橡胶树白粉菌分生孢子DNA的微量提取方法建立

由橡胶树白粉菌(Erysiphe quercicola)引发的橡胶树白粉病是我国天然橡胶产业中的一个重要病害,其对乳胶产量造成了严重威胁。随着预测预报技术的不断进步,结合qPCR检测和孢子捕捉技术有望成为高效预测白粉病流行的新方法。本研究针对橡胶树白粉菌分生孢子DNA的微量提取,通过比较不同预处理方式、不同材质的研磨珠以及不同类型的研磨装置,筛选出了最适合的孢子样品研磨体系。进一步比较了CTAB法与几种商业提取试剂盒的提取效率,最终确定了一种可行的孢子DNA微量提取方法:将白粉菌分生孢子水溶液置于4℃超声处理10 min后加入2 mm氧化锆珠0.2 g、0.4~0.6 mm玻璃珠0.2 g以及0.2 mm氧化锆珠0.2 g,用组织研磨仪在4℃70 Hz条件下研磨40 s,停10 s,20个循环,最后使用CTAB法提取DNA。通过qPCR定量,可以在101个/mL的孢子悬浮液当中检出橡胶树白粉菌DNA,且不受田间复杂情况的干扰,具有高灵敏度和强特异性,为橡胶树白粉病的预测预报提供了可靠的理论依据和有效的技术手段。

一种适宜PCR检测的番茄DNA微量提取方法

通过比较DNA微量提取方法和3种常规提取方法得到的DNA质量和PCR扩增结果,找到一种适用于番茄PCR技术的快速、简单、成本低的DNA提取方法。该方法的材料不用液氮,避免使用酚类、氯仿等有毒试剂,可以单人大批量提取,并在番茄分子标记辅助育种中能稳定而准确的规模化PCR检测。

向日葵种子蛋白质的微量提取和双向电泳技术研究

从向日葵干种子的中轴(包括胚芽、胚轴及胚根)和子叶的微量样品中提取蛋白质的技术进行了研究,并在此基础上对提取的蛋白质进行了SDS-聚丙烯酰胺凝胶为基础的单向和双向电泳分析,获得清晰的电泳图谱。结果显示:向日葵胚中轴与子叶样品中的蛋白质存在明显差别,而子叶的上部、中部和下部的蛋白质图谱比较相似。通过进一步的双向电泳对比分析可知,胚中轴与子叶的蛋白质相似性系数为0.785,两种组织均具有特异性蛋白质;胚中轴特异蛋白质有18种,子叶特异蛋白质有10种。这些研究结果为进一步的组织特异性蛋白质鉴定及研究子叶和胚中轴的发育机理,以及开展向日葵种子蛋白质组学的研究奠定了实验基础,同时对农业生产中种子纯度鉴定、种子生活力检验及种子发芽实验亦可能具有研究和利用价值。

小麦白粉病菌基因组DNA的微量提取及ISSR-PCR反应体系的优化

为了寻找适合小麦白粉菌基因组DNA微量提取的方法,本试验利用改进的CTAB法、电钻微量研磨一管法、FastPrep DNA试剂盒法和Chelex-100法分别提取小麦白粉菌基因组DNA。比较得出,在微量提取时,CTAB法的提取率较高;在分生孢子量较多时,FastPrep DNA试剂盒方法提取的DNA质量较高,这两种方法提取的DNA均适用于ISSR-PCR。采用正交设计L16(45)法优化了适合于小麦白粉病菌群体的ISSR体系,确定了25μL时优化的反应体系:1×buffer、模板DNA0.5ng、dNTP0.14mmol/L、TaqDNA聚合酶1U、引物1.4μmol/L、Mg2+1.8mmol/L。利用该体系筛选出了一批多态性较好的ISSR引物,为小麦白粉病菌遗传多样性研究奠定了基础。

番木瓜组培苗叶片基因组DNA的微量提取

比较了3种从番木瓜组培苗叶片中提取基因组DNA的方法.结果表明:改良CTAB法步骤简单,DNA得率与质量均较高,并能用于转基因植株的PCR检测、限制性内切酶酶切以及后续的反向PCR反应;SDS-KAc法存在RNA残留;试剂盒法的DNA得率与质量均较低.

