微量补体结合试验检测牛、羊副结核病的研究

采用《中华人民共和国出入境检验检疫行业标准》"副结核病补体结合试验操作规程"方法(简称常量法)和微量补体结合试验(简称微量法)检测3677头进口牛羊的副结核病抗体并进行比较。结果表明,常量法和微量法的溶血素效价测定值相同,补体效价测定值近似,阴性血清对照、抗原对照、补体对照、红细胞对照、血清抗补体结合对照结果均相同,阳性对照血清效价微量法比常量法提高1个滴度,被检血清的阳性检出率微量法高于常量法。比较37℃水浴及37℃恒温培养箱环境下的微量法补体结合试验结果,溶血素效价、补体效价、各项对照试验结果完全相同,被检血清在37℃水浴反应更加充分。比较用变态试验和补体结合试验检验3677头牛羊副结核病的结果、以及用补体结合试验、变态反应和酶联免疫吸附试验方法同时检测2024头牛的结果,发现它们的相关性很小。

微量补体结合试验诊断熊病毒性脑炎的研究

用微量补体结合试验对感染熊脑炎病毒而死亡的熊的实质脏器,熊脑炎腺病毒(BA-1株)的犬肾细胞培养物、试验感染犬、豚鼠急性发病期的肝浸液、腹水、血液进行抗原诊断;对6份采自临床健康熊血清和试验感染犬、豚鼠恢复期血清进行抗体诊断。结果表明,本法简便省时,特异性强,可用于熊病毒性脑炎的抗原、抗体的特异性诊断及流行病学调查。

布鲁氏菌病微量补体结合试验的方法改进和应用

【目的】补体结合试验是布鲁氏菌病(简称“布病”)血清学确诊方法。现行国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T 18646-2018)中收录的补体结合试验分为常量法补体结合试验(CFT)和微量法补体结合试验(mCFT),但两者之间的相关技术参数和结果判定标准均存在差异,导致常量法CFT和mCFT检测结果不一致。笔者通过对mCFT参数的改进优化,使现行标准中mCFT的检测结果等效于常量法CFT,实现布病CFT的高通量准确诊断,对现有布病检测方法进行了补充。【方法】参照布病常量法CFT反应条件和诊断标准,对现行国标中mCFT的反应时间、稀释液、效价测定方法、结果判定等相关参数进行改进优化。改进后的mCFT方法与原mCFT方法相比,效价测定中受检血清的稀释度由1﹕2-1﹕64稀释改为1﹕10稀释,稀释方法与常量法CFT相同,确保微量法的检测临界值与常量法一致;采用酶标仪读取OD600值判定溶血强度,降低了试验人员肉眼判定的误差,提升了结果判定的效率和准确性;反应时间由37℃水浴30 min缩短为20 min,提高了检测效率又不影响检测结果;稀释液由巴比妥缓冲液改为生理盐水,与常量法使用相同稀释液并可获得理想结果。用改进的mCFT与国标的mCFT、常量法CFT分别对来自内蒙古、山东、北京、江苏等地区的409份临床牛、羊血清样品(牛血清163份、羊血清246份)进行检测,分析比较其符合率。【结果】采用改进的mCFT与常量法CFT对409份临床样品进行比对检测,改进的mCFT方法检出53份阳性、11份可疑、345份阴性;常量法CFT检出53份阳性、9份可疑、347份阴性。比较两者检测结果,只有2份牛血清样品用改进的mCFT方法检测为可疑,而常量法CFT检测为阴性,其余407份样品检测结果均一致。其中牛血清样品的符合率98.77%,羊血清样品的符合率100%,总符合率99.51%。而国标mCFT方法因阳性判定标准低于常量法CFT,且不设可疑区间,结果检出97份阳性、312份阴性。与常量法CFT结果相比较,牛血清样品的符合率88.34%,羊血清样品的符合率89.84%,总符合率为89.24%,远低于本研究改进的mCFT方法与常量法CFT 99.51%的符合率。【结论】通过对mCFT方法各参数的优化,建立了一种与常量法CFT判定标准一致,且检测结果高度符合的mCFT方法。

应用半微量补体结合反应检测育肥牛钩端螺旋体病血清抗体的研究

对360头自然感染钩端螺旋体病的育肥牛,运用半微量补体结合反应进行了血清抗体检测。并与规程补体结合反应进行了比较,符合率为100%。本法具有敏感性高,特异性强,操作简便、节省诊断液的特点。

竞争ELISA和间接ELISA方法应用于牛布鲁氏菌病净化的研究

旨在评价竞争ELISA方法和间接ELISA方法联合使用在布鲁氏菌病(以下简称“布病”)净化中的效果,为布病防控提供技术支撑。采用本实验室开发的动物布鲁氏菌病竞争ELSIA(cELISA)抗体检测试剂盒、牛布鲁氏菌病间接ELISA(iELISA)抗体检测试剂盒及微量法补体结合试验(mCFT),对西北某牛场3 271份牛血清进行检测。本研究采用cELISA初筛、iELISA确诊的净化策略,对检测阳性牛进行淘汰,可疑牛和阴性牛在完全消毒后隔离饲养,并在前一次检测后每隔1个月重新对群体采样,进行多次连续的“检—淘”策略,在群体的个体阳性率低于2%或全部转阴后使用微量补体结合试验(mCFT)进行验证。并在群体全部转阴后继续检测2个月后确定净化结果。结果显示,首次检测阳性率35.36%的感染群体实施本净化策略后,在第1个月阳性率下降至25.41%,第2个月下降至7.16%,第3个月下降为1.86%,到第4个月则实现了布病阳性群体的全面转阴,mCFT验证个体阴性率100%。此后持续检测2个月,个体阳性率均为0,至此实现了感染群体的布病净化,使得群体内近一半的牛免于扑杀,大大减少了经济损失。综上发现,将cELISA用于布病初筛,iELISA用于布病确诊的联合使用,经多次连续检测并结合常规的隔离消毒措施,可以在短时间内实现对于布病感染群体的全面净化。

