微小RNA-34a通过靶向CD44调节膀胱癌细胞J82周期

目的观察微小RNA-34a(miR-34a)对膀胱癌细胞J82周期的影响,并探索其中的机制。方法于J82中转染miR-34a前体或miR-34a抑制物并验证转染效率,结合此前研究报道和生物信息学预测miR-34a的靶点,后通过荧光素酶报告实验验证miR-34a靶标基因CD44,通过Western blot和实时定量PCR方法检测CD44及其周期相关蛋白及信使RNA表达水平的变化,利用流式细胞仪检测膀胱癌细胞J82周期的变化。结果 miR-34a在膀胱癌细胞J82和组织中表达下调,转染miR-34a前体和抑制物后,获得满意的转染效果;双荧光素酶报告实验证实miR-34a对CD44的3'UTR活性显著调节,并伴随相关周期相关因子表达水平变化,同时观测到其对膀胱癌细胞J82周期的影响。miR-34a mimics明显降低膀胱癌细胞J82中CD44的表达,miR-34a inhibitor明显上调膀胱癌细胞J82中CD44的表达;CD44可以部分回复mir-34a对膀胱癌细胞J82周期的影响。结论微小RNA-34a通过直接靶向CD44调节膀胱癌细胞J82周期的变化。

miRNA-181a及其靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因在胃癌组织中的表达及意义

目的：观察胃癌组织中微小RNA-181a（miR-181a）与其靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因（ATM）的表达与异常情况，初步研究其意义。方法收集2009年4月~2011年12月广州市第一人民医院外科手术切除的胃癌组织标本9例，同时选取其癌旁非癌组织标本作为对照，分析胃癌组织中miR-181a与ATM蛋白表达的相关性。提取其蛋白质及总RNA，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测标本的miR-181a，Western blot检测ATM蛋白。比较胃癌组织及癌旁非癌组织中miR-181a、ATM蛋白表达量。结果 miR-181a在胃癌组织中的表达量为（1.981±1.800），miR-181a在邻近非癌组织中的表达量为（0.394±0.093）；灰度值检测：癌组织ATM蛋白为（0.2539±0.0046）；非癌组织为（0.5525±0.0660），癌及非癌组织中miR-181a、ATM蛋白表达量比较，差异均有高度统计学意义（P〈0.01）；miR-181a与ATM蛋白表达呈负相关（r=-0.539，P〈0.01）。结论 miR-181a在胃癌组织中表达明显增高，ATM蛋白表达明显下降；究其原因可能是通过基因沉默机制miR-181a降低ATM蛋白表达量，从而在胃癌的发生及发展中起促进作用。

miR-486-5p对胃癌细胞株SGC7901生物学行为的影响

背景与目的:既往研究表明微小RNA-486-5p(miR-486-5p)在多种肿瘤的进展中起重要作用,但其在胃癌中作用的研究较少,本研究旨在探讨miR-486-5p对胃癌细胞株SGC7901增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法:使用实时定量PCR(quantification real-time PCR,qRT-PCR)检测胃癌细胞株SGC7901及胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-486-5p的表达,构建miR-486-5p过表达质粒,使用脂质体法瞬时转染胃癌细胞株SGC7901,qRT-PCR检测转染细胞后miR-486-5p的表达丰度,噻唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测细胞的增殖及凋亡情况,Transwell小室迁移实验检测细胞的迁移能力。结果:miR-486-5p在SGC7901细胞中表达明显下调,SGC7901细胞转染miR-486-5p过表达质粒后,miR-486-5p表达明显上调,细胞增殖、迁移能力降低,凋亡率增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-486-5p可抑制胃癌细胞株SGC7901的增殖和迁移。

