两种实验技术在蛋白质-蛋白质相互作用检测中的应用

蛋白质是生命活动的主要承担者。蛋白质种类繁多,结构多样,具有十分广泛的生物学功能,可作为载体蛋白、酶蛋白和信号肽等参与调控细胞内的各种代谢活动。生物体内蛋白质与其他分子的相互作用,尤其是蛋白质-蛋白质之间的相互作用,是蛋白质行使这些重要生物学功能的基础。通过研究可以相互作用的蛋白质形成的各种复合体,对揭示蛋白质的功能,更清楚地阐明细胞生长、发育、分化和凋亡的生命活动规律,为重大疾病的预防、治疗和新药开发提供了理论基础。目前科研工作者在基于分子生物学、生物化学、微生物学和生物物理学的基础上已经发展出了许多蛋白质相互作用的研究技术,本文着重对现有研究方法中的生物膜干涉技术和微量热泳动技术进行介绍和综述。

甘草黄酮醇降尿酸及抑制氧化应激作用及其机制研究

目的探究甘草黄酮醇(licoflavonol,LCF)降尿酸及抑制氧化应激作用及其机制。方法建立腺苷诱导肾小管上皮细胞NRK-52E的高尿酸细胞模型,给予1.25,5,20μmol·L^(–1)LCF,利用HPLC检测培养液中尿酸、次黄嘌呤、黄嘌呤、腺嘌呤、肌苷、腺苷含量。使用15 mg·dL^(–1)尿酸诱导NRK-52E细胞氧化应激损伤,同时给予1.5,5,15μmol·L^(–1)LCF处理24 h,试剂盒测定细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力及还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及过氧化氢(H2O2)的含量。通过分子对接预测LCF与黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)的结合活性。进一步通过微量热泳动技术(microscale thermophoresis,MST)探究LCF和XO的结合能力。结果LCF可降低腺苷诱导的细胞尿酸水平,提高尿酸诱导后细胞SOD、CAT的活力及GSH含量,并降低H2O2、MDA含量;分子对接结果显示LCF与XO之间结合能为-9.1 kcal·mol^(-1),二者主要形成氢键,对应残基为Thr-262、Glu-263;MST结果表明两者间解离常数Kd=(0.81489±0.2373)mmol·L^(–1)。结论LCF可降低腺苷诱导的细胞尿酸水平并改善高尿酸所致肾小管上皮细胞氧化应激损伤,其降尿酸作用机制可能与XO有关。