微RNA-106b-5p通过靶向α-烯醇化酶调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、炎症的研究

目的观察微RNA-106b-5p、α-烯醇化酶(ENO1)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(MH7A)增殖、炎症的影响,并探究二者之间的联系。方法2018年1月至2021年12月长安医院接诊手术的8例RA病人获得了滑膜组织,4例意外事故引起关节损伤的无RA、骨关节炎史健康病人作为对照。运用RT-qPCR实验检测RA滑膜、正常滑膜及对照组(正常MH7A)、白细胞介素(IL)-1β组细胞(10μg/L IL-1β处理)中miR-106b-5p、ENO1的表达;脂质体法将mimic-NC组(转染mimic)、miR-106b-5p mimic组(转染miR-106b-5p mimic)、inhibitor-NC组(转染inhibitor)、miR-106b-5p inhibitor组(转染miR-106b-5p inhibitor)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-ENO1组(转染pcDNA-ENO1)、si-NC组(转染si-NC)、si-ENO1组(转染si-ENO1)、miR-106b-5p mimic+pcDNA组(共转染miR-106b-5p mimic+pcDNA)、miR-106b-5p mimic+pcDNA-ENO1组(共转染miR-106b-5p mimic+pcDNA-ENO1)、miR-106b-5p inhibitor+si-NC组(共转染miR-106b-5p inhibitor+si-NC)、miR-106b-5p inhibitor+si-ENO1组(共转染miR-106b-5p inhibitor+si-ENO1)转染至MH7A,再IL-1β处理。细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞IL-6、IL-8、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的含量。双萤光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性;蛋白质印迹法实验检测细胞ENO1蛋白。结果与对照组(0.52±0.05、147.32±12.54、0.45±0.03、1.55±0.12)相比,IL-1β组细胞活性(1.13±0.06)、IL-6(433.21±37.84)、IL-8(1.38±0.10)、MMP-3(2.78±0.22)均升高(P<0.05)。与mimic-NC组(1.12±0.06、435.15±39.67、1.39±0.12、2.77±0.25)相比,miR-106b-5p mimic组细胞活性(1.98±0.11)、IL-6(164.12±15.74)、IL-8(0.65±0.05)、MMP-3(1.94±0.17)均降低(P<0.05),且抑制miR-106b-5p具有相反的作用。双萤光素酶报告实验显示,miR-106b-5p靶向负调控ENO1,且二者在RA组织中的表达呈负相关。与pcDNA组(1.14±0.06、434.93±37.89、1.37±0.11、2.79±0.22)相比,pcDNA-ENO1组细胞活性(1.96±0.08)、IL-6(867.83±71.84)、IL-8(2.83±0.23)、MMP-3(4.93±0.34)升高(P<0.05);与si-NC组相比,si-ENO1组细胞活性、IL-6、IL-8、MMP-3降低(P<0.05)。过表达ENO1减弱miR-106b-5p对IL-1β处理细胞增殖、炎性因子的促进作用,敲减ENO1减弱抑制miR-106b-5p对IL-1β处理细胞增殖、炎性因子的抑制作用。结论miR-106b-5p能够抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖和炎症反应,产生这种调控作用的潜在机制与靶向ENO1有关。

血清长链非编码RNA肺癌相关转录本1、微RNA-514b-3p、甲胎蛋白检测对早期肝癌根治术后复发的预测价值分析

目的探究血清长链非编码RNA肺癌相关转录本1(lncRNA LUCAT1)、微RNA-514b-3p(miR-514b-3p)、甲胎蛋白(AFP)表达水平对预测早期肝细胞癌(HCC)病人根治术后复发的临床价值。方法选取2016年3月至2019年6月西安市中心医院诊治的130例Ⅰ~Ⅱ期HCC病人为研究对象,对所有早期HCC病人随访3年,按其行根治术后是否复发分为未复发组(n=92)和复发组(n=38)。检测并比较复发组、未复发组早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p、AFP水平;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p、AFP对早期HCC病人根治术后复发的预测价值;多因素logistic回归分析早期HCC病人根治术后复发的影响因素;Pearson法分析根治术后复发的早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1表达水平与miR-514b-3p的关系。结果与未复发组[0.99±0.33、(17.42±3.67)μg/L、1.01±0.34]相比,复发组早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1(1.87±0.63)、AFP水平(25.38±5.18)μg/L升高(P<0.05),miR-514b-3p水平(0.56±0.19)降低(P<0.05)。血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p、AFP预测早期HCC病人根治术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.81、0.68、0.83,且血清lncRNA LUCAT1、AFP联合预测早期HCC病人根治术后复发的AUC为0.93,灵敏度为93.8%,特异度为84.8%。血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p联合预测AFP阴性病人根治术后复发的AUC为0.91,高于二者单独预测(P<0.05);血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p单独及联合预测AFP阳性病人根治术后复发的AUC与AFP单独预测相比,差异无统计学意义(P>0.05)。AFP、lncRNA LUCAT1是影响早期HCC病人根治术后复发的独立危险因素(P<0.05),miR-514b-3p是独立保护因素(P<0.05)。根治术后复发的早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1水平与miR-514b-3p水平呈负相关(P<0.05),且lncRNA LUCAT1与miR-514b-3p存在结合位点。结论根治术后复发的早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1水平较高,miR-514b-3p水平较低,血清lncRNA LUCAT1与AFP联合检测更有利于临床预测早期HCC病人根治术后复发情况,且血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p联合预测AFP阴性病人根治术后复发的效能更高。

