微RNA-200家族对程序性死亡配体1的调控及其在非小细胞肺癌中的临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)免疫检查点分子程序性死亡配体1(PD-L1)的表达及其与miRNA-200家族之间的调控关系,阐明PD-L1在NSCLC中的临床意义及调控机制。方法选取138例NSCLC患者癌组织及配对的癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色检测PD-L1表达,qRT-PCR检测miRNA-200家族(miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c、miRNA-429、miRNA-141)的表达水平。培养肺癌A549细胞,通过转染miRNA-200家族5个miRNA模拟物使其过表达,采用蛋白质印迹法检测miRNA-200家族过表达对PD-L1表达的影响,CCK-8实验检测miRNA-200家族过表达对A549细胞增殖活性的影响,荧光素酶报告基因实验验证miRNA-200家族对PD-L1的调控作用。结果138例NSCLC患者癌组织PD-L1总阳性率为58.7%(81/138),高于癌旁组织(3.6%,5/138),差异有统计学意义(P<0.05);PD-L1表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型无关,而与淋巴结转移、脉管侵犯、临床TNM分期有关(P均<0.05)。NSCLC癌组织中miRNA-200家族表达水平均低于癌旁组织(P均<0.01),且PD-L1表达阳性的患者具有更低水平的miRNA-200家族表达水平(P均<0.01)。A549细胞过表达miRNA-200家族能下调PD-L1的表达(P均<0.01),且抑制癌细胞增殖活性(P均<0.01)。荧光素酶报告基因实验证实miRNA-200家族直接负调控PD-L1的表达(P均<0.01)。结论PD-L1高表达预示NSCLC患者预后不良。PD-L1是miRNA-200家族的靶基因,miRNA-200家族表达水平低可能是NSCLC患者高表达PD-L1的重要原因。

膀胱癌组织微RNA-212、微RNA-137、微RNA-200表达与临床病理特征的相关性及预测经尿道膀胱肿瘤切除术后复发的效能研究

目的 探讨膀胱癌组织微RNA-212(miRNA-212)、微RNA-137(miRNA-137)、微RNA-200(miRNA-200)表达与临床病理特征的相关性及预测经尿道膀胱肿瘤切除(TURBT)术后复发的效能。方法 选取2017年6月至2021年6月河北燕达医院100例膀胱癌病人,比较癌组织和癌旁组织及不同病理特征病人miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达,并根据术后复发情况分为复发组、未复发组。比较两组miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200预测复发的价值,比较不同miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达水平病人复发率。结果 癌组织miRNA-212为2.03±0.56低于癌旁组织4.52±1.18(P<0.05),癌组织miRNA-137、miRNA-200表达分别为2.69±0.45、24.56±7.39,高于癌旁组织的1.28±0.30、7.33±2.21(P<0.05);随着组织学分级、TNM分期递增,miRNA-212表达逐渐降低,miRNA-137、miRNA-200表达逐渐升高(P<0.05);肌层浸润性膀胱癌病人miRNA-212低于非肌层浸润性膀胱癌,miRNA-137、miRNA-200高于非肌层浸润性膀胱癌(P<0.05);复发组miRNA-212(1.73±0.39)低于未复发组(2.28±0.44)(P<0.05),复发组miRNA-137、miRNA-200分别为3.06±0.72、37.96±12.18,高于未复发组2.35±0.40、22.86±7.50(P<0.05);miRNA-212高水平病人复发率低于低水平病人,miRNA-137、miRNA-200高水平病人复发率高于低水平病人(P<0.05)。结论 膀胱癌组织miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达与临床病理特征相关,联合检测对TURBT后复发具有良好的预测能力,可作为预测术后复发的一种方案。