一种快速微量提取柑橘早期胚基因组DNA的方法

[目的]建立一种快速微量提取柑橘基因组DNA的方法。[方法]采用优化的CTAB微量提取法,以20.0、10.0、5.0、2.5 mg早期杂种胚为材料进行基因组DNA的提取,并对其DNA进行质量检测和SSR验证。[结果]该方法简单易行,所需材料少,提取的DNA纯度较高,OD260nm/OD280nm在1.800～2.000,可满足SSR等以PCR扩增为基础的试验需要。[结论]建立的方法可以用于快速微量提取柑橘基因组DNA。

水稻基因组DNA微量提取

随着植物学向分子水平的深入发展,研究中经常需要获得高质量的植物DNA样品,因此,建立植物DNA提取与纯化的常规实验方法对教学和科研都显得非常必要。介绍一种快速提取微量DNA的方法,该方法简单易行,无需任何特殊设备,所需样品量少,提取的DNA纯度高,可满足以PCR扩增为基础的实验需要。

一种快速微量提取植物叶片DNA的方法

介绍了一种快速提取微量DNA的方法。该方法简单易行,无需任何特殊设备,所需样品量少。提取的DNA纯度高,D260nm/D280nm在1.9～2.1之间,可满足RAPD、SSR、转基因植株的PCR检测等以PCR扩增为基础的实验需要。

海洋尾丝虫(Uronema marinum)的DNA微量提取研究

以分离自青岛的海洋盾纤类纤毛虫 ,海洋尾丝虫 (Uronemamarinum)为材料 ,就微量条件下提取DNA的方法进行了探讨。成功地获得了活体直接提取、活体苯酚 /氯仿抽提、固定标本直接提取以及固定标本苯酚 /氯仿抽提等四种简便有效的微量DNA提取法。

柑橘黄龙病病原DNA微量提取方法比较

对比分析了3种黄龙病病原DNA微量提取方法,方法1和方法2分别采用Sandrine等人和Hung等人的黄龙病病原DNA提取方法,但取样量分别由100mg和250mg减少为20mg和10mg;方法3采用周常勇等人的微量核酸提取方法,取样量为10mg。实验结果表明方法1提取的病原DNA浓度低、杂质多,PCR效果差;方法2提取的病原DNA浓度较高、杂质少,PCR效果好,但提取周期较长,不适合大批量样品的PCR快速检测;方法3提取的病原DNA浓度较高、杂质少,PCR效果好,且提取速度快,适宜大批量样品的PCR快速检测。

快速微量提取番茄DNA及SSR-PCR反应体系的优化

以番茄叶片为试材,采用改进的CTAB法,电钻研磨,提取过程中加入醋酸铜,设计4因素3水平的正交试验对PCR反应体系进行优化,同时利用梯度PCR对退火温度进行选择选择。结果表明:优化的10μL反应体系含:1×buffer,1.2 mmol/L Mg2+,1.5 mmol/L dNTPs,1.2μmol/L引物,0.75 UTaqDNA聚合酶,10 ng模板DNA。扩增程序为:94℃预变性2 min;94℃变性30 s,49.2℃退火30 s,68℃延伸30 s,共35个循环;最后72℃延伸8 min。优化的反应体系可以用于SSR分子标记机的研究,在所有SSR引物中基本都能有效扩增;改进的CTAB法提取的DNA纯度更高。

拟南芥基因组DNA微量提取方法的改良

为了简化DNA提取方法的步骤,减少(或避免)有机溶剂的使用,对以前的提取方法进行了改进,报道了一种专供PCR分析的快速微量提取拟南芥基因组DNA的方法。该方法在常温下仅需10 mg左右的拟南芥叶片,以Tris-HCl为提取溶剂,简单研磨后以牛血清蛋白溶液回溶,离心后的上清液即可直接用于PCR检测。该方法大大简化了传统提取方法的步骤,缩短了提取时间,而且完全避免了对一些有机溶剂的使用,克服了传统方法中由于酚的残留带来的后续PCR等操作上的困难,完全可以满足以PCR扩增为基础的试验需要。

