奶牛乳房炎大肠杆菌刃天青微量板快速诊断及药敏试验

为了建立奶牛乳房炎大肠杆菌快速诊断与药敏试验方法,用刃天青钠取代大肠杆菌选择培养基MQQ中的酚红指示剂,通过对刃天青的工作浓度、大肠杆菌接种量和培养时间等参数的研究,建立了奶牛乳房炎大肠杆菌刃天青微量板快速诊断方法。将不同细菌及其感染模拟奶样进行刃天青微量板快速培养结果显示,此刃天青微量板对大肠杆菌具有很强的选择培养特性,能在10h内获得明确诊断结果,并能反映奶牛乳腺大肠杆菌感染强度。对89份临床奶样进行大肠杆菌刃天青微量板快速诊断敏感性和特异性检测,结果显示,此刃天青微量板法诊断大肠杆菌阳性奶样敏感性高达100%,诊断大肠杆菌阴性奶样特异性高达94.9%,总符合率高达95.5%。在此基础上用矫正浓度10种抗生素包被微量板,分别用10株大肠杆菌纯培养菌株及其感染模拟奶样和10份大肠杆菌阳性奶样进行快速药敏试验,所获结果与标准纸片扩散法完全一致。这些研究结果表明,本研究建立的刃天青微量板法可以取代常规方法用于奶样大肠杆菌的快速诊断及药敏试验。

微量板法与试管法检测ABO血型抗体效价的比较

目的比较微量板法与试管法检测ABO血型Ig M抗体效价的差异。方法使用微柱凝集法对129例健康供者和91例造血干细胞移植患者进行ABO血型正反定型鉴定,根据反定型结果,同1标本同时经试管法与微量板法进行ABO血型Ig M抗体效价测定并进行比较。结果 220例被研究者中,162例标本需要进行抗体效价检测。抗-A/抗-B效价在不同病例群体中,2种方法检测的一致性差异不具有统计学意义(P>0.05);2种方法检测造血干细胞移植患者ABO血型抗体效价、健康供者抗-A效价的差异不具有统计学意义(P>0.05);微量板法测得的健康供者抗-B效价明显低于试管法(17.78±3.02 vs 19.05±2.95,P<0.05)。结论全自动微量板法微量板法可广泛用于造血干细胞移植患者ABO血型Ig M抗体效价的检测,而用于健康供者抗-B效价检测时抗体效价低于试管法,必要时需要增加试管法。

奶牛乳房炎链球菌的刃天青微量板快速诊断与药敏试验

本研究以刃天青钠取代链球菌选择培养基EN的溴甲酚紫指示剂,建立了奶牛乳房炎链球菌快速诊断与药敏试验用微量板。将不含指示剂EN的培养基分装到96孔板,接种不同细菌或其感染模拟奶样,培养2h加入优化浓度的刃天青指示剂,结果表明能显示无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌生长,不能显示大肠杆菌和葡萄球菌生长;检测三种奶牛乳房炎链球菌总敏感性达105cfu/m L,能在10h内获得诊断结果。60份临床奶样诊断结果显示,刃天青微量板法检测链球菌阴性奶样特异性达100%,检测链球菌单阳性奶样敏感性为100%,检测链球菌混合阳性奶样敏感性达97.1%。用矫正浓度的10种抗生素包被微量板,分别用10株链球菌纯培养、感染模拟奶样和9份链球菌阳性奶样进行刃天青微量板法快速药敏试验,所获结果与标准纸片扩散法完全一致。试验结果表明,本研究建立的刃天青微量板法可取代标准方法用于奶牛乳房炎链球菌的快速诊断及药敏试验。

一种简便快速的人干扰素微量板染色测定法

干扰素(IFN)抗病毒检测法虽有多种,但多不够理想。细胞病变抑制法(CPE)费时费力,不适应大量标本的测定,病毒神经氨酸苷酶测定法、逆转录酶抑制测定法,以及病毒核酸测定法等,虽可在24h完成测定,但多需采用复杂的技术和设备,而未被广泛采用。近年来,随着IFN单克隆抗体的制备成功,已出现一系列更快速、更灵敏的测定法,如放射免疫测定法、酶免疫测定法,但正如Johnston等所述,由于IFN分子可变性和断裂而失去活性,故仍需用CPE测定为标准。笔者以肖成祖等报告的人干扰素微量板染色测定法为基础加以改进,将干扰素、测定细胞和攻击病毒同时加入微量板,从而较常规法省时1～2d以上。笔者就细胞浓度、病毒稀释度以及攻毒时间对干扰素测定的影响作如下报告。

微量板倍量稀释法检测IgG抗A(B)效价改进研究

目的通过实验研究改进微量板倍量稀释法检测IgG抗A(B)效价。方法采用微量板倍量稀释法,选取一个高值和一个低值标本来比较裂解液类型(2-Me、DTT)与稀释比例、裂解液处理时间和细胞温浴时间差异对结果的影响,综合得出最佳操作方案,将此方案与试管倍量稀释法进行比较,判断改进后的效果。结果得出改进后的操作方案:DTT与血清比例为3∶1,37℃处理时间为60min,细胞温浴时间为30min。与试管倍量稀释法比较无显著性差别(P>0.05)。结论改进后的方法是准确、有效的,更适合实验室进行大批量标本检测。

