微RNA-125b靶向调控M2型丙酮酸激酶影响宫颈癌SiHa细胞机制验证

目的探讨宫颈癌细胞中微RNA(miR)-125b和M2型丙酮酸激酶(PKM2)的表达以及miR-125b对PKM2基因的调控作用,从而确定miR-125b下游调控的靶基因,阐明其在宫颈癌发生发展中可能的分子机制。方法培养宫颈癌SiHa细胞及正常上皮细胞(293T细胞),利用细胞转染技术过表达或沉默miR-125b。实验分为实验组:miR-125b mimics(M组)、miR-125b inhibitor(I组);阴性对照组:miR-125b mimics negative con-trol(MNC组)、miR-125b inhibitor negative control(INC组);空白对照组(B组):未进行转染。采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-125b的含量。采用免疫荧光及蛋白质印迹法检测各组细胞中PKM2蛋白的表达。结果与293T细胞相比,宫颈癌SiHa细胞中miR-125b的表达下调(0.82±0.05)(P<0.05),PKM2表达上调(3.4±0.5)倍(P<0.05)。SiHa细胞转染成功后,免疫荧光检测miR-125b模拟物组表达PKM2蛋白的细胞数目(1.0±0.7)低于模拟物阴性对照组表达PKM2蛋白的细胞数目(3.6±0.5)(P<0.05);miR-125b抑制物组中表达PKM2蛋白的细胞数目(6.0±0.7)高于抑制物阴性对照组表达PKM2蛋白的细胞数目(3.6±1.3)(P<0.05)。蛋白质印迹法检测miR-125b模拟物组的PKM2蛋白相对表达量(0.239±0.042)低于模拟物阴性对照组的PKM2蛋白相对表达量(0.314±0.018)(P<0.05);miR-125b抑制物组的PKM2蛋白表达水平(0.40±0.03)高于抑制物阴性对照组的PKM2蛋白表达水平(0.34±0.04)(P<0.05)。结论与正常上皮细胞相比,宫颈癌SiHa细胞中miR-125b表达下调,而PKM2蛋白表达上调;宫颈癌细胞中miR-125b表达下调可能会通过增加PKM2的表达,从而增强其糖酵解作用,促进肿瘤的生长。

microRNA-125b在口腔鳞状细胞癌患者血浆中的表达及意义

目的:探讨micro RNA-125b(mi R-125b)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者血浆中的表达及临床意义。方法:用茎环法反转录(RT)-实时荧光PCR法检测85例OSCC患者和46例健康人血浆中mi R-125b的表达水平,评估其作为OSCC诊断标志的检测效能。采用SPSS17.0软件包中的单因素方差分析和ROC曲线分析对结果进行统计学处理。结果:反转录PCR法可特异性扩增血浆中的mi R-125b,与正常对照组相比,OSCC患者组血浆mi R-125b表达水平显著上调(P<0.05);ROC曲线分析显示,血浆mi R-125b水平可有效区分OSCC患者和正常人群,其曲线下面积(AUC)达到0.966;当确定最佳截断值为3.46(fold值)时,血浆mi R-125b对OSCC的诊断敏感度和特异度分别达到89.4%和93.5%。结论:鉴于其良好的诊断效能,血浆mi R-125b有望成为具有潜在应用价值的OSCC生物学标志物。

miRNA-125b在鼻咽癌中的表达及与顺铂化疗敏感性研究

目的探讨微小RNA-125b(miRNA-125b)在鼻咽癌组织、血清中的表达及与顺铂化疗敏感性的相关性。方法收集34例临床确诊鼻咽癌完整病例资料及组织和血清标本,另取患者癌旁组织为组织对照,同时收集34例健康体检者血清标本为血清对照,运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time qPCR)法检测miRNA-125b在癌组织、癌旁组织、血清中的表达,并进行统计学分析。结果 miRNA-125b在癌组织的表达显著低于癌旁组织(P=0.006),在鼻咽癌患者血清中的表达显著低于健康体检者(P=0.000);miRNA-125b在患者癌组织与血清中的表达无相关性(r=0.112,P=0.528)。miRNA-125b在癌组织中的表达与病理分型、T分期、N分期有关(P<0.05),在患者血清中的表达仅与N分期相关(P<0.05)。miRNA-125b在癌组织中表达与顺铂化疗敏感性呈负性相关(P<0.05),在患者血清中的表达与顺铂化疗敏感性无明显相关性(P>0.05)。结论 miRNA-125b的低表达可能参与了鼻咽癌的发生、发展,对鼻咽癌诊断、分型、分级有一定意义,在癌组织中的表达水平可作为筛选顺铂化疗方案的指标之一。

过表达miRNA-125b促进肺癌细胞A549的增殖、侵袭能力及其机制研究

目的探讨过表达miRNA-125b对肺癌细胞A549的增殖、侵袭能力的影响及其机制。方法将A549细胞分为3组:miRNA-125b组(miR-125b模拟物),NC组(NC模拟物)及空白组(同等体积的混有转染剂的胎牛血清),采用Q-PCR检测miRNA-125b的转染及表达效率。MTT法分析各组细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。采用Western blot法检测各组细胞Bcl-2调节因子(BMF)的表达水平。结果与空白组比较,miRNA-125b组细胞的miRNA-125b表达水平、增殖能力及侵袭能力上升(P<0.05);NC组的上述指标无明显变化(P>0.05)。与空白组比较,miRNA-125b组细胞的BMF表达水平下降(P<0.05);NC组的BMF表达水平无明显变化(P>0.05)。结论 miRNA-125b能通过抑制BMF的表达促进肺癌细胞A549的增殖及侵袭。