免疫性血小板减少症患儿 T淋巴细胞亚群、甲状腺自身抗体、微小RNA-106b-5p 和微小RNA-181a-5p表达水平检测及临床意义

目的:分析免疫性血小板减少症(ITP)患儿T淋巴细胞亚群、甲状腺自身抗体、微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)和微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)表达水平及临床意义。方法:以158例ITP患儿为ITP组,依据临床分型不同分为慢性ITP组(34例)、持续性ITP组(60例)和新诊断ITP组(64例)。另选取同期健康儿童102例为对照组。所有患儿均给予静脉滴注人免疫球蛋白及口服醋酸泼尼松片等常规治疗,均治疗5 d。比较ITP组与对照组全血T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+))细胞及血清甲状腺自身抗体[甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。比较慢性ITP组、持续性ITP组和新诊断ITP组患儿全血T淋巴细胞亚群及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。比较ITP患儿治疗前、治疗5 d后全血T淋巴细胞亚群及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。结果:与对照组比较,ITP组全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平更低,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平更高(均P<0.05)。慢性ITP组全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平低于持续性ITP组和新诊断ITP组,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平高于持续性ITP组和新诊断ITP组(均P<0.05)。与治疗前比较,治疗5 d后ITP患儿全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平升高,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平降低(均P<0.05)。结论:ITP患儿存在T淋巴细胞亚群失衡、甲状腺自身抗体和miR-106b-5p高表达以及miR-181a-5p低表达情况。治疗期间积极检测患儿全血T淋巴细胞亚群及血清甲状腺自身抗体、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平,有助于患儿的疗效评估。

微小RNA-190b-5p靶向调控Smad4及对TGF-β1诱导的直肠癌细胞迁移侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨微小RNA-190b-5p(miR-190b-5p)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的直肠癌细胞迁移侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法给予直肠癌SW1463细胞miR-190b-5p模拟物(mimic)和/或TGF-β1处理,采用实时荧光定量PCR测定miR-190b-5p表达水平;Western blot检测钙黏蛋白E、波形蛋白和SMAD家族蛋白4(Smad4)的蛋白表达水平;Transwell实验检测SW1463细胞的迁移侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-190b-5p与Smad4的靶向关系。结果与正常人结肠上皮细胞CCD841 con相比,SW1463细胞的miR-190b-5p表达降低。TGF-β1处理诱导SW1463细胞的miR-190b-5p表达水平进一步降低,促进EMT且增强细胞迁移侵袭能力和Smad4蛋白表达水平。过表达miR-190b-5p可抑制TGF-β1诱导的EMT及细胞迁移侵袭过程和Smad4表达上调。结论miR-190b-5p可能通过抑制Smad4表达来阻断TGF-β/Smad信号通路诱导的直肠癌细胞EMT和侵袭迁移过程,miR-190b-5p/Smad4有成为直肠癌治疗靶点的潜能。

微RNA-30d-5p通过调控ABCB5对胰腺癌进程的影响

目的 探讨微RNA(miR)-30d-5p在胰腺癌(PAAD)中的潜在作用和调控机制。方法 选择2016年12月至2019年1月来新疆维吾尔自治区人民医院接受手术治疗的胰腺癌病人35例,术后即刻获得胰腺肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织,采用实时定量PCR检测miR-30d-5p在胰腺癌组织和细胞中的表达水平。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成、transwell和流式细胞术检测miR-30d-5p对细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。通过萤光素酶测定和蛋白质印迹法评估miR-30d-5p对ABCB5表达的调控作用。进一步构建裸鼠成瘤模型通过肿瘤质量和体积验证miR-30d-5p对肿瘤生长的影响。采用苏木精伊红染色验证肿瘤组织增殖情况。结果 与癌旁组织(1.03±0.17)及正常细胞(0.98±0.18)相比,胰腺癌组织(0.35±0.08)和细胞(0.63±0.08,0.23±0.07,0.48±0.07及0.31±0.05)中miR-30d-5p的表达显著降低(P<0.05);miR-30d-5p的过表达抑制了肿瘤细胞的活力、迁移和侵袭并促进了细胞凋亡且差异有统计学意义(P<0.05);抑制ABCB5的表达能抑制细胞活力、迁移和侵袭性并促进了胰腺癌的细胞凋亡且差异有统计学意义(P<0.05);体内实验证明miR-30d-5p组能够抑制肿瘤生长且差异有统计学意义(P<0.05)。结论MiR-30d-5p通过靶向ABCB5影响胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡,可能是PC病人潜在的预后生物标志物及靶向治疗的靶点依据。