微量板聚凝胺法与抗人球蛋白微量板法在输血前不规则抗体筛查中的应用效果比较

目的比较微量板聚凝胺法与抗人球蛋白微量板法在输血前不规则抗体筛查中的应用效果。方法选取2019年8月至2020年8月在我院行输血治疗的600例患者为研究对象,在输血前分别应用微量板聚凝胺法和抗人球蛋白微量板法对血液样本进行不规则抗体筛查。比较两种方法的应用效果。结果微量板聚凝胺法筛查所需时间短于抗人球蛋白微量板法,差异具有统计学意义(P<0.05)。抗人球蛋白微量板法筛查不规则抗体的灵敏度高于微量板聚凝胺法,差异具有统计学意义(P<0.05),两种方法的特异度、准确度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。抗人球蛋白微量板法与微量板聚凝胺法筛查各项不规则抗体的阳性符合率比较,差异无统计学意义(P>0.05),但抗人球蛋白微量板法的整体阳性符合率显著高于微量板聚凝胺法,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论相较于微量板聚凝胺法,在输血前应用抗人球蛋白微量板法进行不规则抗体筛查具有较高的灵敏度,更有利于保障输血的安全性,但其检测时间相对较长。

自动化微量板法检测红细胞不规则抗体的研究

目的利用自动化设备寻找一种简便快速的献血者红细胞不规则抗体(RBC-IAb)筛选方法。方法采用微量板聚凝胺三步法试验(TSPT)、菠萝酶法、抗人球蛋白法(AGT)及经典试管TSPT,平行检测一批Rh等抗体效价,选出最佳的筛查方法,并观察抗凝剂、溶血、脂血对实验的影响。结果在上述四种方法中,以微量板TSPT作为筛检最佳,对14 210名献血者进行了RBC-IAb筛查,发现40例阳性,最多为抗-Mur 15例。结论微量板TSPT筛查献血者RBC-IAb,操作简便迅速,敏感性高,可在自动化加样仪中使用,并能与酶标仪和计算机相结合,尤其适合大批标本筛查。

微量板培养法在O139群霍乱疫情中的应用与比较

目的:通过采用霍乱弧菌常规培养法与微量板培养法,对一起O139群霍乱疫情现场疫源标本进行比对检测研究,以探讨微板法替代常规法的可能性。方法:用霍乱弧菌常规培养法[1]与霍乱弧菌微量板培养法[2],对某地O139群霍乱疫情现场采集的442份疫源检索样品,同时进行病原学检测,对比观察检测结果。结果:两种方法同时检测442份样品,共检出O139群霍乱弧菌18株,其中常规法检出16株,微板法多检出2株为18株。阳性检出率分别为3.62%和4.07%,阳性符合率为88.89%,检出率之间差别无统计学意义。结果显示微板法稍好于常规法,并且微板法还具有以下优点:1)灵敏度高;2)抗原凝集性好;3)培养板体积小、培养基量少(每孔仅用1 ml)、容量大(每板可做24份样品);4)操作简便,不需要特殊设备;5)微量板使用后,经消毒清洗可回收再利用,节约成本,在工作量大时,其实用、简便的优点更为突出。结论:微板法可以用于霍乱弧菌病原检测,可靠性较高,且检测霍乱的特异性和敏感性已达到卫生部《霍乱防治手册》的要求。

刃天青微量板法对沙门氏菌的抗菌敏感性试验

采用刃天青微量板法检测多株沙门氏菌对抗生素的耐药性,得到最小抑菌浓度(MIC)。通过肉眼观察和荧光检测都可判定沙门氏菌的耐药性,判定时间仅需5 h,刃天青法与微量肉汤稀释法检测得到的耐药性结果一致。其中用颜色观察能更清晰明确地分辨出耐药折点,荧光检测可以动态地反映细菌随时间变化的生长情况。刃天青微量板法具有简便、快速、灵敏度高的特点,能确定抗生素的耐药性和精确耐药MIC值。

用微量板ATP生物发光法检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性

目的 探讨 ATP生物发光法作为化疗药物敏感性预测方法的可行性。方法 参照 Sevin等 [1 ] 的 2 4孔培养板培养、手工操作检测的方法 ,改进成 96孔微量培养板全自动检测法。通过检测 K 5 6 2细胞对 11种常见抗癌药物的敏感性 ,并与 MTT比色法比较。结果 两者有良好的相关性 (r= 0 .885 ) ,但 ATP法所测得的变异系数明显小于 MTT法(前者为 1.4%～ 13.6 % ,后者为 0～ 2 4.2 % ,P=0 .0 11)。以 ATP标准品作标准曲线 ,当 ATP的浓度在 10 - 6～ 10 - 1 2范围内时 ,ATP的浓度的对数与发光测定值的对数之间有较好的线性关系。ATP测定值与 K5 6 2细胞实际数之间相关性亦很好 (r=0 .994)。结论 ATP生物发光法是一种敏感、可靠的药敏实验方法 。

