微量DNA提取工作站与Chelex-100法提取指纹脱落细胞DNA效果比较

比较Chelex-100法或自动化工作站提取法对脱落细胞提取DNA的效果。方法 选取3名志愿者制作脱落细胞,用两步擦拭法分别提取脱落细胞检材,使用博坤24道全自动DNA提取工作站和Chelex-100方法分别提取模板DNA,用VeriFilerTM Plus试剂盒进行PCR扩增,扩增产物应用3500型全自动荧光分析仪进行检测、分析,并对分析结果进行比较。结果 两种方法提取的DNA模板经过分型分析,均出现了不同程度的丢峰现象,Chelex-100法的STR基因座检出数平均数为15.3,博坤24道全自动DNA提取工作站检出的STR基因座平均数为19.5。结论 本实验中博坤24道全自动DNA提取工作站提取的脱落细胞DNA检出率高于Chelex-100法。

微量DNA的短串联重复序列分型可行性

目的了解微量DNA分型的法医学应用的可行性。方法一系列浓度的DNA模板用PowerPlexTM16System试剂盒扩增,并用ABI377DNA测序仪进行短串联重复序列(STR)的分型。结果当模板量小于250pg时,部分位点发生了等位基因漏扩,并出现非特异带、杂合子扩增不平衡等干扰分型的杂峰。结论上述这些不正常的现象可能会导致分型错误。在对微量检材的DNA检验结果进行判型时一定要小心谨慎,全面考虑。

微量DNA:容易忽略的生物物证

PCR技术的出现,大大提高了法医DNA分析技术的灵敏度,尤其是STR复合扩增技术的应用,不仅如同DNA指纹技术一样能够进行同一认定,而且使其灵敏度达到了纳克级以下的水平,大大提高了其解决微量、降解DNA的分析能力.Findlay等[1]成功地分析了低至单个细胞水平的模板DNA;Van Hoofstat等[2]利用DNA技术分析现场遗留指纹进行检验;Barbaro等[3]利用DNA技术对毛干进行检验;Schmerer等[4]和Burger等[5]分别用60和50个循环分析古代骨骼DNA;Van Oorschot和Jones[6]利用PCR检验,从电话话筒、钢笔、手提箱把手等提取的检材样品中得到DNA分型;Wickenheiser[7]从被盗汽车的方向盘上提取DNA进行STR分型,从而认定罪犯.以上研究报道的结果表明,现有的DNA技术能够对微量DNA进行检验.……

微量DNA高效提取方法

[目的]探究一种高效的提取微量地衣体及地衣共生菌DNA的方法。[方法]在CTAB法的基础上,对溶液成分、比例及应用硅基质吸附柱对微量DNA提取进行优化。[结果]对于叶状、枝状和壳状地衣,采用该方法可得到质量较高的DNA。[结论]所用方法既节约样品,简便易行,费用低,稳定性好,效率高,而且不局限于新鲜材料。

聚丙烯酰胺电泳条带中微量DNA片段的回收与再扩增方法的改进

【目的】研究聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）条带中微量DNA片段的回收和再扩增.【方法】比较了4种方法溶解聚丙烯酰胺凝胶的效果和回收微量核酸的效率.【结果和结论】Bioteke溶胶/结合液能获得极高的DNA片段回收率,可从仅含1.0－7.5 ng核酸的PAGE胶中有效回收到足量的片段;再扩增的效果与回收效率呈正相关;将液态混合液与杂质分离是成功进行再扩增的关键.本研究构建的一套快速、高效的PAGE多态性条带回收及再扩增的方法为分析生物遗传多样性成因提供了新途径.

一种适用于昆虫微量DNA模板制备的方法

随着分子生物学在昆虫领域中运用 ,昆虫 DNA的提取是有技术运用的前提 ,具有其重要的地位。但是由于一些昆虫体形较小 ,采用传统的酚 :氯仿抽提法不适用于微量 DNA模板的制备 ,而某些生物公司的试剂合相对而言价格较高。本文介绍一种适用于普通昆虫实验室贮藏及运用的微量 DNA模板制备方法。