肝硬化96例血清中微RNA-454和Wnt10a的表达及其临床意义

目的探究肝硬化病人血清中微RNA(microRNA,miR)-454和无翅型小鼠乳腺肿瘤病毒整合位点家族成员10a(Wnt10a)的表达及其临床意义。方法以2018年2月至2020年12月入住武汉科技大学附属汉阳医院的96例肝硬化病人为肝硬化组,并根据Child-Pugh分级分为A级36例、B级31例、C级29例。另选60例健康体检者为对照组。抽取空腹外周血检测天冬氨酸转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、丙氨酸转氨酶(ALT)等肝功能指标,qRT-PCR法检测血清中miR-454和Wnt10a表达水平,并分析miR-454、Wnt10a与Child-Pugh分级评分及AST、ALT、ALB等肝功能指标的关系;受试者操作特征(ROC)曲线分析miR-454、Wnt10a对严重肝硬化的诊断效能。结果肝硬化组miR-454表达水平0.85±0.20)显著低于对照组1.46±0.29,Wnt10a表达水平1.67±0.31显著高于对照组0.94±0.23(P<0.05);肝硬化组GGT、CLO、AST、ALP、ALT、TBil水平明显高于对照组,而ALB水平低于对照组(P<0.05);Child-Pugh A级、B级、C级中miR-454表达水平依次降低(P<0.05);Wnt10a在Child-Pugh A级、B级、C级中表达水平逐渐增加(P<0.05);血清miR-454与Wnt10a表达水平呈负相关(r=-0.53,P<0.001);血清miR-454表达水平与ALB呈正相关(r>0,P<0.05),与GLO、TBil、AST、GGT、Child-Pugh分级、ALT、ALP呈负相关(r<0,P<0.05);血清Wnt10a表达水平与ALB呈负相关(r<0,P<0.05),与GLO、TBil、AST、GGT、Child-Pugh分级、ALT、ALP呈正相关(r>0,P<0.05);miR-454、Wnt10a诊断严重性肝硬化的曲线下面积分别为0.80[95%CI:(0.71,0.88)]、0.73[95%CI:(0.621,0.837)];miR-454与Wnt10a联合诊断的曲线下面积为0.84[95%CI:(0.75,0.93)]。结论肝硬化病人血清中miR-454下调表达,Wnt10a上调表达,miR-454和Wnt10a呈负相关性,二者均与肝功能损伤有关,有作为诊断肝硬化严重程度的潜能。

微RNA-196a-1-3p靶向Ras响应元件结合蛋白调控胆管癌细胞增殖的机制研究

目的探讨转化生长因子β(TGF-β)调控人胆管癌细胞系RBE细胞增殖的关键微RNA(miRNA)及其潜在的机制。方法该研究起止时间为2020年1月至2022年1月。磷酸盐缓冲液(PBS)处理为对照组,TGF-β处理为TGF-β组,TGF-β抗体处理为抗体组。检测三组RBE细胞的增殖水平。miRNA高通量测序检测三组RBE细胞的miRNA调控变化,并进行miRNA模拟物过表达筛选鉴定受TGF-β调控的影响RBE细胞增殖水平的关键miRNA。miRNA数据库(miRDB)在线分析miRNA的潜在底物,并通过小干扰RNA(siRNA)敲低筛选鉴定影响RBE细胞增殖水平的关键底物。结果相比于对照组,TGF-β组RBE细胞的增殖水平上升(1.62±0.07比2.35±0.09,P<0.05),抗体组RBE细胞的增殖水平下降(1.62±0.07比1.11±0.08,P<0.05)。过表达微RNA-196a-1-3p(miR-196a-1-3p)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。敲低Ras响应元件结合蛋白(RREB1)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。过表达miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1的信使RNA(mRNA)和蛋白水平下降(P<0.05)。敲低miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1与SMAD家族蛋白3(SMAD3)的相互作用增加。敲低SMAD3后,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。与仅敲低SMAD3相比,敲低SMAD3的同时过表达RREB1的RBE细胞的增殖水平无显著变化,并且同时敲低SMAD3和miR-196a-1-3p的RBE细胞的增殖水平无显著变化。结论TGF-β能够通过miR-196a-1-3p/RREB1/SMAD3轴促进RBE细胞增殖;miR-196a-1-3p和RREB1可作为潜在的治疗胆管癌的靶标,为针对该靶标的新药研发奠定了基础。

微小RNA-200家族在三阴性乳腺癌发生发展中的作用

乳腺癌(BC)是女性人群在临床上最常诊断的癌症疾病,其特征主要体现在高发病率及高死亡率,并时刻威胁着我国女性的健康〔1,2〕。据统计,在欠发达国家BC的发病率较高,相比较发达国家则相对较低〔3〕。

miRNA-200家族对卵巢癌预后评估价值的Meta分析

目的探讨miRNA-200家族对卵巢癌患者预后评估的价值。方法全面检索PubMed、Embase、Web of science数据库,检索时限为建库至2019年7月。检索词包括:miR/miRNA-200 family、miR/miRNA-141、miR/miRNA-200a、miR/miRNA-200b、miR/miRNA-200c、miR/miRNA-429、ovarian cancer、prognosis、prognostic、mortality、outcome、survival。语种限定为英语。辅以文献溯源、手工检索等方法搜索相关文献。对纳入的文献进行质量评价和资料提取,对符合质量标准的文献采用Stata15.0统计软件进行Meta分析。结果本研究共纳入11篇文献,Meta分析miR-200与卵巢癌患者的总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)的合并HR分别为0.66(95%CI:0.51~0.81)和0.62(95%CI:0.53~0.71)。分层研究分析提示miR-200a与卵巢癌患者OS合并HR为0.50(95%CI:0.02~0.98);而miR-200a、miR-200b、miR-200c和miR-141与PFS合并HR分别为0.71(95%CI:0.55~0.87)、1.70(95%CI:1.00~2.41)、0.32(95%CI:0.15~0.49)和0.61(95%CI:0.41~0.81)。结论miR-200家族或是卵巢癌患者可靠的临床预后评估生物标志物。