Sorghum属7个近似种的DNA微量提取方法比较

本研究以Sorghum属中 7个近似种的种子为试验材料 ,采用CTAB、SDS、CTAB与SDS相结合及TaKaRaDNA提取试剂盒等 4种方法提取DNA ,并对不同提取方法所获取的DNA纯度、浓度及DNA提取率进行研究分析比较。结果表明 :采用Moller方法对其 7个近似种的基因组DNA的提取为最佳方法。

野生烟草中茄尼醇的微量提取工艺优化

目的研究野生烟草中微量提取茄尼醇最佳工艺。方法采用超声波正己烷、无水乙醇提取法和正己烷、无水乙醇热回流4种实验方法进行单因素实验,并在正己烷水热回流中采用正交试验方法,对影响茄尼醇微量提取得率的4个因素提取温度、提取次数、提取时间、料液比进行筛选优化。结果微量提取茄尼醇最佳工艺条件为:用10倍量的正己烷于45℃热回流提取3次,每次90min。结论验证试验表明,优选出的提取工艺稳定,合理,可行。

几种微量提取盐芥DNA方法的比较

[目的]探讨一种提取盐芥高质量DNA的方法。[方法]分别采用简化SDS法、改良CTAB法、CTAB法和改良尿素法提取盐芥DNA,测定不同方法所提取DNA的纯度和浓度,并进行电泳和酶切检测,并对其结果进行比较。[结果]改良CTAB法提取的DNA纯度高、质量好,没有糖类、酚类及蛋白质的污染,能用于PCR扩增和限制性内切酶酶切。CTAB法提取的DNA没有蛋白质的污染,但有酚类物质的污染,可作为PCR扩增的模板。SDS法以及尿素法提取的DNA质量较差,不能满足分子生物学研究的要求。[结论]改良CTAB法比其他方法更适合分子生物学分析和研究。

一种适于PCR检测的DNA微量提取方法

报道一种简单快速、适于转基因再生植株鉴定的DNA微量提取方法。此法特点:无须研磨,不用液氮,取样量少,操作简便,可在一个离心管中完成;较短时间内可检测大量再生植株,所提取的DNA样品可满足PCR检测要求,结果稳定。

纤毛虫单细胞基因组DNA微量提取方法的比较及优化

在纤毛虫的分子生物学研究中,单细胞基因组DNA的微量提取是后续基因分析的关键。本研究以海洋纤毛虫红色伪角毛虫为材料,采用直接取完整虫体、裂解法以及3种改良后的试剂盒微量提取DNA方法,分别提取了新鲜样品与4种不同方法保存样品的基因组DNA,比较了9种组合在PCR产物质量、提取所需时间、成本及便捷性方面的优劣,并进一步比较、讨论和探索了4种样品保存方法和5种DNA微量提取方法在纤毛虫单细胞基因组PCR扩增中的可行性。本工作旨在为后续的纤毛虫分子生物学研究提供可资借鉴的技术路线和方法。

用于转基因植株检测的DNA快速微量提取方法

建立了一个用于转基因小苗检测的ＤＮＡ快速微量方法．每２０ｍｇ新鲜叶片可提出约１０ μｇ ＤＮＡ，且 ＤＮＡ有较好的完整性，Ａ２６０／２８０值在１．７～１．９范围内，并适合于点杂文和ＰＣＲ分析．

四季桔试管苗基因组DNA微量提取方法

本试验以四季桔试管苗为试材,进行基因组DNA微量、快速提取方法的研究。结果表明:采用改良CTAB法,仅需20mg样品、2.5h就能获得高纯度、高质量的DNA,这是目前木本植物样品量最小的DNA提取方法;提取的DNA能直接被限制性内切酶BamHⅠ酶切,也能进行PCR扩增,可用于进一步的分子生物学研究。

固相微量提取技术在材料贮存监测中的应用

样品的提取和制备是分析测试的基础，尤其在微量组分分析中它是确保分析成功的关键。本文概要介绍了样品的固相提取(制备)技术及固相微量提取技术在微量样品获取方面的应用，针对密封条件下炸药和有机材料等库存老化的监测，对如何开展固相微量提取技术的应用研究提出了建议。