应用微量凝集法检测家兔大肠杆菌抗体水平的试验

本试验应用兔源致病性大肠杆菌 E1、E2、E7株的培养物经 12 1℃高温处理 2 h,制成含 0 .5 %石炭酸生理盐水的大肠杆菌“O”抗原悬液 ,抗原凝集效果呈现出最佳的检测工作浓度为 12亿细菌 / m l,应用该方法检测免疫过兔大肠杆菌疫苗的家兔血清抗体峰值达 1∶ 12 8,而从非免疫兔和免疫过兔瘟、多杀性巴氏杆菌病。

用微量凝集试验检疫家畜布氏杆菌病

用微量凝集试验检疫家畜布氏杆菌病王川庆，孙海峰，范庆高，李忠勇，王相根，熊书海，左新桐，侯玉泽，宋永军（河南农业大学畜牧兽医系，郑州４５０００２）目前，血清试管凝集反应仍是在布病检疫中应用最广的血清学方法之一。但是，因其采血量大、操作方法落后、反应时...

微量凝集试验检测鸡大肠杆菌抗体方法的建立及应用

建立了检测鸡大肠杆菌(E.coli)抗体的微量凝集试验法,所用抗原由制苗株制得。经方阵试验,抗原最适浓度为40亿菌/ml,反应最佳时间为4小时。攻毒试验表明凝集抗体效价在1:16时免疫鸡保护率耍达50%以上,且凝集抗体水平与保护力呈明显正相关。经E.coli多价油乳剂灭活苗免疫的青年鸡在免疫后42天平均抗体达7.25log2本法敏感性高、特异性强、染色抗原使结果判定更加客观和明显。为鸡大肠杆菌病的流行病学检查及免疫鸡群的抗体监测提供了条件。

微量凝集试验对鸡大肠杆菌O抗原血清型鉴定的研究及初步应用

为改进大肠杆菌血清型鉴定方法，用５株标准菌株在９６孔Ｕ型板上进行微量凝集试验，优选了反应及观察条件：每孔中加５０μＬ菌体抗原（浓度为１．５×１０９－２．０×１０９个菌／ｍＬ）和５０μＬＯ抗原单因子血清（稀释度从１／１０－１／８０）混合，于３７℃反应１．５－２ｈ，阳性结果可在黑色背景上清晰观察到片状凝集。试验各株均与原血清型一致。用此法对１７株来自山东某地的鸡大肠杆菌进行了血清型鉴定，结果Ｏ７８为５株，Ｏ３６５株，Ｏ１３１４株，Ｏ７０３株，与以前用常规方法对该地区菌型鉴定结果相符。

副猪嗜血杆菌新型微量凝集试验抗体检测方法的建立

为建立国内流行血清型副猪嗜血杆菌的新型微量凝集试验抗体检测方法(MAT),本研究以副猪嗜血杆菌4型、5型、12型和13型为抗原,分别对其MAT方法进行了最佳反应条件筛选、特异性、敏感性和重复性试验,以及疫苗免疫样品和临床样本检测。MAT试验结果显示,4型、5型、12型和13型凝集抗原的最佳反应浓度介于1.5×10~9 cfu/mL～2.0×10~9 cfu/mL,最佳反应温度37℃,最佳反应时间为6h～8h。4种型的MAT方法对猪巴氏杆菌病等6种细菌性疾病和猪瘟等5种病毒性疾病阳性血清的检测结果均为阴性,4种方法之间有轻微的交叉反应,但其抗体效价均不高于1∶4 (阴性临界值)。4种型的MAT方法比相应试管凝集方法的敏感性提高了2～4倍,重复性试验结果显示该方法检测副猪嗜血杆菌4种型变异系数均小于10%,重复性良好。利用该方法检测临床样品,并与国家标准套式PCR方法对比,结果显示二者阳性符合率为82.1%。疫苗免疫抗体检测结果显示,4种型的MAT方法均能检测到商品化疫苗免疫猪14 d的血清抗体,可用于疫苗免疫的抗体评价。对临床样品的检测结果显示,断奶仔猪、保育仔猪和经产母猪的总阳性率分别为12.3%、49.3%和69.8%,提示保育期仔猪的合群可能导致了猪群的大量感染。本研究为副猪嗜血杆菌病的疫苗抗体评价和流行病学监测提供了一种简便经济可行的方法。

微量凝集试验检测猪水肿病大肠杆菌抗体研究

作者建立了微量凝集试验检测猪水肿病大肠杆菌抗体方法,对试验反应条件进行选择和优化,抗原最适反应浓度为:染色菌泥与生理盐水之比为1:70～80,最佳反应温度为37℃,最佳反应时间为2～3 h.本方法快速、简便、经济、灵敏度高且特异性强.为猪水肿病的流行病学检查、疫苗研究及免疫猪群抗体监测提供可靠实用的检测技术.

