微RNA-124-3p在溃疡性结肠炎病人外周血中的表达及意义

目的检测溃疡性结肠炎(UC)病人外周血中微RNA-124-3p(miR-124-3p)的表达水平,并讨论其临床意义。方法选择121例UC病人(UC组)和60例健康体检者(对照组)作为研究对象进行前瞻性研究,UC组来源于2019年8月至2021年8月期间武汉市蔡甸区人民医院住院治疗的病人,对照组为同期来院进行健康体检的个体。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-124-3p在各组外周血中的表达水平,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测C-反应蛋白(CRP)在各组外周血中的表达水平。UC活动期病人外周血miR-124-3p表达水平与CRP水平的相关性采用Pearson法,与UC内镜严重指数(UCEIS)评分、改良梅奥(Mayo)评分的相关性分析采用Spearman法。结果与对照组相比,UC组病人外周血中miR-124-3p的表达水平显著降低(0.84±0.22比0.52±0.17,P<0.05),CRP水平显著升高[(7.08±2.52)mg/L比(9.83±2.91)mg/L,P<0.05]。与UC缓解期病人相比,活动期病人外周血中miR-124-3p的表达水平显著降低(0.67±0.22比0.44±0.14,P<0.05),CRP水平显著升高[(9.06±2.85)mg/L比(10.25±2.94)mg/L,P<0.05]。UC不同临床活动度病人外周血miR-124-3p表达水平由高至低依次为轻度(0.53±0.16)、中度(0.45±0.13)、重度(0.30±0.09),CRP表达水平及UCEIS评分、改良Mayo评分由高至低依次为重度[(12.03±3.02)mg/L、(5.97±1.82)分、(11.53±0.46)分]、中度[(10.35±2.79)mg/L、(4.82±1.51)分、(7.70±1.64)分)]、轻度[(8.74±2.83)mg/L、(3.03±0.90)分、(3.98±0.95)分],组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。UC活动期病人外周血miR-124-3p表达水平与CRP、UCEIS评分及改良Mayo评分均呈负相关(r=−0.57、−0.44、−0.59,P<0.05)。结论UC病人外周血miR-124-3p表达水平降低,其水平变化与UC疾病活动和病情程度密切相关。

外周血中微RNA-16和微RNA-124表达水平对抑郁症患者治疗效果的影响

目的探讨外周血中微RNA(miR)-16、miR-124表达水平对抑郁症患者治疗效果的影响。方法选择2020年5月至2021年3月新乡医学院第二附属医院收治的60例抑郁症患者为研究对象。患者均接受米氮平片口服治疗,起始剂量为15 mg·d^(-1),服用2周后增加至30 mg·d^(-1),并维持此剂量服用;若服用2周后治疗效果不明显,可将米氮平片增加至45 mg·d^(-1),或调整为联合口服艾司西酞普兰,艾司西酞普兰起始剂量为每次10 mg·d^(-1);治疗周期为3个月。治疗3个月后,采用汉密尔顿焦虑量表(HAMA)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评估所有患者临床疗效,并根据临床疗效将患者分为疗效不佳组(n=19)和疗效良好组(n=41)。治疗前,采集患者空腹静脉血3 mL,采用实时荧光聚合酶链式反应法检测患者外周血中miR-16、miR-124相对表达量。采用logistic回归分析外周血中miR-16、miR-124表达与抑郁症患者临床疗效的关系。绘制受试者工作曲线,并计算曲线下面积(AUC),分析外周血中miR-16、miR-124表达预测抑郁症患者临床疗效的价值。结果疗效良好组患者外周血中miR-16相对表达量显著高于疗效不佳组,miR-124相对表达量显著低于疗效不佳组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,miR-16是抑郁症患者临床疗效的保护因子(OR<1,P<0.05),miR-124是抑郁症患者临床疗效的危险因子(OR>1,P<0.05)。抑郁症患者外周血中miR-16、miR-124相对表达量单独及联合检测预测抑郁症患者临床疗效的AUC分别为0.843、0.849、0.944。外周血中miR-16和miR-124相对表达量单独及联合检测预测抑郁症患者临床疗效的AUC、敏感度比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-16、miR-124相对表达量联合检测预测抑郁症患者临床疗效的特异度显著高于miR-16相对表达量单独检测,显著低于miR-124相对表达量单独检测(P<0.05)。结论抑郁症患者接受艾司西酞普兰、米氮平治疗的临床疗效欠佳可能受外周血中miR-16水平降低、miR-124水平升高影响,miR-16、miR-124表达水平联合检测预测抑郁症患者临床疗效不佳风险具有较高价值。