血清微RNA-183-5p和微RNA-144-3p水平与脑出血病人脑出血量及认知功能的相关性

目的检测脑出血病人血清中微RNA(miRNA)-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,分析两者与脑出血量及认知功能的相关性。方法回顾性分析2020年8月至2021年8月荆州市第一人民医院收治的符合纳入、排除标准的89例脑出血病人的临床资料(观察组),另收集体检健康者89例为对照组。根据头颅影像学检查结果,将观察组分为少量出血组(<15 mL)31例,中量出血组(15~30 mL)36例和大量出血组(>30 mL)22例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,Pearson相关分析脑出血量与血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p表达水平的相关性,根据是否出现认知功能障碍,将观察组病人分为预后良好组57例和预后不良组32例;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p水平对脑出血病人预后的评估价值。结果观察组血清miRNA-183-5p表达水平0.67±0.16低于对照组1.01±0.24,血清miRNA-144-3p的表达水平3.53±0.73高于对照组1.05±0.21(P<0.05)。大、中、少出血组血清miRNA-183-5p水平为0.49±0.11、0.69±0.11、0.78±0.21,依次显著降低(P<0.05):大量出血组血清miRNA-144-3p水平3.86±0.75与中量出血组水平3.58±0.68显著高于少量出血组水平3.17±0.65(P<0.05)。脑出血量与血清miRNA-183-5p表达呈负相关(r=−0.51,P<0.05)、与miRNA-144-3p表达呈正相关(r=0.54,P<0.05)。预后不良组血清miRNA-183-5p水平0.50±0.12低于预后良好组0.77±0.18,血清miRNA-144-3p水平3.75±0.62高于预后良好组3.41±0.34(P<0.05)。血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p单独及联合评估病人预后的AUC分别是0.94、0.79和0.96,二者联合检测的AUC、灵敏度高于各自单独检测。结论脑出血病人血清miRNA-183-5p水平降低,miRNA-144-3p水平升高,与脑出血量相关性较强,二者联合可评估病人认知功能障碍的发生。

微RNA-93-5p对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及机制

目的探讨血浆微RNA(miR)-93-5p对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及其可能机制。方法选择2022年1月至2023年1月焦作市人民医院收治的120例育龄期PCOS患者为PCOS组,选择同期在本院体检的18例育龄期健康女性为对照组。收集2组受试者的年龄、体质量和身高,计算体质量指数(BMI)。2组受试者均在自然月经周期的卵泡期或黄体酮诱导的撤退性出血期采集空腹静脉血,采用电化学法测定血清黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、总睾酮(TT)、抗米勒管激素(AMH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)水平,并计算胰岛素抵抗稳态模型(HOMA-IR);采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组受试者血浆中miR-93-5p表达水平。取对数生长期人卵巢颗粒细胞KGN,以每孔3×10^(5)个细胞接种至6孔板中,随机分为miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组、阴性对照(NC)组、空白对照组。miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics;LY294002+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50 mmol·L^(-1) LY294002处理;AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50μmol·L^(-1) AZD5363处理;NC组KGN细胞转染阴性对照质粒;空白对照组KGN细胞不做任何处理。应用qRT-PCR法检测各组KGN细胞中miR-93-5p表达,细胞计数试剂盒-8试验检测各组KGN细胞增殖情况。结果PCOS组与对照组受试者的年龄及FSH、ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05);PCOS组患者的BMI、TT、AMH、LH、FINS、FBG、HOMA-IR显著高于对照组(P<0.05)。PCOS组患者血浆中miR-93-5p相对表达量显著高于对照组(t=-5.549,P<0.001)。miR-93-5p与TT、FINS、HOMA-IR呈中度正相关(r=0.434、0.622、0.586,P<0.001),与FBG和LH呈低度正相关(r=0.398、0.398,P<0.001)。ROC曲线显示,血浆miR-93-5p诊断PCOS的最佳临界值为1.380,曲线下面积为0.906(95%置信区间:0.839~0.973,P<0.001),敏感度为0.858,特异度为0.833,约登指数为0.691。miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞中miR-93-5p相对表达量均显著高于空白对照组和NC组(P<0.05)。培养24、48、72 h时,miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞的增殖能力显著高于空白对照组和NC组(P<0.05);LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组细胞的增殖能力显著低于miR-93-5p mimics组(P<0.05)。结论PCOS患者血浆miR-93-5p呈过表达,miR-93-5p可能通过基于调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激B信号通路介导PCOS卵巢颗粒细胞增殖来参与PCOS的发生发展,血浆miR-93-5p水平对PCOS有一定的诊断价值。