应用PCR微量板杂交法检测植物病毒和类病毒

近年来,核酸杂交技术已广泛用于病毒和类病毒的检测。通常采用PCR(聚合—酶链式反应)微量板杂交法。它是由Inouye和Hondo(1990)首先改正的一种新的杂交方法,是以RT-PCR为基础,类似于ELISA高灵敏度的诊断技术,可以检出极微量的病原物,如10fg病毒RNA,灵敏度为ELISA的10000倍,特异性比PCR强,很适宜进出境植物苗木、种子的检疫。其基本原理:从感病植物叶片或种子中抽提病毒或类病毒核酸,经反转录(reverse transcription)为cDNA,再经聚合酶链式反应(Polymerase chain reacdon,PCR)扩增cDNA片断,把cDNA加热变性后直接吸附于聚苯乙烯微量板孔内;将吸附于孔内的cDNA与地高辛(DIG)标记的cDNA探针杂交;

微量板培养法对不同血清型霍乱弧菌检测效果观察

目的:选用不同血清型霍乱弧菌流行株,观察其在不同批次及保存时间的微量培养板上生长情况,分析影响因素,为该方法的推广提供科学依据。方法:采用霍乱弧菌微量板培养法与霍乱弧菌常规培养法平行实验,测试不同批次、不同保存时间及同一批次的微量培养板对不同血清型霍乱弧菌的最小检出浓度。结果:4株霍乱弧菌作为测试菌,对两个批次的培养板每月1次各做了6批实验,微量板最长保存时间200余天。与常规法平行实验比较结果得知,同一血清型霍乱弧菌的最小检出浓度,两法之间差别不大,结果较为一致。保存长达200余天的微量板未发现有培养基干裂、杂菌污染及颜色改变,并且也未影响检测结果。在同一时间使用不同血清型霍乱弧菌,对6个批次的微量板进行两次实验,与常规法相比较,同样取得较为理想的检测效果,有的微量培养板最长保存时间长达300余天,基本上未影响检测结果。结论:微量培养板可以用于不同血清型的霍乱弧菌病原检测,结果证实不同批次或不同保存时间的微量培养板,对霍乱弧菌病原检测结果影响不大,微量板可在冰箱保存6个月以内使用不影响检测结果。

微量板法和试管法检测红细胞不规则抗体的探讨

目的寻找一种简便快速的献血者红细胞不规则抗体(RBC-IAb)筛选方法。方法采用微量板和试管法聚凝胺三步法试验(TSPT)、抗球蛋白法(AGT),平行检测不同的红细胞血型抗体效价,确定最佳的试验方法。结果在上述方法中,以微量板TSPT作为筛检最佳,凡是试管法检出的抗体,微量板法均可检出。结论自动化微量板TSPT检测献血者RBC-IAb,操作简便迅速,适合大批标本筛查。

微量板细胞病变法滴定水痘疫苗的研究

建立了用微量板细胞病变法滴定水痘疫苗的实验方法。将适宜稀释度的病毒与2BS细胞混种于96孔板培养,种毒后第7天观察孔内细胞病变情况,以karber法计算疫苗滴度,并与蚀斑法进行比较。实验表明,微量板细胞病变法滴定水痘疫苗,结果稳定性好,精密度高,较现行的蚀斑法操作简便、误差小,能够较好的反映出水痘的真实滴度,可作为一种较为简便的滴定水痘疫苗的方法。

微量板法测定血清中抗A(B)效价在四季中的变化

正常人血清中含有与红细胞抗原相对应的抗A(B)抗体,对抗体的效价也有报道,但由于检查方法、对象不同,报告不尽相似。本文采用重复性好、敏感性高的微量板技术,探讨了合肥地区献血者A、B、O血清中相对应抗体效价,并且对1年四季血清中抗体效价进行了比较。现报道如下。

试管血凝试验与微量板血凝试验比较

鸡新城疫在自然流行中常呈急性败血症,死亡率可达90%以上,但有的鸡无明显症状,只能由血清学检测查知。鸡新城疫病毒能在鸡胚内迅速繁殖,也可在多种细胞上培养。由于鸡胚培养方法简便,并能获得高滴度的病毒,所以在本病的生物学研究。

用96孔微量板代替小八角瓶培养BTC测定山羊痘细胞弱毒TCID_(50)的试验

用96孔微量板代替小八角瓶培养犊牛睾丸细胞(BTC)测定山羊痘细胞弱毒的TCID50。试验结果表明,通过对2种方法比较得出96孔微量板检测山羊痘细胞弱毒TCID50比八角瓶法具有操作简单、重复性好、容易观察等优点。