家鸡囊胚细胞微量DNA提取方法的探讨

为了提取微量的家鸡囊胚细胞DNA应用于种蛋孵化前的PCR性别鉴定,本实验应用Chelex-100法、常规试剂提取法、DNA试剂盒提取法进行微量囊胚细胞的DNA提取,并应用W染色体性别鉴定引物进行PCR鉴定。结果表明,3种方法均能提取适合于PCR的模板,其中以Chelex-100法提取的效果最好,最小细胞数为10个,其次为常规试剂提取法和DNA试剂盒提取法,最小细胞数分别为50个和1200个。本研究对微量家鸡囊胚细胞DNA提取方法进行了大量的摸索和改进,为家鸡种蛋孵化前性别鉴定技术研究奠定了一定的基础。

微量DNA检验技术及应用

随着社会经济的发展，犯罪分子反侦查的意识越来越强，手段逐步呈现出智能化的趋势，明显可见的生物物证（如精斑、血斑、毛发、人体组织等）常被犯罪分子销毁和破坏，在犯罪现场发现和提取大量生物物证的难度越来越大，经常会有案件因为没有在现场提取到有用的物证而导致侦破工作停滞不前。

基于PLP-LDR-HRCA策略进行微量DNA分析——rs17750303位点分型

增强PCR和全基因组扩增是当前微量DNA分析的主要策略,但是,由于DNA模板量过少,受随机效应影响显著,往往不能得到可靠的DNA分型结果.本文提出一种新的检验策略:PLP-LDR-HRCA,尝试微量DNA检材的SNPs分型研究.选择rs17750303位点,并设计等位基因特异性锁式探针,采用连接酶检测反应来识别等位基因,而后采用超分支滚环扩增反应来放大检测信号.结果表明,PLP-LDR-HRCA反应特异性好,灵敏度高,能够直接鉴别微量基因组DNA模板中待测SNP位点,rs17750303纯合型样品(AA型或CC型)和杂合型样品(AC型)准确分型所需最少模板量分别为20pg和30pg.对于增强PCR和全基因组扩增技术不能有效检验的微量检材,PLP-LDR-PCR策略独具优势,可能具有较大的开发价值.

罂粟浆液微量DNA检验鉴定种属

目的目前涉毒案件中罂粟种属的DNA检验,主要针对的是罂粟叶、籽、根、茎等可获得高纯度DNA的检材,很少涉及罂粟浆液、残根等仅含微量DNA的样本,本文就涉毒案件中罂粟浆液类含微量DNA样本的种属DNA检验方法进行探索。方法使用涉毒案件中的疑似罂粟浆液,分别取悬浮液、离心后上清液以及干燥的沉渣,采用磁珠法提取纯化DNA,使用罂粟种属特异性荧光引物(P14)按照优化的条件进行PCR扩增,并对扩增产物进行检测,对照已知罂粟测序结果确定其种属来源。结果经离心干燥后的沉渣检出了两条清晰的罂粟特异性DNA片段,增加循环次数可提高特异性条带峰值。结论涉毒案件中DNA含量较低的罂粟浆液类检材也可通过DNA检验确定其种属,为日后相关案件中此类检材的种属检验提供参考,具有重要的应用前景。

应用引物延伸预扩增提高微量DNA拷贝数

采用引物延伸预扩增方法 ,可普遍提高微量模板DNA的拷贝数 ,便于进行基因分析时克服标本量少、来源困难的制约。采用常规扩增、检测 2 4 8bp的DYZ1片段体系为观察对象 ,其最小模板量需 1.5ng/2 0 μl体系。以 15个碱基随机寡核苷酸为引物 ,对最小模板量进行预扩增 ,再以其产物 1/10为模板 ,特异扩增DYZ1片段。进行相对定量分析 ,判断原模板DNA拷贝数增加的程度。结果 1.5ng男性DNA经随机扩增后 ,此DYZ1片段拷贝数增加了 10倍以上 ,大大地提高了特异DNA片段扩增的模板量。表明经随机引物延伸预扩增后 ,微量标本DNA片段拷贝数获得普遍提高 。