微RNA-181a-5p介导Sirt1/PPARγ信号通路促进肾病综合征大鼠细胞凋亡的机制研究

目的旨在探究微RNA(miR)-181a-5p对肾病综合征大鼠细胞凋亡的调控机制。方法该研究起止年限为2021年1月至2022年12月。使用阿霉素(ADR)构建肾病综合征大鼠模型及体外肾病综合征损伤模型,转染miR-181a-5p inhibitor/NC至体外细胞模型。使用生化分析仪分析血清肌酐、血尿素氮、血清白蛋白和尿蛋白,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)检测肾组织及大鼠肾足细胞miR-181a-5p表达水平,通过TargetScan(http://www.targetscan.org/vert_72/)预测miR-181a-5p的下游靶基因,双萤光素酶报告实验来验证miR-181a-5p与沉默信息调节因子1(Sirt1)靶向结合关系。使用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,通过蛋白质印迹法检测Sirt1及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白水平。结果肾病综合征大鼠miR-181a-5p相对表达水平为3.50±0.30,敲低miR-181a-5p,使得Sirt1蛋白表达水平从0.36±0.02上调至0.87±0.06,PPARγ蛋白表达水平从0.26±0.02上调至0.78±0.05。结论miR-181a-5p通过抑制Sirt1/PPARγ信号通路活性促进肾足细胞凋亡。

血浆外泌体微RNA-126-5p在儿童注意缺陷多动障碍中的表达及临床意义

目的探究血浆外泌体微RNA-126-5p(miR-126-5p)在儿童注意缺陷多动障碍(ADHD)中的表达及临床意义。方法选取2021年7月至2022年7月在江苏省人民医院确诊的ADHD病儿70例为ADHD组,同时纳入同期江苏省人民医院健康体检的志愿者70例为对照组,采用韦氏幼儿智力量表第4版(WISC-Ⅳ)和家长评定行为量表(SNAP-Ⅳ)评估研究对象的临床症状,采用miRNA测序绘制研究对象的差异miRNA表达谱后寻找关键的miRNA,并利用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评价miRNA诊断ADHD的价值,分析miRNA与临床症状的相关性,同时分析miRNA的生物学功能。结果与对照组比较,ADHD病儿WISC-Ⅳ的计算言语理解指数(VCI)[(76.99±6.93)分比(95.30±5.94)分]、知觉推理指数(PRI)[(75.38±4.49)分比(94.69±6.33)分]、工作记忆指数(WMI)[(76.35±7.01)分比(94.11±5.87)分]、加工速度指数(PSI)[(81.36±6.90)分比(89.49±6.20)分]以及总智商(FSIQ)[(79.18±9.30)分比(90.19±5.22)分]的分值显著降低,而SNAP-Ⅳ中注意缺陷和多动/冲动评分明显增高。同时miRNA测序筛选出11个差异miRNAs,其中miR-126-5p在ADHD病儿的血浆外泌体表达升高,并与病儿临床症状存在相关性,且ROC曲线显示miR-126-5p的AUC为0.817,灵敏度为78.6%,特异度为91.4%。此外miR-126-5p主要涉及突触囊泡循环、轴突导向、炎症介质以及长时程增强等生物学功能有关。结论ADHD病儿血浆外泌体miR-126-5p升高,具有诊断ADHD的临床应用价值,同时具有调控突触可塑性和炎症介质参与ADHD的病理机制。

长链非编码RNA alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1靶向微小RNA-106b-5p调控氧化型低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1(A2M-AS1)靶向微小RNA(miR)-106b-5p对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的影响。方法用ox-LDL诱导人脑微血管内皮细胞设为ox-LDL组,正常培养细胞为对照(Ctrl)组;A2M-AS1过表达(pcDNA-A2M-AS1组)、空载体(pcDNA组)、miR-106b-5p抑制剂(anti-miR-106b-5p组)、阴性对照(anti-miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与对照mimic NC(miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与miR-106b-5p模拟物(miR-106b-5p mimics组)转染细胞后加ox-LDL处理,n=9;Real-time PCR检测A2M-AS1与miR-106b-5p表达;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测A2M-AS1与miR-106b-5p靶向关系;Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果与Ctrl组比较,ox-LDL组A2M-AS1表达水平、SOD和CAT活性、Bcl-2蛋白水平降低,miR-106b-5p表达水平、MDA水平、凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.05);过表达A2M-AS1或干扰miR-106b-5p降低ox-LDL诱导细胞后MDA水平、凋亡率与Bax蛋白水平,升高SOD、CAT活性和Bcl-2蛋白水平(P<0.05);A2M-AS1靶向miR-106b-5p;上调miR-106b-5p逆转过表达lncRNA A2M-AS1对ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的作用。结论A2M-AS1通过靶向miR-106b-5p减轻ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤。

