大肠杆菌Nissle 1917的多组学分析及其产微菌素的功能验证

【目的】探究益生大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)与模式菌株的代谢及转录差异,为构建工程菌株EcN提供参考,进一步推动食品安全菌株EcN的应用。【方法】软件分析比较EcN和模式菌株BL21(DE3)、W3110的基因组、转录组差异,并通过质粒构建表达验证;在BL21(DE3)中质粒表达EcN来源的微菌素(microcin)并进行抑菌效果验证。【结果】共挖掘出904个差异编码基因。同时以不同碳源为底物分析验证了不同菌株在碳源吸收利用方面的差异,以启动子Pflic在不同菌株中的表达情况验证了转录调控上的差异;最终构建的微菌素重组菌株在培养12 h时,抑菌率提高了30.3%。【结论】研究一定程度上阐明了EcN的代谢特性及其与模式菌株的转录差异,并为微菌素作为窄谱治疗药物来抑制肠道病原体和减少肠细菌水华的研究提供了思路。

HPLC法测定微乳中伊维菌素的含量

建立了HPLC测定伊维菌素微乳中伊维菌素含量的方法。色谱柱为ZirchromC18（4.6mm×250 mm,5μm）,流动相为甲醇∶水（85∶15）,测定波长为245 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为40℃。伊维菌素与辅料及溶剂峰分离良好,在2.22～111.0μg/mL时线性关系良好（R^2=0.999 9）。HPLC测定伊维菌素方法便捷、准确、重复性好,可用于伊维菌素微乳含量的测定。

伊维菌素微乳制剂的家兔刺激性试验

白兔背部分区进行脱毛处理,将伊维菌素微乳制剂一次性涂抹于暴露的皮肤,观察皮肤接触受试物后是否引起红肿、充血、渗出等局部反应,评价药物对家兔皮肤的刺激性。同时将受试物滴于家兔眼结膜囊内,观察虹膜、角膜和结膜是否出现浑浊、充血、水肿等局部反应,评价药物对家兔眼睛的刺激性。结果表明,伊维菌素微乳制剂未引起白兔皮肤明显的充血、红肿;同时对兔子的结膜、虹膜和角膜也没有刺激性。因此该制剂对白兔的皮肤和眼睛的刺激程度为无刺激。本试验为伊维菌素微乳制剂的安全性评价提供了试验依据。

0.2%增效甲胺基阿维菌素微乳剂(顽完)对梨树梨木虱防治效果研究

田间测定了0.2%增效甲胺基阿维菌素微乳剂(顽完)对梨树梨木虱的防治效果及其安全性,试验结果表明,0.2%增效甲胺基阿维菌素微乳剂(顽完)对梨树梨木虱防治效果较好,在0.40～1.00 mg/kg范围内,药后3～7d防治效果为64.44%～94.56%,好于对照药剂,速效性好,持效性显著。最佳用药量以0.50～0.67mg/kg为宜,施药适期为梨木虱发生盛期,用药后3-7d可有效控制虫害。对梨树生长没有影响。

15%三唑磷·阿维菌素微乳剂防治蔬菜害虫药效试验

在菜青虫和小菜蛾幼虫发生高峰期 ,用 15 %三唑磷·阿维菌素微乳剂 75 0ml/hm2 防治小菜蛾 ,药后 3、7天防效分别达83 .69%、91.12 % ;防治菜青虫 ,药后 3、7天防效分别达 82 .2 6%、92 .0 4% ,其药效显著优于 1.0 %阿维菌素乳油 ,与 2 0 %三唑磷乳油常规剂量效果相当 。

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂对蔬菜害虫的控制作用

0．5％甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂以药量10mL／667m^2防治甜菜夜蛾的效果明显优于其2倍使用剂量的乳油，药后3～7d，对苋菜上甜菜夜蛾的防治效果达到85％以上，显著优于1．8％阿维菌素乳油33．33mL／667m^2防治效果；施药量8．33mL／667m^2，药后7d，对丝瓜上美洲斑潜蝇的防治效果达85％以上，与1．8％阿维菌素乳油50mL／667m^2防治效果差异不显著。

3.2%高效氯氰菊酯·甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂对十字花科蔬菜主要害虫的控制作用

田间药效试验结果表明,3.2%高效氯氰菊酯·甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂对十字花科蔬菜主要害虫甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hbner)、小菜蛾Plutella xylostella(L.)、菜青虫Pieris rapae(L.)和斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)均具有优良的防治效果,并有较好的速效性和持效性。3.2%高效氯氰菊酯.甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂20,25和30g/667m23个处理药后1d对甜菜夜蛾、小菜蛾、菜青虫和斜纹夜蛾的防治效果为60.67%～77.41%,药后3d的防治效果达81.82%～97.77%,药后7d的防治效果达83.74%～99.25%。3.2%高效氯氰菊酯.甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂可以作为防治蔬菜主要害虫的有效药剂推广使用,推荐使用剂量为25～30g/667m2(12～14.4gai/hm2)。

2%阿维菌素微乳剂防治甘蓝小菜蛾试验

进行田间试验以明确2%阿维菌素微乳剂防治甘蓝小菜蛾的效果。结果表明,2%阿维菌素微乳剂能够很好的控制甘蓝小菜蛾,且防治效果明显高于对照,对作物安全。

3%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂防治稻纵卷叶螟技术研究

以3%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂为试剂,进行了防治稻纵卷叶螟的田间药效试验,结果表明:600g/hm2的甲维盐ME能有效防治稻纵卷叶螟,防效达94.6%,显著优于40%丙溴磷乳油,甲维盐ME中添加有机硅能显著提高药效。

