微量稀释联合平板计数法评价聚维酮碘抗菌活性及其影响因素

[目的]建立一种评价聚维酮碘抗菌效果的科学方法,并研究影响其抗菌能力的因素,为聚维酮碘防控水产细菌病提供参考。[方法]采用微量稀释联合平板计数法(包括标测法和模测法)测定了不同厂商和批次聚维酮碘的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,并评估了孵育温度、细菌浓度、培养基浓度、pH、货架期对聚维酮碘最小抑菌浓度的影响。[结果]标测法测得的聚维酮碘对4株渔源多重耐药菌的MIC(213~17g/m^(3))和MBC(216~19g/m^(3))是临床使用浓度的数万倍。模测法测得的聚维酮碘对MH可培养水生菌的MIC(27~11g/m^(3))和MBC(29~12g/m^(3))是临床使用浓度的数百到数千倍。试验体系的温度(5℃到35℃)越高、细菌浓度(103到108cfu/mL)越大、培养基浓度(0.082~21 g/L,MH)越大、pH(5.5到9.5)越高,聚维酮碘对细菌的MIC越大。聚维酮碘固态原粉货架期为18个月,而聚维酮碘溶液货架期约3个月。[结论]聚维酮碘对渔源致病菌和水生MH可培养菌的MIC远远高于临床使用浓度;水温、pH、培养基浓度、细菌浓度都影响抗菌活性;聚维酮碘固体稳定性远高于其水溶液。

牛全乳内孕酮酶免疫微量平板直接、简便测定法B·S·P RAKASH等

用孕酮6β-半琥珀酸-辣根过氧化物酶作酶标和孕酮-7α-羧乙基-硫醚-BSA抗血清的酶免疫试验来测定牛全乳内的孕酮。首先和微量平板上用精制的有亲合力的绵羊IgG与兔IgG发生反应,用1μl全乳(用缓冲溶液将全乳稀释20μl)、100μl酶标和100μl抗血清混匀,置暗处90分钟完成免疫反应。冲洗微量平板后,加入酶底物溶液150μl,混匀置暗处40分后反应停止。在波长450nm测定其光密度。度数曲线的灵敏度在0.8—40Pg/孔范围,相当于0.8—40ng/ml。用酶免法(EIA)和放免法(RIA)对牛周期乳样内孕酮浓度进行同步测定,两种方法所获得的0.91全相关与估计值一样。结果表明,用EIA测定牛乳样孕酮比用RIA法灵敏度提高了十倍。

微量平板稀释法测定血清杀菌活性的方法学研究

目的:采用微量平板稀释法测定血清杀菌活性(SBA)。方法:选择Mueller Hinton肉汤(MHB)为稀释剂、控制隔夜培养的菌悬液光度在108～109cfu/mL,以微量平板稀释法和琼脂平板计数法分别测定头孢哌酮钠对金黄色葡萄球菌ATCC25923,大肠埃希氏菌ATCC25922,铜绿假单胞菌ATCC27853三种标准质控菌的血清杀菌活性,并测定头孢哌酮钠对三种标准质控菌的SBA的天间和天内重现性。结果:微量平板稀释法与琼脂平板稀释法测定的结果相似,SBA中位数经秩和检验差异无统计学意义(P>0.05)。微量平板稀释法测定的结果天内、天间差异均无统计学意义。结论:微量平板稀释法测定SBA方法简便、易行,实验结果稳定、可靠,具有可行性。