皮肤鳞状细胞癌组织微RNA-103a-2-5p、钙黏附蛋白11表达及其临床意义

目的分析皮肤鳞状细胞癌组织中微RNA-103a-2-5p(miR-103a-2-5p)和钙黏附蛋白11(CDH11)的表达水平,探讨二者在临床研究中的意义。方法选取2017年1月至2019年6月宝鸡市人民医院诊治的98例皮肤鳞状细胞癌病人为研究对象,收集病人术中切除的癌组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中miR-103a-2-5p的表达水平。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测CDH11表达水平。TargetScanHuman网站预测miR-103a-2-5p与CDH11的靶向关系;Pearson相关性分析癌组织中miR-103a-2-5p和CDH11水平的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-103a-2-5p、CDH11表达与皮肤鳞状细胞癌病人预后的关系;影响皮肤鳞状细胞癌病人预后的因素采用Cox回归分析;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析miR-103a-2-5p和CDH11的表达对皮肤鳞状细胞癌的诊断价值。结果与癌旁正常组织[1.03±0.12,(5.06±1.43)µg/L]相比,皮肤鳞状细胞癌组织miR-103a-2-5p表达水平(1.46±0.38)显著升高(P<0.05),CDH11表达水平[(2.96±0.62)µg/L]明显降低(P<0.05);TargetScanHu-man网址预测miR-103a-2-5p与CDH11间存在结合位点;经Pearson相关性分析,miR-103a-2-5p与CDH11水平呈负相关(P<0.05);两者均与病人病理分级、TNM分期、淋巴结转移、侵袭程度相关(P<0.05);miR-103a-2-5p高表达组和CDH11低表达组复发率显著高于miR-103a-2-5p低表达组和CDH11高表达组(P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、miR-103a-2-5p是影响病人预后的危险因素(P<0.05),CDH11是影响病人预后的保护因素(P<0.05);miR-103a-2-5p、CDH11二者联合诊断皮肤鳞状细胞癌的ROC曲线下面积(AUC)为0.836,显著优于其各自单独诊断(P=0.018、0.021)。结论皮肤鳞状细胞癌病人miR-103a-2-5p表达水平升高,CDH11表达水平降低,二者均与病人临床病理特征及预后有密切关系,且二者联合可较好的诊断皮肤鳞状细胞癌。

血管性认知功能障碍病人血清微RNA-335-5p、血清应答因子水平及其临床意义

目的 探究血管性认知功能障碍(VCI)病人血清微RNA(miR)-335-5p、血清应答因子(SRF)水平及临床意义。方法以石家庄市人民医院2019年1月至2020年12月因脑卒中治疗后6个月出现VCI的110例病人为研究对象(VCI组),其中非痴呆型血管性认知功能障碍(VCIND)者48例(VCIND组)、血管性痴呆(VD)者62例(VD组)。同时间段该院脑卒中未合并认知障碍者110例为对照组。分析各组病人发病时(入院次日)、发病后6个月、发病后1年血清miR-335-5p、SRF水平。logistic回归模型分析脑卒中病人发生VCI的影响因素。Pearson法分析血清miR-335-5p与SRF水平的相关性。受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miR-335-5p、SRF水平对VCI的预测价值。结果 VCI组发病时miR-335-5p水平0.76±0.15低于对照组1.06±0.07,而SRF水平1.52±0.24高于对照组1.01±0.09,差异有统计学意义(P<0.05)。发病时,对照组、VCIND组、VD组的miR-335-5p水平逐次降低(1.06±0.07比0.86±0.17比0.68±0.14),SRF水平依次增加(1.01±0.09比1.32±0.25比1.67±0.24),差异有统计学意义(P<0.05)。VD组、VCIND组受试者在发病后6个月及1年时SRF水平低于发病时,而miR-335-5p水平高于发病时(P<0.05)。三组蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分、miR-335-5p、SRF组间、时间、交互作用差异有统计学意义(P<0.05)。发病时,VCI组血清miR-335-5p与SRF水平存在负相关性(r=-0.64,P<0.001)。年龄、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、miR-335-5p、SRF是影响脑卒中病人VCI的危险因素(P<0.05)。ROC分析显示,血清miR-335-5p、SRF、miR-335-5p联合SRF预测脑卒中后VCI的曲线下面积为0.88[95%CI:(0.84,0.93)]、0.90[95%CI:(0.86,0.95)]、0.93[95%CI:(0.89,0.97)]。结论VCI病人血清miR-335-5p水平明显降低,而SRF水平升高,二者水平变化与VCI严重程度有关,是导致脑卒中后VCI的影响因素,且二者联合对脑卒中后VCI有较高预测效能。

微RNA-9-5p在神经系统疾病中的研究现状

作为非编码单链RNA分子,微RNA(microRNA,miRNA)在神经系统中高度表达,参与调节神经细胞的存活和分化,在神经系统疾病中发挥重要作用。研究发现,miR-9-5p在机体的病理生理过程中起关键作用。本文主要总结当前miR-9-5p在阿尔茨海默病、帕金森病、缺血性脑卒中、抑郁症、胶质母细胞瘤和蛛网膜下腔出血等神经系统疾病中的研究进展。