一种改良的亚硫酸氢盐修饰微量DNA的甲基化分析方法

目的建立一种改良的亚硫酸氢盐修饰微量DNA的甲基化分析方法。方法应用低熔点琼脂糖包埋不同含量的DNA,进行亚硫酸氢盐修饰,通过MGMT基因甲基化与非甲基化特异PCR的扩增,与传统的亚硫酸氢盐修饰法进行分析比较。结果改良法对于低至15.625ng的DNA修饰均可获得MGMT基因甲基化扩增产物,而传统法对于62.5ng及其以下的DNA修饰难以获得MGMT基因甲基化扩增产物。结论改良的亚硫酸氢盐修饰方法可有效提高甲基化特异PCR的灵敏度,该方法为微量DNA的甲基化分析提供了一种较理想的研究手段。

拖鞋上微量DNA检验策略初探

随着DNA检验技术的飞速发展，其在刑侦工作中的应用范围不断扩大，越来越成为刑侦工作中不可缺少的技术。特别是对于命案等重大刑事案件，人们更希望在案发现场能够发现更加微量的嫌疑人的DNA。然而，微量DNA的检验依旧是DNA检验的难点。多数微IDNA为低拷贝模板DNA，因为其DNA含量较低，检验结果有着较大的不确定性。有时候，

一种改良的亚硫酸氢盐修饰微量DNA的甲基化分析方法

目的 建立一种改良的亚硫酸氢盐修饰微量DNA的甲基化分析方法。方法 应用低熔点琼脂糖包埋不同含量的DNA，进行亚硫酸氢盐修饰，通过MGMT基因甲基化与非甲基化特异PCR的扩增，与传统的亚硫酸氢盐修饰法进行分析比较。结果 改良法对于低至15、625ng的DNA修饰均可获得MGMT基因甲基化扩增产物，而传统法对于62．5ng及其以下的DNA修饰难以获得MGMT基因甲基化扩增产物。结论 改良的亚硫酸氢盐修饰方法可有效提高甲基化特异PCR的灵敏度，该方法为微量DNA的甲基化分析提供了一种较理想的研究手段。

基于牙釉质基因巢式PCR性别鉴定超微量DNA检测方法的建立

实验根据山羊牙釉质(AMEL)基因序列设计巢式引物,用紫外分光仪检测基因组DNA的浓度,梯度稀释(10-2μg/μL、10-3μg/μL,10-4μg/μL,10-5μg/μL),巢式PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明,利用巢式PCR方法对10 pg量基因组DNA(约3个细胞)进行扩增,得到明显目的条带。巢式PCR扩增AMEL基因鉴定性别的方法具有较高的准确性和敏感性,超微量DNA检测方法对胚胎移植前性别鉴定及提高切割胚胎移植的成活率方面具有重要的意义。

一种适于PCR检测病毒诱导基因沉默番茄植株的微量DNA提取方法

【研究目的】为了寻找一种适用于病毒诱导的基因沉默番茄叶片PCR检测的快速、简单、成本低的DNA提取方法。【方法】笔者根据PCR反应的要求,用改良的CTAB法,实现了微量番茄叶片基因组DNA的快速提取。【结果】提取基因组DNA所用的组织量虽少,所得的DNA经过电泳检测虽有降解,但足以用于PCR检测,以其作模板扩增中国番茄黄化曲叶病毒诱导的硫黄素酶(Su)基因沉默植株中病毒组分中的DNAmβ和1.7A,片段大小分别为500bp、1300bp。测序结果证明是相应基因的部分片段。【结论】该方法的材料不需要使用液氮,可以单人大批量提取,并在基因沉默的番茄植株中能稳定而准确的规模化PCR检测。

应用微量DNA检验技术侦破人命案2起

目的探讨在命案侦破中如何正确应用微量DNA检验技术。方法对1例绑架杀人案和1例故意杀人案进行回顾性分析。结果案例1勒索信背面透明胶带上提取脱落细胞基因分型与嫌疑人基因分型一致。案例2中根据尸体乳头擦拭脱落细胞的STR基因分型与现场犯罪嫌疑人基因分型一致。结论正确应用微量DNA检验技术可以为案件侦破指明侦查方向,为案件侦破提供重要科学技术支撑。

用磁铁也可检测微量DNA成本低操作简单精度不差

在干草堆里找一根针是很困难的，但用一块磁铁就能把事情变得容易。要在大量DNA的“干草堆”里找到某个特定的DNA分子，磁铁同样可以发挥作用。美国科学家新研究出一种利用磁铁来检验DNA的新技术，可达到很高的精度。