微RNA-133a-3p靶向调控转化生长因子-β1/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微RNA(miR)-133a-3p靶向调控转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法选择2020年2月至2021年2月焦作市人民医院皮肤科收治的瘢痕疙瘩患者29例为研究对象,手术切取瘢痕疙瘩组织及其周围正常皮肤组织,分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)和正常皮肤组织成纤维细胞(NF)。取对数生长期KF细胞,随机分为空白对照组、miR-阴性对照(NC)组、miR-133a-3p组、miR-133a-3p+pcDNA3.1组、miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β_(1)组;空白对照组细胞不做任何转染,miR-NC组细胞转染miR-NC,miR-133a-3p组细胞转染miR-133a-3p mimic,miR-133a-3p+pcDNA3.1组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1,miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β_(1)组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1-TGF-β_(1)。实时荧光定量聚合酶链反应法检测组织和细胞中miR-133a-3p和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。应用TargetScan数据库通过生物信息分析预测miR-133a-3p与TGF-β_(1)的3′非翻译区(3′-UTR)存在结合位点,构建含有预测结合位点的野生型(Wt)和突变型(Mt)TGF-β_(1)3′-UTR片段的荧光素酶报告基因载体,分别将用脂质体2000包裹的Wt TGF-β_(1)或Mt TGF-β_(1)报告基因载体与miR-133a-3p mimics或miR-NC共转染入KF细胞,将转染后的细胞设为miR-NC+Wt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Wt TGF-β_(1)组、miR-NC+Mt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Mt TGF-β_(1)组,双荧光素酶检测试剂盒检测4组细胞双荧光素酶活性。Western blot检测空白对照组、miR-NC组、miR-133a-3p组KF细胞中TGF-β_(1)、Smad3蛋白的相对表达量。结果瘢痕疙瘩组织中miR-133a-3p相对表达量显著低于正常皮肤组织(t=18.988,P<0.05)。KF细胞中miR-133a-3p相对表达量显著低于NF细胞(t=18.679,P<0.05)。miR-133a-3p组细胞中miR-133a-3p相对表达量显著高于空白对照组和miR-NC组,CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对表达量显著低于空白对照组和miR-NC组(P<0.05);空白对照组与miR-NC组细胞中miR-133a-3p和CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-133a-3p组细胞凋亡率显著高于空白对照组和miR-NC组,细胞增殖活力显著低于空白对照组和miR-NC组(t=13.912、14.227、-8.020、-6.947,P<0.05);空白对照组与miR-NC组细胞凋亡率、细胞增殖活力比较差异无统计学意义(t=-0.607、0.448,P>0.05)。miR-133a-3p+Wt TGF-β_(1)组细胞相对荧光素酶活性显著低于miR-NC+Wt TGF-β_(1)组、miR-NC+Mt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Mt TGF-β_(1)组(t=-15.729、-19.490、-16.186,P<0.05)。miR-NC+Wt TGF-β_(1)组、miR-NC+Mt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Mt TGF-β_(1)组细胞相对荧光素酶活性两两比较差异均无统计学意义(t=-0.596、0.847、0.842,P>0.05)。KF细胞中Smad3和TGF-β_(1)蛋白相对表达量显著高于NF细胞(t=5.758、9.027,P<0.05)。miR-133a-3p组细胞中Smad3和TGF-β_(1)蛋白相对表达量显著高于miR-NC组(t=-4.913、-8.314,P<0.05)。miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β_(1)组细胞中Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA mRNA相对表达量和细胞增殖活力显著高于miR-133a-3p组和miR-133a-3p+pcDNA3.1组,细胞凋亡率显著低于miR-133a-3p转染组和miR-133a-3p+pcDNA3.1组(P<0.05)。miR-133a-3p组与miR-133a-3p+pcDNA3.1组细胞中Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA mRNA相对表达量及细胞凋亡率和细胞增殖活力比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达miR-133a-3p可通过负调控TGF-β_(1)抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,促进细胞凋亡,提示miR-133a-3p/TGF-β_(1)通路可能是瘢痕疙瘩治疗的一个新的靶点。