奶牛布鲁氏菌病微量凝集试验诊断方法的建立

为探索操作简便、快速、实用的奶牛布病诊断方法,本研究建立了奶牛布鲁氏菌病(布病)诊断96孔V型板微量凝集方法,并优化了试验条件。结果显示,抗原的最佳稀释浓度为1∶20,反应最适温度为37℃,反应时间为24h;为验证本研究建立的微量凝集方法的准确性,对120份奶牛布病虎红平板凝集试验阳性血清样品进行微量法凝集和试管凝集试验,结果显示,微量法与虎红平板凝集试验的符合率为83.3%,试管法与虎红平板凝集试验符合率为80.0%。提示,微量凝集试验可以作为试管凝集试验的替代方法,应用于规模化奶牛场布病的诊断和检疫。

猪传染性萎缩性鼻炎微量凝集反应诊断抗原的制备

试验制备了猪支气管败血波氏杆菌微量凝集反应用诊断抗原 ,对延边州内某猪场的 6 4份血清进行了猪传染性萎缩性鼻炎的微量凝集反应 ,检出阳性血清 2 6份 (40 .6 3% )。应用甲醛灭活的免疫原免疫家兔 ,制备了抗支气管败血波氏杆菌阳性血清 ,其抗体效价可达 1∶12 80。

鸡大肠杆菌改良微量凝集试验抗原的制备及试验条件优化

本研究对微量凝集试验进行了改良,改进了抗原的制备方法,优选了检测鸡血清中大肠杆菌抗体的微量凝集试验的条件,经方阵试验,抗原最适浓度为70亿/ml,反应最适温度为37℃,最适反应时间为4～5h。结果表明改良后的微量凝集试验具有良好的敏感性和特异性,阳性结果和凝集图案清晰,易于观察。本试验具有敏感、特异、快速、简便、定性又定量的特点,便于推广应用。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌微量凝集试验方法的建立及初步应用

为建立一种快速检测动物源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法,本研究以MRSA耐药性决定蛋白PBP2a的抗血清为检测抗体,通过对抗原浓度及反应温度等进行优化,确定最佳的反应条件后,建立了快速检测MRSA的微量凝集试验方法,并进行了敏感性、特异性、重复性试验以及药敏纸片法比较试验。其中,微量凝集试验最低检出MRSA的浓度为40亿/mL,该方法对MRSA的凝集反应具有良好的特异性,试验结果具有较好的重复性。采用该检测方法对分离自鸡、猪、家兔及小鼠的75株金黄色葡萄球菌进行检测,检出MRSA株占57.3%,经过与药敏纸片法检测进行比较,符合率为92%。该方法快速、准确、简单易行,适于临床或基层应用。

微量凝集试验与酶联免疫吸附试验检测军团菌抗体的比较

目的比较微量凝集试验(MAT)与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中嗜肺型军团菌(Legionella pneumophila,Lp)抗体的优缺点。方法用MAT法和ELISA法检测400份南京地区公共场所从业人员的血清标本中嗜肺军团菌抗体,采用描述流行病学方法进行分析。结果 MAT法检出阳性标本51份,阳性率为12.75%,ELISA法共检出阳性标本47份,总阳性率为11.75%,差异无统计学意义(χ2=0.186,P>0.05),结果高度一致(k=0.930,u=32.75)。ELISA法检出LpIgM阳性标本28份,阳性率为7.00%,与MAT法检测结果差异有统计学意义(χ2=7.430,P<0.05);ELISA法检出Lp-IgG阳性42份,阳性率为10.50%,与MAT法检测结果差异无统计学意义(χ2=0.986,P>0.05);ELISA法检出Lp-IgM和LpIgG阳性率差异无统计学意义(χ2=3.188,P>0.05)。结论 ELISA法快速、操作简便,与MAT法检测嗜肺军团菌抗体结果高度一致,可应用于大批量标本检测。

