微量生物检材定量及分型

目的在传统微量生物检材提取方法中,引入荧光定量流程对样品进行初筛,以提高其有效检验。方法将DNA标准品9947A梯度稀释,使用Rotor-Gene Q实时荧光定量分析仪定量,用AmpF?STR^(TM) Identifiler^(TM) Plus PCR扩增试剂盒检测基因型,构建微量生物检材可获得完整STR分型结果的定量阈值模型,并使用903个微量检材验证其可靠性。结果检材质量浓度>0.03 ng/μL可直接获得有效的分型;检材质量浓度>0.01～0.03 ng/μL,可通过优化增加PCR热循环参数(30个循环)获得有效分型;检材质量浓度≤0.01 ng/μL时,即使优化PCR也无法得到有效图谱。结论该实时荧光定量阈值模型可有效对微量生物检材进行初筛。

特殊载体上微量生物检材DNA检验2例

1案例资料 案例1 2003年2月8日,在浙江某地一公共厕所内发生一起抢劫杀人案.现场勘查中仅提取到一副近视眼镜,没有其他物证线索,而排查出来的嫌疑人均不承认是该眼镜的主人,也未到过现场.

微量接触类生物检材的游离DNA问题分析

目的探究接触类生物检材的游离DNA问题,游离DNA和细胞内DNA含量的比例问题,以及游离DNA在法医检验中的影响。方法对手部、面部和足部的皮肤及口腔粘膜进行模拟微量接触类检材的制备,对模拟检材进行浸泡,对游离DNA进行定量和STR扩增,对剩余检材使用常规程序进行DNA提取、定量和STR扩增,并对结果进行分析和讨论。结果实验观察到,78.55%的样品检测到了游离DNA,其中,手部模拟检材的游离DNA检测率为82.1%,脸部模拟检材的游离DNA检测率为82.1%,口腔模拟检材的游离DNA检测率为96.4%,足部模拟检材的游离DNA检测率为53.6%,微量接触类检材中游离DNA量占DNA总量的12.9%。结论接触类生物检材中提取到的DNA,除了包括细胞内DNA,还存在一定比例的细胞外游离DNA,这为微量接触类检材的DNA有效提取和检验提供了新的理论依据。

微量生物检材提取方法探究

近年,DNA检验技术在快速侦破案件中发挥了重要的作用,但是,随着社会经济高速发展,犯罪手段日趋智能化、科技化和专业化,犯罪分子反侦察能力越来越高,犯罪现场遗留传统生物检材越来越少,微量生物检材比重日趋增大.由于微量生物检材的自身特性,现场检材提取难度较大,DNA检验成功率不能保证.微量生物检材的充分提取是其DNA检验成功的关键,本文对微量生物检材提取方法进行探究,以期为微量生物检材提取方法的选择提供理论依据,提高微量生物检材的DNA检出率.

爆炸案现场微量生物物证检材鉴定

爆炸现场提取送检缠绕的胶带、门框、可疑纸片和现场绿色细绳,用直扩法和磁珠法两种方法检验,直扩法所有的检材未检出基因型,磁珠法缠绕的胶带和现场绿色细绳检出同一未知男性,其他检材未检出基因型。

磁珠法在微量检材DNA提取中的应用

目的:研究磁珠法提取微量生物检材DNA物质的可行性。方法:对汗斑、微量唾液斑、指甲这3类微量生物检材采用磁珠法提取DNA,经过STR荧光复合扩增,ABI310测序仪检测,进行STR分型,以检测提取方法的灵敏度。结果:这3类微量生物检材获得了完整的STR分型。结论:磁珠法提取微量检材中DNA物质的效果较好。

miniSTR基因座及其检测系统在降解检材中的法医学应用

目的建立16个miniSTR基因座的复合扩增体系,探讨其在法医学降解检材中的应用价值。方法采用六色荧光标记技术,对16个miniSTR基因座进行复合扩增体系的构建及法医学应用评估。结果开发出一个六色荧光标记的miniSTR扩增试剂盒,可同时对15个常染色体STR基因座、Amelogenin基因座和DYS391基因座进行分型检测,方法特异性好,分型结果稳定、准确,灵敏度达50 pg,实际案件中常见生物检材的检验结果良好。结论 16个miniSTR复合扩增体系对降解与微量检材的检测具有应用价值,灵敏度高,具有数据库兼容性,可以用于实际案件检验。

