ值比较亦无统计学差异（Ｐ＞０．２５）；③中期孕胎盘微绒毛膜与不同铁蛋白分子的竞争抑制试验结果表明微绒毛膜表面的ＦｎＲ与碱性铁蛋白有较高的亲和力。结论：①中孕期胎盘ＦｎＲ表达已达基本成熟程度；②胎盘微绒毛膜ＦｎＲ在母体向胎儿铁转运过程中的作用可能是摄取母血中的铁蛋白铁供给胎儿，以保证胎儿的铁代谢和铁储存。

胎盘及外周血中STBM与早发型重度子痫前期病因的研究

目的:测定孕妇胎盘组织和血清合体滋养细胞层微绒毛膜(STBM)在重度子痫前期的表达情况,揭示早发型与晚发型重度子痫前期可能具有不同的病因及发病机制。方法:收集在我院治疗的早发型与晚发型重度子痫前期患者各15例,及与两组孕周相匹配正常妊娠孕妇各10例。采用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)方法测重度子痫前期患者胎盘中STBM的标记物TPAmRNA水平,另用酶联免疫分析法(ELISA)测定血清和胎盘中STBM的标记物TPA蛋白表达水平。结果:①早发型组孕妇胎盘STBM的标记物TPA相对含量(2.04±0.32 ng/ml),高于晚发型组(1.75±0.31 ng/ml)(P<0.05),早发型组胎盘STBM的标记物TPA mRNA含量(0.0342±0.0021)高于晚发组(0.0222±0.0020)(P<0.05);②早发型组孕妇血清中STBM的标记物TPA水平(1.88±0.43 ng/ml)高于晚发型组(1.59±0.26 ng/ml)(P<0.05)。早发型组和晚发型组血清中STBM的标记物TPA水平均高于同期正常孕妇血清中的TPA水平(P均<0.05)。③早发型组孕妇胎盘组织中STBM的标记物TPA水平与血清尿素氮水平、血清肌酐水平、S/D比值之间均呈显著正相关。晚发型组中与血清肌酐水平之间呈显著正相关。④早发型组孕妇血清中STBM的标记物TPA水平与血清肌酐水平、收缩压、舒张压之间均呈显著正相关。晚发型组中与血清肌酐水平、S/D比值、收缩压之间均呈显著正相关。结论:早发型重度子痫前期胎盘的合体滋养细胞凋亡早且严重,早发型与晚发型重度子痫前期可能具有不同的病因及发病机制。

铁蛋白受体放射配体结合分析法

本文采用差速离心法制备胎盘微绒毛膜，用125I－Hunter试剂联接标记铁蛋白，在国内首次建立了胎盘微绒毛膜铁蛋白受体放射配体分析法，并进行了最适反应条件及铁蛋白受体的特性研究。所标记的125I一铁蛋白放化纯达95％以上，且免疫活性和生物活性均较好。用放射配体受体分析测定了11例正常足月孕妇胎盘微绒毛膜铁蛋白受体数为（3．534土1．105）×1012位点／毫克膜蛋白，亲和力常数Ka为（2．203土0．622）×107mol-1．L。实验条件为：膜蛋白160ug，125I互铁蛋白与游离铁蛋白分离的PEG浓度为12％。对铁蛋白受体特性研究表明：铁蛋白受体与铁蛋白结合具有高度特异性、可饱和性和中度亲和力。

肠道感染的发病机理:预防和治疗中的意义

肠道感染是世界上急性腹泻最常见的原因,每年造成4百万至～5百万人死亡,其中大部分是学龄前儿童。已对感染性腹泻的发病机理及病理生理学变化进行了广泛研究,肠道病原体的主要毒力因素及宿主肠道反应大多已得到明确。

胎盘铁蛋白受体表达与孕母铁缺乏症的关系

为研究胎盘微绒毛膜铁蛋白受体（胎盘ＦｎＲ）在母－胎间铁代谢中的作用，用放射配体结合分析法测定２５例足月孕妇胎盘ＦｎＲ。其中，１１例正常孕妇胎盘ＦｎＲ数为（３．５３４±１．１０５）×１０１２位点·ｍｇ－１·ｐｒｏ－１，亲和常数为（３．２０３±０．６２２）×１０７·ｍｏｌ－１·Ｌ－１；１４例轻度缺铁性贫血（ＩＤＡ）孕妇胎盘ＦｎＲ数为（８．９３６±２．４０７）×１０１２位点·ｍｇ－１·ｐｒｏ－１，为正常孕妇的２．５３倍。此结果显示，人胎盘微绒毛膜上有大量胎盘ＦｎＲ表达，其数量随孕母铁营养状况而变化。提示胎盘ＦｎＲ介导铁转运是母－胎间铁的转运机制之一。轻度ＩＤＡ时，胎盘ＦｎＲ与配体结合的亲和常数稍低于正常，推测铁缺乏者ＦｎＲ构型可能有改变。