牛、羊布鲁氏菌病试管凝集试验与微量凝集试验检测方法的比较

血清学检测方法因其快速、安全、高效等特点被广泛应用于布鲁氏菌病的检测和诊断。本文通过对保存的226份牛、羊血清样品同时使用试管凝集法与微量凝集试验进行检测并比较分析其在诊断中的意义。结果显示,微量法与试管法两者的符合率为97.79%,两种检测方法无统计学差异。但微量法的阳性检出率要高于试管法,同时由于微量法具有操作简便、快捷及结果判定更为直观、简单等优点,因此,微量凝集试验更适宜在我国基层布鲁氏菌病大量样本监测、诊断中推广应用。

狐狸阴道加德纳氏菌病微量凝集试验血清学诊断方法研究

在虎红平板凝集抗原研制成功的基础上，又建立了微量凝集试验（Ｍｉｃｒｏ－ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｔｅｓｔ，ＭＡＴ）血清学诊断方法，对狐狸阴道加德纳氏菌（ＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａｖａｇｉｎａｌｉｓｏｆＦｏｘ，ＧＶＦ）病进行血清抗体检测，试验结果表明，该抗原复重性好，阳性检出率为９４．３％，敏感度比虎红平板凝集抗原高５．１倍，两方法符合率为９５％，在确定的试验标准中，微量凝集抗原无交叉反应，是诊断狐狸阴道加德纳氏菌感染的又一血清学特异方法。

用微量凝集试验检测鸡弯杆菌性肝炎抗体

鸡弯杆菌性肝炎是由空肠弯杆菌所引起的青年鸡和产蛋鸡［１］的以肝脏肿大、出血变性、坏死［２，３］、发病率高、死亡率低为特征的一种细菌性传染病。在恶劣环境和其它疾病情况下往往引起鸡弯杆菌性肝炎的暴发与流行，致使小鸡发育迟缓，青年鸡开始迟延，成年鸡产蛋下降...

微量凝集试验用大肠杆菌O50、O60、O117、O131定型血清的研制

为进一步完善中国大肠杆菌菌体微量凝集试验定型血清库,改良微量凝集试验用大肠杆菌O抗原定型血清的制备工艺,本试验选取大肠杆菌O50、O60、O117、O131血清型进行定型血清制备方法的探究。首先用大肠杆菌不同血清型的参考菌株制备灭活抗原,而后多次免疫家兔以采血获得粗血清,用微量凝集试验的方法确定不同粗血清的交叉凝集素及凝集效价,再通过交叉凝集素吸收法结合血清稀释法消除非特异性凝集,最终研制出特异性良好的微量凝集试验用大肠杆菌O抗原定型血清。本研究确定了大肠杆菌O50、O60、O117、O131定型粗血清的主要交叉凝集素,最终成功研制出特异性良好的微量凝集试验用大肠杆菌O50、O60、O117、O131定型血清共4种,凝集效价在1∶256至1∶2048之间,其中微量凝集试验用大肠杆菌O50、O60定型血清无交叉凝集素,为单因子定型血清,微量凝集试验用大肠杆菌O117、O131定型血清存在1~2种非特异性的交叉凝集素O14和O107。本研究作为大肠杆菌O抗原定型血清制备工艺摸索过程中的重要部分,为完善中国大肠杆菌菌体微量凝集试验定型血清库,进一步改良微量凝集试验用大肠杆菌O抗原定型血清的制备方法提供了重要理论依据。

嗜水气单胞菌微量凝集反应条件的研究

应用灭活嗜水气单胞菌作为凝集原，兔源抗血清作为凝集素，比较了在不同条件下微量凝集反应的结果。当菌液浓度约为１０８／ｍｌ，每孔反应液为３０μｌ时，与常规的玻板凝集反应比较，可提高２～３个血清滴度。应用振荡器可加快反应，在１０ｍｉｎ内就可判读结果。温度（在１０～３７℃范围内）的影响不明显。应用该法和玻板凝集法同步检测免疫鱼鳖血清的结果表明，该法不仅具有敏感性高、提高检测率的优点（比平板法提高３２％），而且还能定量检测鱼鳖血清抗体滴度和快速进行细菌鉴定（筛选鉴定了４株嗜水气单胞菌和６株水气单胞菌），为流行病学调查、免疫效果观察和细菌鉴定提供了敏感和可靠方法。