超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对糖尿病足下肢血管病变的诊断价值

目的:探究超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对糖尿病足(DF)下肢血管病变(LEVD)的诊断价值。方法:选取2021年3月至2023年6月在我院就诊的90例DF患者为研究对象,根据是否合并LEVD分为LEVD组42例和非LEVD组48例。采用实时荧光定量PCR检测DF患者血清miR-106a-5p、miR-20b-5p表达水平,并对所有患者进行下肢血管超声检查。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对DF患者合并LEVD的诊断价值;采用一致性Kappa检验分析超声单独及联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p与金标准的一致性。结果:超声检查结果与金标准诊断结果一致性较高,Kappa值为0.642(P<0.05)。LEVD组血清miR-106a-5p、miR-20b-5p水平显著高于非LEVD组(P<0.05)。血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者发生LEVD的曲线下面积(AUC)分别为0.803、0.757。血清miR-106a-5p、miR-20b-5p检查结果与金标准诊断结果一致性均为中度,Kappa值分别为0.503、0.492(P<0.05)。超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p水平检查结果与金标准诊断结果一致性极高,Kappa值为0.866(P<0.05)。超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者LEVD的准确度、阴性预测值显著高于三者单独诊断(P<0.05)。结论:超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者LEVD的价值较高,值得推广。

血清血管紧张素转化酶2及微小RNA-26b-5p对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗术后心肌损伤的预测价值

目的探讨血清血管紧张素转化酶2(ACE2)、微小RNA-26b-5p(miR-26b-5p)对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心肌损伤的预测价值。方法选取2019年11月至2021年1月在华北石油管理局总医院行PCI手术的急性冠状动脉综合征患者122例,根据PCI术后6个月是否发生心肌损伤,分为心肌损伤组39例和心肌未损伤组83例。收集所有患者临床资料,采用酶联免疫吸附法检测血清ACE2水平、实时荧光定量PCR法检测血清miR-26b-5p水平,Pearson法分析血清ACE2与miR-26b-5p水平的相关性,受试者工作特征曲线评价血清ACE2、miR-26b-5p水平对急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的预测价值。结果与心肌未损伤组相比,心肌损伤组术后6个月肌钙蛋白I(cTnI)、术后6个月肌酸激酶同工酶(CK-MB)较高,差异有统计学意义(t=40.656、27.486,P<0.05)。与心肌未损伤组相比,心肌损伤组血清ACE2水平较高,血清miR-26b-5p水平较低,差异均有统计学意义(t=11.159、14.842,P<0.05);血清miR-26b-5p与ACE2水平呈负相关(r=-0.567,P<0.05);血清ACE2、miR-26b-5p水平预测急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的曲线下面积(AUC)分别为0.796、0.878,敏感度分别为87.20%、85.50%,特异度分别为60.20%、82.10%;两者联合预测急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的AUC为0.916,敏感度、特异度分别为89.70%、79.50%。结论急性冠状动脉综合征PCI术后心肌损伤患者血清ACE2呈高表达,血清miR-26b-5p呈低表达,ACE2、miR-26b-5p可预估急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤,两者联合预测价值较好。

高危型急性肺血栓栓塞症患者血清miR-34a-3p和miR-106b-5p的表达及意义

目的探讨高危型急性肺血栓栓塞症(APTE)患者血清微小RNA(miR)-34a-3p和miR-106b-5p的表达和意义。方法选取该院2022年2月至2023年2月收治的85例高危型APTE患者作为研究组;选择同期在该院就诊的80例非高危型APTE患者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有研究对象血清miR-34a-3p和miR-106b-5p水平。采用Pearson相关分析高危型APTE患者血清中miR-34a-3p与miR-106b-5p水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析高危型APTE发生的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-34a-3p与miR-106b-5p对高危型APTE的诊断价值。结果与对照组比较,研究组血清miR-34a-3p、miR-106b-5p水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。高危型APTE患者血清miR-34a-3p水平与miR-106b-5p水平呈正相关(r=0.764,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-34a-3p与miR-106b-5p水平升高是发生高危型APTE的保护因素(P<0.05)。血清miR-34a-3p、miR-106b-5p水平单独及二者联合检测诊断高危型APTE的曲线下面积(AUC)分别为0.810、0.772和0.828,二者联合检测诊断高危型APTE的AUC明显大于血清miR-106b-5p单独检测(Z=2.231,P=0.030),与miR-34a-3p单独检测诊断高危型APTE的AUC比较,差异无统计学意义(Z=1.156,P=0.248)。结论高危型APTE患者血清中miR-34a-3p、miR-106b-5p水平明显降低,二者可能对高危型APTE具有较高的临床诊断价值。