LncRNA FEZF1-AS1靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞生物学行为的影响

目的探讨FEZ家族锌指1-反义RNA1(LncRNA FEZF1-AS1)靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞HLF生物学行为的影响。方法采用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLF向肌成纤维细胞转化,分为空白对照组(Blank组)和造模组(HLF+TGF-β1组),另根据转染质粒不同将细胞分为Blank组、TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组和TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组。采用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p的表达。采用CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力;采用双萤光素酶实验检测FEZF1-AS1与miR-200c-3p的靶向作用关系。结果与Blank组比较,HLF+TGF-β1组α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达及LncRNA FEZF1-AS1表达水平升高,miR-200c-3p表达水平降低(P<0.05);与TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,LncRNA FEZF1-AS1表达及α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达水平降低,miR-200c-3p表达水平升高(P<0.05);FEZF1-AS1与miR-200c-3p基因序列上存在结合位点。结论LncRNA FEZF1-AS1通过抑制miR-200c-3p促进特发性肺间质纤维化的发生、发展。

结直肠癌患者血清miR-150-5p和miR-200b-3p水平及临床意义

目的结直肠癌患者血清微小RNA(miR)-150-5p和miR-200b-3p水平及临床意义。方法回顾性选择2020年6月至2022年11月在沧州市人民医院就诊的结直肠癌患者116例为结直肠癌组,同时选取同期在本院治疗的结肠息肉患者60例作为结直肠良性肿瘤组,选择同期在本院行健康体检者60名为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测受试者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平;采用Pearson相关性分析对结直肠癌患者血清miR-150-5p与miR-200b-3p表达水平的相关性进行分析;分析结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平与病理特征的关系;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-150-5p、miR-200b-3p表达水平对结直肠癌的诊断价值。结果结直肠癌组、结直肠良性肿瘤组血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平均显著低于对照组,且结直肠癌组血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平均显著低于结直肠良性肿瘤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌患者血清miR-150-5p与miR-200b-3p表达水平呈正相关(r=0.562,P<0.05)。结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平与分化程度、淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关(P<0.05),其中低分化、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、浸润深度T 3~T 4的结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平显著低于中高分化、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度T_(1)~T_(2)的患者(P<0.05)。血清miR-150-5p、miR-200b-3p单独及联合诊断结直肠癌的曲线下面积(AUC)分别为0.800、0.828、0.893,联合诊断AUC显著高于单独预测AUC(P<0.05)。结论结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平降低,二者可作为诊断结直肠癌发生的辅助指标。

LncRNA MALAT1调控miR-200b-3p/HK2对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及糖酵解的影响

目的:长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)参与多种癌症进展,但lncRNAs肺腺癌转移相关转录子1(metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的生物学作用尚不清楚。本研究探讨lncRNA MALAT1调控微RNA(microRNA,miR)-200b-3p/己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)对NPC细胞增殖、侵袭、迁移及糖酵解的影响。方法:将NPC细胞系CNE-2分为对照组、小干扰(si)-阴性对照(negative control,NC)组、si-MALAT1组、si-MALAT1+抑制剂(inhibitor)-NC组、si-MALAT1+miR-200b-3p inhibitor组,real-time PCR检测各组细胞MALAT1、miR-200b-3p表达;细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)、流式细胞术、蛋白质印迹法和分光光度法分别检测细胞增殖、凋亡、HK2蛋白表达及糖代谢水平;双荧光素酶实验验证MALAT1、miR-200b-3p和HK2的关系。结果:与对照组、si-NC组比较,si-MALAT1组CNE-2细胞中miR-200b-3p表达升高、MALAT1、HK2表达降低,细胞增殖能力降低,细胞凋亡升高,葡萄糖消耗、乳酸生成均降低(均P<0.05);与si-MALAT1组、si-MALAT1+inhibitor-NC组比较,si-MALAT1+miR-200b-3p inhibitor组miR-200b-3p表达降低,MALAT1、HK2表达升高,细胞增殖能力升高、细胞凋亡降低,葡萄糖消耗、乳酸生成均升高(均P<0.05)。MALAT1与miR-200b-3p、miR-200b-3p与HK2之间存在靶向调控关系。结论:沉默表达MALAT1可能通过上调miR-200b-3p来下调HK2表达,从而抑制CNE-2细胞增殖、迁移与侵袭及其糖酵解水平,其有望成为NPC治疗的潜在靶点。

