9色荧光STR复合扩增体系的构建及验证

构建一套包含39个常染色体基因座及Amelogenin性别基因的9色荧光STR复合扩增体系,并验证其在微量与降解检材中的应用效果。根据中国人群核心基因座推荐标准及实际办案需要,筛选出合适的候选基因座,设计引物并以9种荧光染料对其进行标记,构建复合扩增体系并优化;对该体系进行灵敏度、种属特异性、稳定性等确证实验,并通过检验案件样本做进一步评估。结果表明:一套包含39个常染色体STR基因座及Amelogenin性别基因座(其中28个基因座<300 bp)的9色荧光复合扩增体系构建成功。各基因座均衡性良好,灵敏度达0.125 ng,对常见PCR抑制剂具备一定的耐受能力。两性混合样本最低检测比例为1:4;适用于不同类型案件样本检测,且与市场上其他同类试剂盒比对分型结果一致,种属特异性较好。所构建体系首次采用9色荧光标记技术制成复合扩增试剂,一次性检出基因座数量多,系统效能高;该体系构成以miniSTR为主,对于微量降解检材具有较高的实际应用价值。

20个InDel位点多重PCR体系的构建

从人类染色体上初步筛选出具有良好频率分布的InDel位点,建立基于荧光标记复合扩增检测技术的InDel分型体系,为法医学中检测腐败降解DNA样本提供有效的手段。方法:通过人类基因组浏览器和dbSNP数据库筛选出20个具有较高频率InDel位点,用荧光素标记引物,建立多重PCR体系并进行验证。结果:成功建立了一个稳定的包含20个InDel位点的复合荧光PCR检测体系。该体系的灵敏度达0.3ng,具有较高的种属特异性及组织同一性,且对微量降解检材有良好的扩增效果。结论:该系统具备法医学实践应用的可行性,为分析微量降解检材提供一种有效性的检测手段。