微小RNA-145-5p靶向Toll样受体4参与动脉粥样硬化泡沫细胞炎症和氧化应激反应

目的 探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对动脉粥样硬化细胞模型中炎性反应和氧化应激过程的调控作用。方法 体外构建人单核细胞白血病细胞源性泡沫细胞,分为模型组和对照组,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞内miR-145-5p相对表达。采用TargetScan数据库预测miR-145-5p与Toll样受体4(TLR4)的靶向关系。将293T细胞分为野生型+模拟物(mimic)组(转染TLR4野生型质粒+miR-145-5p模拟物)、野生型+mimic NC组(转染TLR4野生型质粒+miR-145-5p模拟物阴性对照)、突变型+mimic组(转染TLR4突变型质粒+miR-145-5p模拟物)、突变型+mimic NC组(转染TLR4突变型质粒+miR-145-5p模拟物阴性对照),采用双荧光素酶实验验证miR-145-5p与TLR4的靶向关系。体外诱导泡沫细胞,分为mimic组(转染miR-145-5p模拟物)、mimic NC组(转染模拟物阴性对照)、抑制物(inhibitor)组(转染miR-145-5p抑制物)、inhibitor NC组(转染抑制物阴性对照),采用qRT-PCR、Western blot检测TLR4 mRNA及蛋白表达,酶联免疫吸附检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1β和IL-6表达,生化相关试剂盒测定活性氧、丙二醛和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果 与对照组比较,模型组miR-145-5p表达明显降低(0.29±0.01 vs 1.00±0.08,t=11.180,P<0.01)。双荧光素酶实验显示,miR-145-5p mimic组荧光素酶活性较mimic NC组显著降低,差异有统计学意义(t=8.612,P<0.01)。与mimic NC组比较,mimic组TLR4 mRNA及蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧、丙二醛含量明显降低,miR-145-5p表达、SOD活性明显升高(P<0.05,P<0.01)。与inhibitor NC组比较,inhibitor组TLR4 mRNA及蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧、丙二醛含量明显升高,miR-145-5p表达、SOD活性明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 miR-145-5p通过靶向TLR4抑制动脉粥样硬化细胞模型中的炎症和氧化应激反应。

微RNA-145-5p对胃腺癌细胞增殖和细胞周期的影响及机制

目的探讨微RNA(miR)-145-5p对胃腺癌细胞增殖、细胞周期的影响及可能的调控机制。方法从癌症基因组图谱数据库中下载在胃腺癌中差异表达miRNA数据,对其进行差异分析并结合文献确定要研究的目标miRNA。利用TargetScan和Starbase数据库对miR-145-5p的下游信使RNA(mRNA)进行靶向预测并进行相关性分析。将对数生长期人胃腺癌细胞分为mimic NC组(转染mimic NC)、miR-145-5p mimic组(转染miR-145-5p mimic)、Inhibitor NC组(转染Inhibitor NC)、miR-145-5p Inhibitor组(转染miR-145-5p Inhibitor)、mimic NC+oe-NC组(同时转染mimic NC和oe-NC)、miR-145-5p mimic+oe-NC组(同时转染miR-145-5p mimic和oe-NC)、miR-145-5p mimic+oe-淋巴特异性解旋酶(HELLS)组(同时转染miR-145-5p mimic和oe-HELLS)。采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应检测人胃黏膜细胞和人胃腺癌细胞中miR-145-5p和HELLS mRNA的表达水平;细胞计数试剂盒-8和克隆形成实验检测胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的增殖能力;流式细胞术检测胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的周期分布情况;双荧光素酶报告实验验证miR-145-5p与HELLS的靶向关系;Western blot法检测HELLS蛋白的表达水平。结果生物信息学分析结果显示,胃腺癌组织中miR-145-5p的表达量显著低于正常胃组织,HELLS的表达量显著高于正常胃组织(P<0.05);HELLS与miR-145-5p呈显著负相关(r=-0.470,P<0.05)。人胃腺癌细胞中miR-145-5p的相对表达量显著低于人胃黏膜细胞,HELLS mRNA相对表达量显著高于人胃黏膜细胞(P<0.05)。转染后0、24 h时,mimic NC组与miR-145-5p mimic组SGC-7901细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);转染后48、72、96 h时,miR-145-5p mimic组SGC-7901细胞增殖能力显著低于mimic NC组(P<0.05)。转染后0、24 h时,Inhibitor NC组与miR-145-5p Inhibitor组BGC-823细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);转染后48、72、96 h时,miR-145-5p Inhibitor组BGC-823细胞增殖能力显著高于Inhibitor NC组(P<0.05)。miR-145-5p mimic组细胞克隆数显著少于mimic NC组(P<0.05),miR-145-5p Inhibitor组细胞克隆数显著多于Inhibitor NC组(P<0.05)。mimic NC+oe-NC组、miR-145-5p mimic+oe-HELLS组SGC-7901细胞克隆数显著多于miR-145-5p mimic+oe-NC组(P<0.05)。miR-145-5p mimic组G_(0)+G_(1)期SGC-7901细胞所占比例显著高于mimic NC组,S期和G_(2)+M期细胞所占比例显著低于mimic NC组(P<0.05)。miR-145-5p Inhibitor组G_(0)+G_(1)期BGC-823细胞所占比例显著低于Inhibitor NC组,S期和G_(2)+M期细胞所占比例显著高于Inhibitor NC组(P<0.05)。miR-145-5p mimic+oe-NC组G_(0)+G_(1)期SGC-7901细胞所占比例显著高于mimic NC+oe-NC组,S期和G_(2)+M期细胞所占比例显著低于mimic NC+oe-NC组(P<0.05)。miR-145-5p mimic+oe-HELLS组G_(0)+G_(1)期SGC-7901细胞所占比例显著低于miR-145-5p mimic+oe-NC组,S期和G_(2)+M期细胞所占比例显著高于miR-145-5p mimic+oe-NC组(P<0.05)。WT-HELLS+miR-145-5p mimic组细胞的荧光素酶活性显著低于WT-HELLS+mimic NC组(P<0.05),MUT-HELLS+miR-145-5p mimic组与MUT-HELLS+mimic NC组细胞中荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-145-5p mimic组细胞中HELLS蛋白相对表达量显著低于mimic NC组(P<0.05)。mimic NC+oe-NC组、miR-145-5p mimic+oe-HELLS组细胞中HELLS蛋白相对表达量显著高于miR-145-5p mimic+oe-NC组(P<0.05)。结论miR-145-5p在胃腺癌中呈显著低表达。过表达miR-145-5p能够抑制胃腺癌细胞的增殖,同时将胃腺癌细胞阻滞在G_(0)和G_(1)期。miR-145-5p可能是通过靶向HELLS mRNA来抑制HELLS蛋白的表达和胃腺癌细胞的增殖。