利用LCM技术从生物检材中提取单个细胞

目的:对法医学常见生物检材进行涂片染色,并利用LCM技术对检材涂片进行单个细胞的捕获,通过观察结果了解LCM技术是否适于生物检材的单细胞提取。方法:对生物检材进行液体和斑迹分组,针对检材中不同类型的有核细胞,涂片后分别进行吉姆萨和伊红美蓝染色,最后利用LCM技术分离单细胞。结果:液体组检材涂片都能够进行很好的分离,斑迹组涂片染色后完整的有核细胞含量较少,但可以进行单细胞分离。涂片分离效果随时间的增长而呈负相关。结论:利用LCM技术可以有效地对生物检材的染色涂片进行单细胞的分离,精子细胞不染色直接涂片也可以得到很好的分离。

批量提取微量DNA在案件检验鉴定中的应用3例

随着DNA检验灵敏度的提高,越来越多的案件需进行微量生物检材DNA的检验,本实验室应用96孔板批量提取微量生物检材DNA,大大提高了检案效率,在案件中发挥了重要作用。现介绍如下：1方法1.1 DNA提取取细轴棉棒用TES浸湿棉棒上棉签后擦拭送检物品（如绳索、胶带、打火机、螺丝刀等）上可能有脱落上皮细胞的部位,

三种DNA提取法在接触性检材中的应用比较

目的:比较Chelex-100法、磁珠法、硅珠法三种DNA提取法在不同类型接触性检材中的检出量和检验效果。方法:从日常案例中收集不同类型的接触性检材各10例,同时用Chelex-100法、磁珠法、硅珠法提取DNA。结果:通过Chelex-100法、硅珠法提高模板DNA含量,磁珠法提高DNA纯度,减少DNA模板的浪费和抑制物的污染,从而使模板DNA浓度富集到检验标准。常量且污染轻、杂质少的常规检材三种提取方法DNA量无明显差异;污染严重、含抑制剂的微量检材磁珠法DNA提取量最高;污染不严重的微量检材硅珠法DNA提取量最高。结论:Chelex-100法适于常量且污染轻、杂质少的常规检材,磁珠法适于污染严重、含抑制剂的微量检材,硅珠法适于污染不严重的微量检材。根据不同类型的检材选取不同的提取方法,可有效提高微量检材提取的成功率,得到低抑制高纯度的DNA模板,使法医DNA检验技术更好地为案件侦破提供直接证据。

二代测序技术在疑难生物检材法医DNA检验的研究进展

测序技术的不断发展使二代测序技术在测序通量提高和读长增加的同时,成本也大幅度降低。目前二代测序技术已广泛应用于生命科学各领域研究中,并且也逐渐受到法医学者的关注。文中主要阐述了二代测序技术在法医学实践中常见的微量、降解及混合等疑难生物检材DNA检验中的研究进展,对其未来的发展进行了展望,并提出了可能面临的挑战。

犯罪现场中生物检材的发现和提取与案件侦破

随着DNA检验技术的发展，对微量生物检材的检验越来越成为可能。同样，随着犯罪手段的日益智能化，微量生物检材在重大案件中的作用愈来愈重要，甚至对整个重大案件起着决定性作用。因此，如何有效地发现和提取生物检材特别是微量的生物检材显得愈为重要。

中国汉族人群8个STR位点荧光标记同步检测及其频率分布

目的 对血液等微量生物学检材进行 8个 STR多态性位点及一个性别鉴定位点的复合检测 ,并调查了 350名中国汉族无关个体上述基因位点等位基因分布情况。方法 所选位点为 vWA、 TH01、 TPOX、 CSF1PO、 D5S818、 D13S317、 D7S820、 D16S539及性别鉴定位点 Amelogenin,应用荧光染料标记引物，利用 PE－ 377 DNA片段分析仪对扩增产物进行基因分型。结果 共检出 63个等位基因及两个性别决定基因 ,总鉴别机率（ TDP）值达 99.999 999 98％，对法医学常见极微量生物学检材的检测获得成功， DNA模板需要量为 0.5～ 1.0ng，通过家系调查，证明上述位点遗传稳定，符合孟德尔遗传规律。结论 上述 8个 STR多态性位点具备了个体认定能力 ,是对微量生物学检材进行个体识别鉴定的理想方法。