0.2%增效甲胺基阿维菌素微乳剂(顽完)对苹果树红蜘蛛防治效果研究

田间测定了0.2%增效甲胺基阿维菌素微乳剂(顽完)对苹果树红蜘蛛的防治效果及其安全性,试验结果表明,0.2%增效甲胺基阿维菌素微乳剂(顽完)对苹果树红蜘蛛防治效果较好,在0.40～1.00 mg/kg范围内,药后3～7d防治效果为63.71～99.60%,好于对照药剂,速效性好,持效性显著。最佳用药量以0.50～0.67mg/kg为宜,施药适期为红蜘蛛发生盛期,用药后3～7d可有效控制虫害。对苹果树生长没有影响。

微管菌素类似物的合成及抗肿瘤活性

以微管菌素为先导化合物,设计合成了一系列类似物;所有化合物的结构均经~1H NMR,^(13)C NMR及HRMS确证,均为新化合物.采用噻唑蓝(MTT)法对其抗肿瘤活性进行了初步筛选,结果表明,化合物Ⅱb具有一定的抗肿瘤活性.

5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂防治甘蓝小菜蛾效果研究

研究5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂对甘蓝小菜蛾的防治效果,结果表明：5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂对甘蓝小菜蛾有较好的防治效果,施用剂量控制在105～120 g/hm^2,药后2、8 d的防效均可达85%以上,且对甘蓝安全,可大面积推广应用。注意与其他不同作用机制杀虫剂交替使用,以延缓害虫抗药性的产生,并按采收间隔期7 d收获。

2%阿维菌素微乳剂防治甘蓝小菜蛾的效果

2%阿维菌素微乳剂对甘蓝小菜蛾有较好的防治效果,对甘蓝生长安全,其最佳用药量6.0～7.5g.a.i/hm2。

伊维菌素微乳无菌检查方法学的研究

本试验旨在对伊维菌素微乳制剂进行无菌检查方法学验证和无菌检查试验,确认本试验所用的方法适用于该制剂的无菌检查。按《中国兽药典》2005版一部(附录118)所载"无菌检查法"项下进行试验,通过对阳性对照菌、不同量冲洗液等条件的选择,采用薄膜过滤法对10瓶供试品(每种试验菌的样品量)进行检测,建立了无菌检查方法。经方法验证,用400mL 0.1%蛋白胨水溶液冲洗后,含供试品容器中的7个阳性菌试验组与阳性菌对照组相比均生长良好,说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计,可以用该方法进行供试品的无菌检查。对3批供试品进行无菌检查,阳性对照菌均在24h内生长良好,阴性对照均澄清,无菌生长,3批供试品均澄清,无菌生长,无菌检查试验结果符合规定。

伊维菌素微乳中伊维菌素的含量测定方法研究

为建立伊维菌素微乳中伊维菌素含量的高效液相色谱(HPLC)测定方法,选用Hypersil ODS2(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱,流动相为甲醇∶乙腈∶水为35∶60∶5(V/V/V),检测波长为244nm,柱温为30℃,流速为1mL/min进行测定。结果显示,伊维菌素在该色谱条件下,系统适应性良好,在80~320μg/mL浓度范围内线性关系良好,回归方程为:Y=22 700X+2 510,R^2=0.9998,总平均回收率为101.90%±2.94%,RSD为2.88%,对中试生产的3批伊维菌素微乳进行含量测定,RSD为1.86%。表明该含量测定方法准确可靠,重现性好,可用于伊维菌素微乳中伊维菌素含量的测定,并为该新型制剂的质量标准的制定和质量评价提供依据,也为后期的临床安全应用提供可靠的参考。

伊维菌素微乳制剂的过敏性研究

本试验旨在观察伊维菌素微乳制剂对动物的过敏性反应。以《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》为指导,选用豚鼠及Wistar大鼠为试验动物,采用全身主动过敏试验和被动皮肤过敏试验观察伊维菌素微乳制剂对动物的致敏作用。结果显示伊维菌素微乳制剂对豚鼠和Wistar大鼠的过敏性反应均为阴性。本试验为伊维菌素微乳制剂的安全性评价提供了试验依据。

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂防治十字花科蔬菜小菜蛾的效果

1%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂防治十字花科蔬菜小菜蛾的防治效果明显,具有高效、速效、持药期长的特点,施药后1d防效为82.80%,药后3d为91.31%,药后7d防效为94.75%,且对花椰菜生长安全。

甲胺基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂防治小菜蛾田间药效试验

经试验验证,大庆志飞生物化工有限公司生产的2.2%甲胺基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂对十字花科蔬菜小菜蛾的防治效果可达95%以上,持效期可达15d以上,值得推广使用。

10％阿维菌素·哒螨灵微乳剂防治柑桔锈壁虱试验研究

作者开展了10％阿维菌素·哒螨灵微乳剂防治柑桔锈壁虱田间药效试验，药后30天2000倍液和3000倍液处理防效分别达到80．38％和77．13％，与其它各处理间差异均达显著或极显著水平。对柑桔锈壁虱的发生有一定的控制作用，生产中可进一步示范推广。

阿维菌素微乳剂对甘蓝小菜蛾的田间防效试验

小菜蛾是甘蓝种植区发生最普遍的害虫之一,已成为甘蓝生产过程中最难防治的害虫之一。本试验比较了不同浓度的阿维菌素微乳剂对甘蓝小菜蛾的防治效果,结果表明,1.8%阿维菌素微乳剂每667 m2用量为27.78 g时,施药3 d后防治效果高达90%以上,且速效性和持效性均良好,施药后7 d防治效果高达93%以上。可见,阿维菌素微乳剂能够有效控制甘蓝小菜蛾,且应用效果较理想,推荐在生产中使用。