冠心病病人外周血微RNA-133b表达与预后的关系分析

目的 探究冠心病病人外周血微RNA-133b(miR-133b)表达水平,并分析其表达与病人预后的关系。方法 选取2019年7月至2021年1月于华北石油管理局总医院就诊的冠心病病人95例,其中稳定性冠心病(SACD)病人54例为SACD组,急性冠状动脉综合征(ACS)41例为ACS组,另选同期该院进行体检的健康人群60例作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-133b水平;随访6个月,根据是否出现主要心脏不良事件,分为预后不良组(出现主要心脏不良事件,33例)和预后良好组(未出现主要心脏不良事件,62例)。采用Spearman相关性分析检验血清miR-133b水平与Gensini评分的关系;采用多因素logistic回归分析影响冠心病病人预后的危险因素;采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miR-133b水平对冠心病病人预后不良的预测价值。结果 SACD组、ACS组身体质量指数、高血压、吸烟史及血脂异常者比例高于对照组(P<0.05),ACS组Gensini评分、病变支数≥3支占比高于SACD组(P<0.05)。ACS组、SACD组血清miR-133b(1.59±0.15比1.36±0.12比1.02±0.05)水平均高于对照组(P<0.05),ACS组血清miR-133b水平高于SACD组(P<0.05)。SACD组病人血清miR-133b水平与Gensini评分呈正相关(r=0.58,P<0.001),ACS组病人血清miR-133b水平与Gensini评分也呈正相关(r=0.57,P<0.001)。预后不良组病人Gensini评分、血清miR-133b水平及病变支数≥3支占比高于预后良好组(P<0.05)。Gensini评分、病变支数、miR-133b均为影响冠心病病人预后的危险因素(P<0.05)。血清miR-133b水平预测冠心病病人预后不良的曲线下面积为0.83,最佳截断值为1.55,灵敏度高达97.0%,特异度为64.5%。结论 冠心病病人血清miR-133b水平升高,对病人的预后不良有一定的预测价值。

miR-133a调控RUNX2/BMP2信号通路参与激素性股骨头坏死的机制

目的探讨微RNA(miR)-133a调控生长相关转录因子2(RUNX2)/骨形态蛋白2(BMP2)信号通路参与激素性股骨头坏死(SONFH)的机制。方法收集本院接受髋关节置换SONFH患者(SONFH组)骨髓及股骨颈骨折不愈合患者(对照组)骨髓,提取骨髓间充质干细胞(BMSCs),经表型鉴定、成骨、成脂分化鉴定后检测BMSCs miR-133a、RUNX2 mRNA和蛋白表达水平,双荧光素酶鉴定miR-133a与RUNX2的靶向关系。实验分组包括对照组、SONFH组、抑制剂对照组(inhibitor con组)、miR-133a抑制剂组(miR-133a inhibitor组)、miR-133a inhibitor+si-RUNX2组。实时定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中miR-133a、RUNX2 mRNA水平;Western blotting检测BMSCs中RUNX2、BMP2、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)蛋白水平;CCK-8检测细胞增殖情况;茜素红染色鉴定细胞矿化能力。结果BMSCs细胞表型鉴定结果显示,细胞表面CD71、CD44表达,CD34、人类白细胞抗原DR等位基因不表达;成骨分化鉴定显示BMSCs出现矿化结节,结节呈红色散落分布;成脂分化鉴定显示BMSCs中脂滴呈橙红色,脂滴沉着细胞,且数量较多,部分细胞内脂滴融合变大成泡状,细胞核位于中央或挤向外周,提示BMSCs提取成功。miR-133a与RUNX2靶向关系存在特异性结合位点。与对照组比较,SONFH组BMSCs中miR-133a水平升高(P<0.05);RUNX2 mRNA和蛋白水平,24、48、72 h时BMSCs的吸光度值,BMSCs矿化结节相对数量,BMP2、BGP、COL-Ⅰ蛋白水平均显著降低(均P<0.05)。与SONFH组、inhibitor con组比较,miR-133a inhibitor组BMSCs中miR-133a水平降低(P<0.05);RUNX2 mRNA和蛋白水平,24、48、72 h时BMSCs的吸光度值,BMSCs矿化结节相对数量,BMP2、BGP、COL-Ⅰ蛋白水平均显著升高(均P<0.05)。与miR-133a inhibitor组比较,miR-133a inhibitor+si-RUNX2组BMSCs中miR-133a水平升高(P<0.05),RUNX2 mRNA和蛋白水平,24、48、72 h BMSCs的吸光度值,BMSCs矿化结节相对数量,BMP2、BGP、COL-Ⅰ蛋白水平均显著降低(均P<0.05)。结论miR-133a在SONFH患者BMSCs中高表达,抑制miR-133a表达可靶向促进RUNX2的表达,从而促进BMSCs成骨分化和细胞增殖。