微RNA-124-3p通过芳香烃受体激活β-联蛋白通路调控胃癌细胞增殖和侵袭的机制

目的探讨微RNA(miR)-124-3p及其靶向基因芳香烃受体(AHR)在胃癌诊断和预后评估中的价值,及其调控胃癌细胞增殖和侵袭的相关分子机制。方法基于癌症基因组图谱数据库和基因型组织表达数据库获得miR-124-3p在胃腺癌患者的临床和预后特征,通过生物信息学分析miR-124-3p水平高低与不同病理分期、TNM分期、总生存期、无病生存期和无进展间期胃腺癌患者的关系。由Target Scan 7.1网络工具预测miR-124-3p与互作分子AHR mRNA的作用位点,通过小鼠皮下成瘤实验、免疫组织化学染色、双荧光素酶检测、实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹实验验证miR-124-3p在AHR mRNA中的靶结合位点。选择9只4~6周龄、体重为(18.43±0.29)g的雄性Balb/c裸小鼠,分别由小鼠尾静脉注射miR-124-3p模拟物(miR-124-3p组)、阴性对照模拟物(阴性对照组)和0.9%氯化钠溶液(氯化钠对照组),用miR-124-3p模拟物、阴性对照模拟物和0.9%氯化钠溶液转染胃癌细胞(MKN-45、AGS),分析生物学实验中3组小鼠AHR和连环蛋白β1基因(CTNNB1)的mRNA表达水平,AHR和β-联蛋白的蛋白质表达水平,以及miR-124-3p对转染的胃癌细胞增殖和侵袭的影响。统计学方法采用Pearson相关分析和Holm-Sidak法校正的多重t检验。结果miR-124-3p低表达与胃腺癌患者严重的病理分期、TNM分期均呈正相关(R^(2)=0.83、0.86,P=0.031、0.023);miR-124-3p高表达与总生存期、无病生存期和无进展间期延长均呈正相关(R^(2)=1.00、0.99、0.99,P=0.029、0.044、0.049)。小鼠皮下成瘤实验结果显示,miR-124-3p组瘤体内的凋亡细胞数多于阴性对照组和氯化钠对照组[(43.33±1.86)/高倍视野比(20.00±1.73)/高倍视野、(18.67±1.76)/高倍视野],差异均有统计学意义(t=8.55、8.33,P=0.013、0.014)。免疫组织化学染色结果显示,miR-124-3p组小鼠体内肿瘤组织的AHR蛋白质的光密度低于阴性对照组和氯化钠对照组(0.081±0.008比0.276±0.019、0.273±0.018),差异均有统计学意义(t=9.06、7.51,P=0.012、0.017)。双荧光素酶检测结果显示,转染miR-124-3p模拟物的野生型AHR MKN-45细胞中荧光强度低于转染阴性对照模拟物的细胞(0.293±0.020比1.000±0.032),差异有统计学意义(t=18.56,P<0.001)。RT-qPCR检测结果显示,转染miR-124-3p模拟物的MKN-45细胞中AHR和CTNNB1的mRNA水平均低于未处理的MKN-45细胞(0.51±0.09比1.02±0.02、0.46±0.03比1.03±0.01),差异均有统计学意义(t=4.51、16.60,P=0.046、0.004)。蛋白质印迹实验结果显示,转染miR-124-3p模拟物的MKN-45细胞中的AHR和β-联蛋白的蛋白质相对表达量均低于转染0.9%氯化钠溶液和阴性对照模拟物的细胞(3332.94±81.25比9041.60±439.79、8276.54±562.52,2725.79±167.57比9701.94±410.02、8081.66±275.84),差异均有统计学意义(t=15.49、7.91、17.35、19.42,P=0.004、0.016、0.003、0.003)。结论miR-124-3p与胃癌诊断和预后相关,可通过负向调节AHR mRNA和蛋白质表达,进而下调CTNNB1 mRNA和β-联蛋白通路相关蛋白质表达,于体内外诱导胃癌细胞凋亡。因此,miR-124-3p可能成为胃癌诊断和预后评估的潜在标志物。