miR-506对肝癌细胞恶性表型的影响

目的探讨微RNA-506(micro RNA-506,mi R-506)对肝癌细胞活性、增殖和侵袭等恶性表型的调控作用。方法以肝癌细胞系Hep G2和QGY-7703为模型,依处理方式不同分别分为细胞常规培养(细胞对照)组、pc D-NA3空载体对照组、转染pc DNA3/pri-506过表达mi R-506(过表达mi R-506)组、p SIH1空载体对照组及转染p SIH1/Tu D-506抑制mi R-506(抑制mi R-506)组。实时定量逆转录PCR检测细胞内mi R-506的表达水平。分别用CCK-8实验、体外集落形成实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞的活性、集落形成能力和侵袭能力。结果在肝癌细胞系Hep G2和QGY-7703中,与对应的空载体对照组相比,过表达mi R-506组的细胞内mi R-506表达水平升高,而抑制mi R-506组的细胞内mi R-506表达水平降低(P<0.05);过表达mi R-506组细胞活性降低且形成集落的数量和穿过Transwell微孔的细胞数量均减少,而抑制mi R-506组细胞活性升高且形成集落的数量和穿过Transwell微孔的细胞数量均明显增加(P<0.05)。与细胞对照组相比,pc DNA3空载体对照组和p SIH1空载体对照组均不影响以上各指标(P>0.05)。结论 mi R-506抑制肝癌细胞的活性、集落形成能力和侵袭能力等恶性表型,在肝癌细胞中发挥抑癌基因的作用。

微RNA与免疫系统

微RNA(microRNA,miR)是一类进化上非常保守且不具蛋白质编码作用的小RNA分子,通过降解或阻遏信使RNA(mRNA)在转录后水平起到基因表达调控的作用。据估计人类基因组中含有约1000个miR,它们调控至少30%的人类蛋白质编码基因。miR参与体内多种生物学进程,包括细胞的增殖、分化、发育、凋亡、肿瘤发生和免疫反应。越来越多的证据表明miR在免疫细胞的分化和发育、天然免疫和适应性免疫反应的调节方面起到重要的作用。本文就miR及其在免疫系统的调节方面做一综述。

益气活血法通过miR216b/Beclin1介导萎缩性胃炎癌前病变自噬的机制

目的:通过观察益气活血法对萎缩性胃炎癌前病变(PLGC)模型小鼠微RNA216b(miR216b)/自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin1)信号通路的影响,探讨其干预PLGC的自噬作用机制。方法:将75只健康雄性SPF级昆明种小鼠随机分为空白组(12只)及造模组(63只),造模组小鼠每日采用1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)溶液(150 mg·L^(-1))自由饮用及灌胃,同时每日灌胃雷尼替丁溶液(0.03 g·kg^(-1)),造模12周。按照随机对照表将造模小鼠分为模型组、益气组(黄芪3.5 g·kg^(-1))、活血组(三七粉0.7 g·kg^(-1))、益气活血组(黄芪3.5 g·kg^(-1)+三七粉0.7 g·kg^(-1))及叶酸组(2 mg·kg^(-1))。予相应药物灌胃8周后取材,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠胃黏膜病理改变,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组胃黏膜Beclin1及miR-216b的m RNA表达情况。结果:与空白组比较,病理学观察显示模型组胃黏膜固有腺体减少,出现萎缩伴肠上皮化生;与模型组比较,各治疗组均有改善,其中益气活血组改善最为明显。与空白组比较,模型组小鼠胃组织LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin1蛋白含量均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,各治疗组胃组织LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin1蛋白含量均有升高(P<0.05,P<0.01),其中益气活血组升高最为明显。与空白组比较,模型组小鼠Beclin1 m NRA表达下降(P<0.05),miR216b m NRA表达上升(P<0.05)。与模型组比较,各治疗组小鼠Beclin1表达升高(P<0.05),miR216b表达下降(P<0.05),尤以益气活血组最为明显。结论:以黄芪、三七为代表的益气活血法治疗PLGC的作用机制可能为通过抑制miR216b的表达,激活Beclin1,从而促进自噬,发挥修复胃黏膜的作用。

核仁小RNA源性小RNA

最新研究结果表明,一些与RNA介导基因沉默相关的小RNA由核仁小RNA(small nucleolar RNA,snoRNA)加工产生,这种小RNA被称为核仁小RNA源性小RNA(snoRNA derived small RNA,sdRNA)。sdRNA现象分布物种广;涉及的snoRNA种类全,数量多;产生的小RNA分子大小不一、数量、种类多。表明这种小RNA在生物中存在着广泛的普遍性。sdRNA的发现拓展了snoRNA的功能,揭示了snoRNA与RNA介导的基因沉默之间的紧密关系,增强了snoRNA在RNA调控网络中的重要性,并为进一步研究RNA调控网络开启了一扇门。