食管癌的病因及miR133b-206在食管癌中的研究进展

食管癌是人体较为常见的消化道恶性肿瘤,根据全球癌症统计学数据,食管癌在各国之间的发生率存在显著差异,其中中国、伊朗和非洲东部、南美洲发病率较高,然而,我国临床数据显示食管癌的发病率明显降低,这与食管癌早期临床症状并不显著有关,导致临床的诊断率较低,无法及时进行有效的治疗措施,因此临床应加强相关领域的研究和预防措施,降低食管癌的发病率和提升患者的生存率。微RNA-133b-206(miR133b-206)是一种潜在的生物标志物,可以通过检测组织样本或者体液中的miR133b-206水平,反映食管癌的临床病理特征、预后、及患者的生存率,临床用于诊断和鉴别早期食管癌具有一定价值。基于此,本文就食管癌的病因及miR133b-206在食管癌中研究进展进行综述。

miR-133调控FGFR1蛋白对喉癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨miR-133对喉癌细胞迁移和侵袭的影响及其相关作用机制。方法选取2017年1月—2018年1月收治20例喉癌患者的喉癌组织及癌旁正常组织,并应用miR-133 mimics和miR-133 inhibitor对Hep-2和TU212细胞进行转染分组。PCR检测miR-133在喉癌组织和癌旁正常组织的表达差异;划痕实验检测miR-133对喉癌细胞迁移的影响; Transwell实验检测miR-133对喉癌细胞侵袭的影响;双荧光素酶报告验证miR-133与成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)的靶向关系; Western blotting验证miR-133对FGFR1蛋白的影响。结果与癌旁正常组织比较,喉癌组织中miR-133呈显著低表达状态(P <0. 05)。与Hep-2 NC组和TU212 NC组比较,Hep-2 mimics组和TU212 mimics组细胞的迁移率和侵袭率显著降低(P <0. 05)。野生型和突变型FGFR1基因的荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P <0. 05)。Hep-2 mimics组、Hep-2 inhibitor组和Hep-2 NC组的FGFR1蛋白表达比较差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-133能通过靶向调控FGFR1蛋白的表达而影响喉癌细胞迁移和侵袭能力。

miR-133a和miR-539在骨肉瘤组织中的表达及其与临床病理特征和预后的相关性分析

目的分析微RNA-133a(miR-133a)和微RNA-539(miR-539)在骨肉瘤组织中的表达情况,并探讨miR-133a和miR-539在骨肉瘤组织中的临床病理特征及与预后的相关性。方法收集2011年6月—2013年6月手术切除的骨肉瘤组织标本45例和瘤旁正常组织标本45例,分析患者临床资料、骨肉瘤组织中miR-133a和miR-539的表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果骨肉瘤组织中miR-133a和miR-539水平低表达率高于瘤旁正常组织(P <0. 05)。临床分期Ⅲ～Ⅳ期、中+低分化、T3～T4期及miR-133a、miR-539水平低表达均为影响骨肉瘤患者预后的独立危险因素(P <0. 05)。结论 miR-133a、miR-539水平在骨肉瘤组织中以低水平表达,其与临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、中+低分化、T分期为T3～T4期共同为影响骨肉瘤患者预后的独立危险因素。