MicroRNA-124作为缺血性脑卒中标志物的研究进展

微RNA(miRNA/miR)是一类小的(18~20个核苷酸)非编码RNA,其主要作用是调节基因的表达,参与了几乎所有的生物学过程。其中miR-124几乎只在中枢神经系统中持续表达,被称为"大脑特异性miRNA"。miR-124通过靶向作用于多种蛋白在缺血性脑卒中患者的神经元分化及神经形成的过程中也起到了重要的调节作用,今后很可能作为缺血性脑卒中诊断及治疗的生物标志物。

MiR-124a对胶原诱导性关节炎小鼠的影响及其机制

目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性自身免疫性疾病,微RNA已被证实在RA中起重要作用。微RNA-124a(microRNA-124a,miR-124a)在RA滑膜细胞中具有抗增殖及抗炎作用。本研究探讨过表达miR-124a对胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠关节炎的影响及其可能的作用机制。方法:构建牛源性II型胶原和完全弗氏佐剂诱导的DBA/1小鼠CIA模型。初次免疫后第28天(D28),将CIA模型小鼠随机分成模型组、miR-124a治疗组和阴性对照(NC)组,分别在小鼠尾根部皮内注射生理盐水、miR-124a agomir、miR-124a agomir阴性对照,每3 d注射1次,共注射4次。观察并评估小鼠关节肿胀程度及关节炎指数。初次免疫后第63天(D63),处死小鼠获取踝关节滑膜组织。采用HE染色观察小鼠关节滑膜细胞增殖、炎症细胞浸润、血管翳、骨质侵蚀情况;TUNEL染色检测滑膜组织细胞凋亡情况;定量反转录PCR检测滑膜组织中miR-124a、磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(phosphatidylinositol-3-kinase catalytic subunit alpha,PIK3CA)基因及下游基因Bcl-2、Bax mRNA的表达;免疫组织化学检测滑膜组织中PIK3CA、Bcl-2、Bax蛋白质的表达。结果:D28时,DBA/1小鼠足爪开始出现不同程度的肿胀,表明CIA模型构建成功。初次免疫后第48天(D48),miR-124a治疗组小鼠的足爪仅有轻微红肿,而模型组、NC组足爪红肿明显。初次免疫后第51、53、59、62天(D51、D53、D59、D62),miR-124a治疗组小鼠关节炎指数较NC组明显下降(均P<0.05)。D63时,miR-124a治疗组小鼠的滑膜细胞增殖、炎症细胞浸润、血管翳及骨质侵蚀评分均较模型组和NC组明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡增加(P<0.01或P<0.001),滑膜组织中miR-124a、Bax的表达水平明显上调且PIK3CA、Bcl-2的表达水平明显下调(P<0.05或P<0.01或P<0.001),Bcl-2/Bax值明显下降(P<0.01或P<0.001)。结论:过表达miR-124a可减轻CIA小鼠关节炎,其机制可能是miR-124a靶向调控PIK3CA及其下游通路,促进滑膜细胞凋亡,抑制滑膜细胞增殖。

急性缺血性脑卒中患者血清miR-124-3p和EGR1的表达水平及其预测并发吞咽障碍的价值

目的:探讨血清微RNA-124-3p(microRNA-124-3p,miR-124-3p)、早期生长反应因子1(early growth response 1,EGR1)在急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者合并吞咽障碍中的预测价值。方法:回顾性选取2020年5月至2023年3月期间郑州大学第五附属医院神经内科收治住院的181例AIS患者为研究对象,依据吞咽功能测试分为障碍组(62例)和无障碍组(119例)。采用酶联免疫吸附法检测血清EGR1表达水平,real-time RT-PCR检测血清miR-124-3p表达水平;AIS患者血清miR-124-3p、EGR1表达水平与基线资料的相关性采用Spearman及Pearson分析;血清miR-124-3p、EGR1表达水平对AIS患者并发吞咽障碍的预测价值采用受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析;AIS患者并发吞咽障碍的影响因素采用logistic回归分析。结果:障碍组血清EGR1表达水平、年龄、美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评分均高于无障碍组(均P<0.05);血清miR-124-3p表达水平、Barthel指数、肌力分级>3级患者比例均低于无障碍组(均P<0.05)。AIS并发吞咽障碍患者血清miR-124-3p表达水平与年龄、NIHSS评分呈负相关(r=−0.514、−0.520,均P<0.05),与Barthel指数、肌力分级呈正相关(r=0.509、0.492,均P<0.05);EGR1表达水平与年龄、NIHSS评分呈正相关(r=0.498、0.516,均P<0.05),与Barthel指数、肌力分级呈负相关(r=−0.527、−0.494,均P<0.05)。血清miR-124-3p、EGR1表达水平单独及联合预测AIS患者并发吞咽障碍的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.795、0.811、0.880。EGR1是AIS患者并发吞咽障碍的独立危险因素,miR-124-3p是AIS患者并发吞咽障碍的保护因素(均P<0.05)。结论:并发吞咽障碍的AIS患者血清miR-124-3p呈低表达,EGR1呈高表达,临床可根据二者的联合检测对吞咽障碍进行早期评估,以改善预后。

