微载体生物反应器培养猪传染性胃肠炎病毒最佳收获时间的研究

本试验旨在探讨使用微载体生物反应器培养猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的效果,对比不同时间段培养出的抗原效价,从而确定TGEV培养的最佳收获时间,提升抗原效价,为最终生产出高质量、品质稳定的TGEV活疫苗奠定基础。在生物反应器细胞上罐时每次接入细胞量达到1.2×10~9个,按相同的条件进行培养。当微载体上的细胞长至单层致密时,进行细胞接毒,接毒后4 h开始取样,接着每隔2 h留样,18 h后每隔1 h取样1次,直到载体上细胞总脱落面积达80%~85%结束取样,检测抗原效价。结果表明:在接毒后20~21 h病毒效价达到峰值,故确定在接毒后20~21 h为病毒最佳收获时间。

微载体生物反应器按不同细胞密度培养猪圆环病毒2型的研究

本试验旨在探讨微载体生物反应器使用不同PK15细胞密度培养猪圆环病毒2型的效果,对比不同细胞密度培养出的抗原效价,从而选择最佳细胞密度培养猪圆环病毒2型,提升猪圆环病毒2型抗原效价。在生物反应器细胞上罐时分别按每个微载体20、30、40、50个细胞的细胞密度接种至4台相同的生物反应器罐中进行培养,每罐均按相同的条件培养,在分别培养4 h、24 h、48 h、96 h时取样观察细胞的生长状态并统计细胞密度,当大部分载体细胞脱落70%时收获抗原,并留样检测其抗原效价。结果显示:每个微载体40个细胞的细胞密度上罐培养的效果最好,表现在4 h时细胞贴附微载体较均匀,24 h时90%微载体长满单层细胞,48 h时细胞生长致密,细胞密度增长8倍,72 h时细胞增长7倍,最终收获抗原效价最高达到107.5TCID50/m L。结果表明:每个微载体40个细胞的接种密度上罐,培养效果最好,效价最高。因此,在微载体生物反应器上培养猪圆环病毒2型时,选择合适的细胞密度接种是保证培养高效价病毒的一个重要前提。

模拟微重力下三维培养对人肝干细胞增殖和分化的影响

目的:探讨微重力环境对肝干细胞增殖及分化的影响。方法:从人肝组织中分离、培养肝干细胞,进行肝干细胞鉴定后,分别进行平面培养、微载体培养、模拟微重力下三维培养。利用倒置相差显微镜、扫描电镜观察不同培养条件下细胞形态学变化;检测上清液中葡萄糖消耗量和乳酸脱氢酶含量以比较细胞增殖和活性情况;荧光定量PCR法检测细胞ALB、EpCAM、CK19、AFP、HNF6、CYP3A4、CYP3A7 mRNA表达变化。结果:模拟微重力环境下,肝干细胞以微载体球面为基底呈三维立体结构生长,形成大小不等细胞团;扫描电镜下见细胞团表面有丰富的细胞外基质及微绒毛;从9 d开始葡萄糖消耗量明显增加,至17 d达高峰,而LDH含量始终保持低水平;培养至21 d细胞仍高表达EpCAM、ALB、CK19、HNF6、CYP3A7,不表达AFP、CYP3A4,符合肝干细胞表型特征,与微载体培养结果相比有统计学差异(P<0.05)。结论:模拟微重力环境能促进肝干细胞呈三维立体结构生长,有利于细胞快速增殖并维持细胞活性和表型。