大理州牛羊布鲁氏菌病血清学流行病学调查分析

目的检测大理州牛羊布鲁氏菌抗体,了解和掌握云南大理地区的家畜布鲁氏菌病流行现状。方法采用动物布鲁氏菌竞争ELISA(cELISA)抗体检测方法、牛布鲁氏菌间接ELISA(iELISA)抗体检测方法、羊布鲁氏菌间接ELISA(iELISA)抗体检测方法、布鲁氏菌荧光偏振(FPA)方法等4种不同方法,分别对大理州12县(市)2022年的18640份家畜血清进行检测,其中牛血清样品7813份、羊血清样品10827份。最后采用微量法补体结合试验(mCFT)对cELISA、iELISA和FPA检测阳性的样品进行确诊。结果大理州羊血清mCFT确诊阳性189份,阳性率为1.75%(189/10827),其中大理市1.90%(2/105)、宾川县4.23%(34/803)、祥云县2.53%(19/752)、巍山县1.58%(12/760)、洱源县2.52%(22/873)、剑川县2.00%(91/4554)、云龙县1.54%(9/585),牛血清布病抗体阳性率均为0。cELISA、iELISA和FPA 3种方法检测出的阳性样品采用mCFT进行确诊时,mCFT确诊的阳性样品与这3种方法检测阳性样品之间的符合率分别为75.00%,100.00%和98.81%,其中iELISA与mCFT符合率最高。结论大理州牛群未检测到布病抗体阳性,感染风险低;羊群布鲁氏菌感染率高,12个县(市)中有7个县(市)检出羊布病阳性样品,绘制的大理州羊布病流行情况分布图为今后有效防控和净化畜间布病提供基础数据和技术支撑。

大理州4县(市)家畜布鲁氏菌病血清学调查与分析

为了解和掌握大理州4县(市)的动物布鲁氏菌病流行情况,采用布鲁氏菌荧光偏振试验(FPA)和微量法补体结合试验(mCFT)相结合的方法对大理州剑川、洱源、大理、宾川4县(市)的7655份家畜血清(牛血清样品5467份、羊血清样品1962份、猪血清样品226份)进行布鲁氏菌抗体检测。发现大理州羊血清样品布鲁氏菌病抗体阳性率为2.8%(55/1962),牛和猪血清样品布鲁氏菌病抗体阳性率均为0。结果表明,大理州羊群布鲁氏菌感染风险高,牛群和猪群未检测到布鲁氏菌病抗体阳性,布鲁氏菌感染风险低。结果提示,大理州羊布鲁氏菌病流行形势严峻,需要加强监测与防控,减少布鲁氏菌由患病羊传染人的风险。本调查为进一步做好大理州家畜布鲁氏菌病防控提供依据。

山东省陵县Q热和斑点热的血清流行病学调查

Q热和斑点热是两种重要的立克次体病,在世界上分布相当广泛,历史上曾出现过大流行,给人类造成过重大危害。为了解Q热和斑点热在山东省的感染情况,1995年在鲁北陵县首次进行了这两种疾病的血清流行病学调查,结果报告如下。

广东省首次分离斑点热群立克次体

目的 从宿主动物及蜱中分离斑点热群立克次体 ,以了解广东省是否存在斑点热自然疫源地。方法 从广东省封开县七星自然保护区采用笼日法捕活鼠 ,采集鼠脾及鼠表的蜱 ,用PCR进行初筛 ,鸡胚卵黄囊培养法直接分离立克次体 ,血清学试验对分离株进行鉴定。结果 采集鼠脾10 3份 ,鼠表的蜱 38匹 ;从 2只针毛鼠体表捉获的蜱中分离到 2株斑点热群立克次体 ,命名为GDFK5 8- 2 0 0 0株、GDFK5 9- 2 0 0 0株立克次体 ,经血清学鉴定为西伯利亚种。

乌兰察布盟布病近四年监测分析

乌兰察布盟布病近四年监测分析任贵，梁建民，郭建科，田进富（乌兰察布盟地方病防治站）为巩固防治成果，掌握疫情动态，从１９８９～１９９２年对全盟布病进行了系统科学的监测，现将监测的结果报告如下。１监测对象和方法遵照全国布病监测方案精神和自治区地办室（１９...

马媾疫的综合防治

马媾疫是媾疫锥虫所引起的慢性原虫病,寄生于马属动物的泌尿生殖器官黏膜内。1病原马媾疫锥虫是一种单形性虫体,长18—34微米,宽1—2微米。呈卷曲的柳叶状,前端尖锐,后端稍钝,虫体中央有一个椭圆形的核,并有由后向前延伸的鞭毛和波动膜。锥虫在宿主体内进行分裂增殖,一般沿体长轴纵分裂,由一个分裂为二个虫体。它的传播主要是因病畜与健康畜交配时,由于生殖器官黏膜的接触而感染。

被动血凝抑制试验检测乙型肝炎核心抗体

乙型肝炎核心抗体(HBcAb)的检测方法有:微量补体结合试验[1]、免疫粘连血凝试验(IAHA)[2,3]、对流免疫电泳[4]、固相放射免疫[5]、酶联免疫吸附试验[6]等,目前国内以后者应用最广.但其不足处为:实验全程影响因素甚多,如载体差异、酶标记物的降解、酶触反应的动力学各异、底物的自身氧化等,而且要耗用较多的HBcAg及接触有致癌作用的底物.