血清微RNA-130b-3p、果蝇母系DPP同源物4对多囊卵巢综合征不孕病人人工授精妊娠结局的预测价值

目的探究血清微RNA(miR)-130b-3p、果蝇母系DPP同源物4(SMAD4)对多囊卵巢综合征(PCOS)不孕病人人工授精妊娠结局的预测价值。方法选取2018年1月至2022年1月在平顶山市妇幼保健院就诊的PCOS不孕病人172例为PCOS组,另取同期体检的180例月经周期正常且已婚已育女性作为对照组。实时荧光定量PCR法检测血清中miR-130b-3p的水平;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清SMAD4水平。判断PCOS病人人工授精结局并分为临床妊娠组(n=146)和未临床妊娠组(n=26)。Pearson法对PCOS病人血清SMAD4、miR-130b-3p、抗苗勒氏管激素(AMH)的相关性进行分析;logistic回归分析影响PCOS不孕病人人工授精后未临床妊娠的危险因素,采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评估miR-130b-3p、SMAD4水平预测PCOS病人人工授精未临床妊娠的价值。结果与对照组相比,PCOS组血清miR-130b-3p(1.02±0.24比2.16±0.34)水平较高(t=36.47,P<0.05),血清SMAD4[(71.15±11.62)ng/L比(36.05±6.37)ng/L]水平较低(t=34.92,P<0.05),与临床妊娠组相比,未临床妊娠组血清miR-130b-3p(2.04±0.31比2.85±0.51)水平较高(P<0.05),优势卵泡数≥2个比例(78.08%比50.00%)及血清AMH[(8.27±1.85)pg/L比(6.16±1.01)pg/L]、SMAD4[(38.27±6.99)ng/L比(23.60±2.91)ng/L]水平较低(P<0.05)。Pearson分析显示,PCOS病人血清中SMAD4与miR-130b-3p呈负相关(r=−0.56,P<0.05),PCOS病人血清中miR-130b-3p与AMH呈负相关(r=−0.46,P<0.05),血清中SMAD4与AMH呈正相关(r=0.46,P<0.05)。logistic分析显示,miR-130b-3p水平升高是PCOS不孕病人人工授精后未临床妊娠的危险因素(P<0.05),AMH和SMAD4水平降低是PCOS不孕病人人工授精后未临床妊娠的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-130b-3p、SMAD4联合预测PCOS病人人工授精未临床妊娠的曲线下面积(AUC)为0.95,其灵敏度为96.20%,特异度76.70%。结论PCOS病人血清miR-130b-3p水平升高,SMAD4水平下降,二者对PCOS病人人工授精未临床妊娠有预测价值。

微小RNA-34a-5p通过靶向鼠双微体4抑制巨噬细胞氧化应激损伤的作用

目的探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)通过靶向鼠双微体4(MDM4)抑制巨噬细胞氧化应激损伤的作用。方法THP-1人单核细胞复苏后,培养分化为巨噬细胞。设立空白对照组。剩余细胞加入人源氧化低密度脂蛋白,孵育48 h,分化为巨噬泡沫细胞。设立动脉粥样硬化(AS)对照组。miR-34a-5p质粒转染,设为miR-34a-5p质粒转染组。每组24个重复。比较三组巨噬细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)蛋白及活性氧(ROS)水平,MDM4阳性率。结果空白对照组凋亡率为(2.55±0.32)%,AS对照组凋亡率为(28.16±4.23)%,miR-34a-5p转染组为(13.48±1.66)%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。AS对照组高于空白对照组与miR-34a-5p转染组,miR-34a-5p转染组高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。三组MDA、SOD蛋白及ROS水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);AS对照组MDA、ROS水平最高,SOD水平最低,其次为miR-34a-5p转染组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组MDM4阳性率为(8.33±0.35)%,AS对照组为(29.26±3.48)%,miR-34a-5p转染组为(14.26±1.59)%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-34a-5p可下调MDM4,进而抑制巨噬细胞氧化应激损伤。