miRNA-133b在胃癌组织中的表达及其对MMP-9的影响

目的探讨微小RNA-133b(miRNA-133b)在胃癌组织中的表达情况及其对基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。方法选取2015年12月至2018年1月于该院胃肠外科住院行胃癌根治手术的患者78例,留取胃癌组织及癌旁组织(距肿瘤边界6 cm以上),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miRNA-133b与MMP-9 mRNA在两组标本中的表达水平,免疫组织化学(IHC)方法检测MMP-9在两组标本中的蛋白表达,应用Spearman相关性分析法对miRNA-133b和MMP-9 mRNA的表达量进行相关性分析,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析胃癌组织中miRNA-133b表达水平对胃癌诊断的价值。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中miRNA-133b的相对表达量明显下调,MMP-9 mRNA及蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(1.01±0.30 vs.0.45±0.19,1.06±0.44 vs.2.03±0.55,20.51%vs.65.38%,P<0.05);且胃癌组织中miRNA-133b表达水平与MMP-9 mRNA表达量呈明显负相关性(r=-0.667,P<0.05)。胃癌组织中miRNA-133b表达水平预测胃癌的ROC曲线下面积为0.942(95%CI:0.909~0.974,P<0.05),最优截断点为0.78,预测胃癌的灵敏度和特异度分别为91.02%和80.77%。结论胃癌组织中miRNA-133b表达降低可能通过靶向上调MMP-9的表达,促进胃癌细胞的浸润和转移,从而在胃癌发生、发展中起作用,且miRNA-133b表达水平对胃癌的诊断有重要价值。

启膈散对人食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及miR-133a/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:观察启膈散对EC9706细胞增殖、凋亡的影响和对微RNA-133a(miR-133a)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法:采用乙酸乙酯法提取启膈散有效部位;噻唑蓝(MTT)比色法筛选启膈散细胞用药剂量及检测启膈散对EC9706细胞增殖的影响;流式细胞仪检测启膈散对EC9706细胞凋亡的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测启膈散对miR-133a及胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测启膈散对miR-133a/Akt/mTOR通路靶蛋白Akt,mTOR的表达。结果:与空白组比较,启膈散可抑制EC9706细胞的增殖(P<0.01),并呈剂量依赖性,筛选30%抑制浓度(IC30)40 mg·L^(-1)和半抑制浓度(IC50)80 mg·L^(-1)进行后续实验;与空白组比较,抑制剂组、抑制剂+启膈散组均可抑制EC9706细胞增殖(P<0.01),筛选抑制剂0.25μmol·L^(-1)进行后续实验;与空白组比较,启膈散80 mg·L^(-1)组可明显促进EC9706细胞晚期凋亡率及总凋亡率(P<0.05),启膈散40 mg·L^(-1)组可促进EC9706细胞晚期凋亡率(P<0.05),与Akt/mTOR抑制剂联合用药后,可协同增效。与空白组比较,各组均能提高miR-133a表达(P<0.05),其中抑制剂与中药抑制剂+启膈散组促进作用明显。与空白组比较,各组均能够均可明显降低Akt,mTOR蛋白表达(P<0.05),与单独用药比较,抑制剂与中药联合应用组Akt,mTOR的蛋白表达有所降低。结论:启膈散能够抑制食管癌EC9706细胞的生长,促进EC9706细胞的凋亡,其抑制机制可能与调控miR-133a的表达,影响其下游Akt/mTOR信号通路有关。