微量凝集试验检测鸡霍乱抗体的研究

试验优选了检测鸡血清中多杀性巴氏杆菌抗体的微量凝集试验条件,改进了抗原的制备方法。结果表明,改进后的微量凝集试验具有良好的敏感性和特异性,凝集图案清晰,易于观察;试验还证实了鸡血清中的抗体凝集效价与其对强毒菌株攻击的保护作用一致,初步认为,鸡霍乱抗体的免疫临界线为1:28。

马流产沙门氏菌的分离鉴定及其微量凝集抗体检测方法的建立与应用

[目的]对流产马驹组织进行马流产沙门氏菌的分离和鉴定,以分离株制备凝集抗原,旨在建立一种敏感、特异、操作简便和高通量的微量凝集方法,实现对马流产沙门氏菌抗体进行快速检测.[方法]利用沙门氏菌显色培养基对流产的马驹脏器进行细菌分离,对紫色菌落进行革兰氏染色鉴定;提取细菌全基因组,利用16S rRNA进行PCR扩增和测序鉴定,并对菌株进行生化鉴定和血清型鉴定,对病因进行综合诊断.利用分离获得的阳性菌株进行灭活后作为凝集抗原,以马流产沙门氏菌标准阳性血清作为阳性对照,通过反应条件优化,建立微量凝集试验方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了验证.与国家行业标准中的试管凝集试验方法进行对比,同时利用微量凝集对华北和西北各3个地方的共151份血清样品进行检测,并随机选取30份样品,利用微量凝集和试管凝集进行检测,并对两种方法检测的敏感性进行比较分析.[结果]各流产马驹组织在沙门氏菌显色培养基上划线结果,均可以获得大量紫色目标菌落;革兰氏染色结果表明,分离的菌株为革兰氏阴性短杆菌,16S rRNA测序证实分离株为沙门氏菌属,生化鉴定结果表明,分离的17株菌均符合马流产沙门氏菌的生化特性,但相比上世纪强毒株马流产沙门氏菌C77-1,均不能发酵鼠李糖;血清型鉴定证实分离株均为马流产沙门氏菌,将分离的17株马流产沙门氏菌分别命名为E.S-1-17.因此证实马匹流产均为马流产沙门氏菌感染所致.利用甲醛对E.S-1菌株进行了灭活处理,成功制备了马流产沙门氏菌凝集抗原,并建立了一种快速敏感的微量凝集检测方法,其中优化了最佳反应凝集抗原浓度为4亿/mL.其敏感性比试管凝集高1个滴度,其特异性与其他常见马传染病病原阳性血清无交叉反应,并且具有良好的重复性.利用微量凝集方法,对华北3个疫情区进行检测,阳性率分别为28.6%、42.9%和27.3%,西北3个无疫情区阳性率均为0%.此外,利用两种方法对相同的30份临床血清进行检测,微量凝集和试管凝集方法阳性份数分别为10份和3份,阳性率分别为33.3%和10%.与试管凝集相比,微量凝集诊断敏感性为100%,诊断特异性为74.1%,总体符合率为76.7%.[结论]分离鉴定获得了17株马流产沙门氏菌,建立了马流产沙门氏菌微量凝集抗体检测方法,该方法敏感性高、特异性强、重复性好,简便、快速、高通量,可以广泛应用于马属动物中马流产沙门氏菌抗体的检测,是该病诊断及疫苗评估的重要依据之一.

微量凝集试验诊断牛肺疫的研究——Ⅱ、抗原保存和现地应用

牛肺疫微量凝集试验抗原分别经4～8℃和8～31℃保存至第444～497天效价稳定;受检血清灭活组优于不灭活组;抗原对6种其他疫病病牛的阳性血清未出现交叉反应;微量凝集试验在实际应用和与剖检符合率方面都比补体结合反应有较明显的优越性。