过敏性鼻炎患儿血清miR-124-3p和GATA3表达水平与疾病严重程度、Th1/Th2平衡的关系

目的探讨过敏性鼻炎(AR)患儿血清微RNA-124-3p(miR-124-3p)、GATA结合蛋白3(GATA3)表达与患儿疾病严重程度、Ⅰ型辅助性T细胞(Th1)/Ⅱ型辅助性T细胞(Th2)平衡的相关性。方法选择2020年6月至2022年4月在江苏省无锡市妇幼保健院(以下简称“我院”)儿童保健耳鼻喉科确诊的AR患儿87例为观察对象(AR组),按症状严重程度分为轻度组53例、中重度组34例,另选取同期在我院健康体检儿童85例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-124-3p表达水平,流式细胞术检测Th1、Th2细胞比例及Th1/Th2,采用酶联免疫吸附法检测血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素12(IL-12)、IL-4、IL-5、IL-10、GATA3水平,Pearson法分析AR患儿血清miR-124-3p表达与GATA3相关性,mi R-124-3p、GATA3与Th1/Th2及细胞因子相关性。结果AR组血清mi R-124-3p表达水平低于对照组,GATA3水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中重度组血清mi R-124-3p表达水平低于轻度组,GATA3水平高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。AR组Th1细胞比例和Th1/Th2比值低于对照组,Th2细胞比例高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。AR组血清IFN-γ、IL-12水平低于对照组,IL-4、IL-5、IL-10水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,AR患儿血清miR-124-3p表达水平与GATA3水平呈负相关(r<0,P<0.05)。miR-124-3p与Th1、Th1/Th2、IFN-γ、IL-12呈正相关(r>0,P<0.05),与Th2、IL-4、IL-5、IL-10呈负相关(r<0,P<0.05);GATA3与Th1、Th1/Th2、IFN-γ、IL-12呈负相关(r<0,P<0.05),与Th2、IL-4、IL-5、IL-10呈正相关(r>0,P<0.05)。结论AR患儿血清mi R-124-3p表达水平降低,GATA3水平升高,与患儿疾病严重程度和Th1/Th2失衡有关。

乌头碱运动神经毒性及miR-124作为其潜在毒性标志物的探索研究

目的研究循环微RNA(microRNA,miR)-124成为乌头碱运动神经毒性标志物的潜力。方法将42只大鼠随机分为对照组、乌头碱0.025 mg/kg(低剂量)组及0.05 mg/kg(高剂量)组,每组14只,静脉注射给药14 d。采用功能观察组合检测运动行为改变;观察脑组织病理和检测脑细胞凋亡;采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测脑和血液miR-124表达;采用酶联免疫吸附试验检测血液神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的含量。结果与对照组相比,低剂量组给药D14后、高剂量组给药D1和D14后出现移笼较容易、头部或躯体运动减少以及反射减弱等运动行为改变(P<0.05);高剂量组见大脑纹状体坏死和胶质细胞异常增生;低、高剂量组小脑颗粒细胞层和大脑皮层细胞凋亡增加,脑组织miR-124表达增加(P<0.01)。D1给药后1 h,高剂量组循环miR-124的升高最早(P<0.01);D1给药后8 h,高剂量组循环NSE及GFAP水平升高最早(P<0.01)。结论与循环NSE和GFAP相比,高剂量组循环miR-124更早出现升高,具有检测乌头碱运动神经毒性的潜力。