紫杉醇联合miR-200b对胃腺癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响

目的体外观察紫杉醇联合应用miR-200b模拟物(miR-200b mimics)对抑制胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响。方法分别单独应用miR-200b转染细胞(200b组)及50nmol/L紫杉醇单独处理胃癌SGC-7901细胞(紫杉醇组),并联合应用上述两者(联合组),同时设转染无义序列组和对照组。通过流式细胞技术检测细胞的凋亡水平和周期分布情况,克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验观测细胞的侵袭迁移能力,Western-blot检测E2F3蛋白的表达水平。结果与单药组相比,联合组早期凋亡率显著升高;克隆形成率显著降低,穿过Transwell小室的细胞数目显著减少;划痕48h后的细胞迁移能力明显降低;E2F3蛋白在200b组及联合组中表达水平降低(均P<0.001)。联合组阻滞于G2/M期细胞的比例高于200b组、无义序列组及对照组,但和紫杉醇组比较差异无统计学意义。结论 miR-200b可能通过降低E2F3表达增强紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的抑制作用。

Notch-1和微小RNA-200家族在胰腺癌上皮-间充质转化中的作用

目的观察Noteh-1和微小RNA（miRNA，miR）-200家族在吉西他滨（Gem）诱导的人胰腺癌PANC-1细胞上皮-间充质转化（EMT）中的作用。方法体外培养PANC-1细胞并诱导细胞EMT，Western blot实验和反转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测Notch—1、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、相关转录因子及miR-200家族成员的表达；Transwell小室检测具有EMT改变的PANC-1细胞迁移和侵袭能力。结果Gem诱导PANC-1细胞EMT最适药物浓度为10nmol／L，最适时间为9d。Western blot灰度分析显示未经Gem处理的亲代细胞（parental）组Noteh-1、E—cadherin、Vimentin、slug、snail、twist、E盒结合锌指蛋白1（ZEBl）的表达分别为0．840±0．002、0．995±0．008、1．158±0．001、0．253±0．004、0．528±0．003、0．346±0．002，0．29l±0．006，Gem（＋）组分另0为1．599±0．00l、0．483±0．001、1．821±0．003、0．719±0．004、0．919±0．005、0．762±0．002、0．70l±0．004，两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR检测parental组Notch-1、E—cadherin、Vimentin、slug、snail、twist、ZEB1 mRNA的表达分别为（2．200±0．010）×10-3、（1．540±0．002）×10-4、1．003±0．004、（8．580±0．003）×10-4、（5．040±0．007）×10-3、（6．930±0．001）×10-5、（2．010±0．001）×10-4，Gem（＋）组分别为（5．870±0．004）×10-5、（1．430±0．001）×10-5、1．660±0．007、（4．030±0．002）×10-3、（8．980±0．005）×10-3、（3．300±0．020）×10-6、（1．120±0．003）×10-3，两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR法检测parental组miR-200a、miR-200b、miR-200e、miR-141和miR-429的表达水平分别为（2．340±0．002）×10-5、（4．280±0．001）×10-6、（3．250±0．003）×10-5、（2．470±0．004）×10-5、（6．230±0．005）×10-4，Cem（＋）组分别为（0．801±0．000）×10-5、（2．030±0．004）×10-6、（5．000±0．050）×10-6、（3．670±0．003）×10-6、（1．310±0．002）×10-4，两组问比较差异有统计学意义（P〈0．05）。PANC-1细胞EMT改变后侵袭能力明显增强，parental组迁移和侵袭实验细胞计数分别为（25．70±3．67）个和（16．30±2．21）个，Gem（＋）组分别为（77．40±3．01）个和（68．00±8．76）个，两组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Gem可诱导PANC-1细胞EMT，Noteh-1可能是该过程的重要信号通路，并参与miR-200家族的调控。

甲基化调节miR-200b的表达及其对胃癌MGC-803细胞增殖侵袭能力的影响

目的体外研究基因mi R-200b发生甲基化的不同程度及其表达量的差异对胃癌细胞MGC-803增殖、侵袭、凋亡及对上皮间质转化的影响。方法以正常胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞MGC-803为研究对象,提取细胞总RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR检测2种细胞系中mi R-200b的表达量;亚硫酸氢钠修饰PCR(BSP)法检测mi R-200b启动子区甲基化水平。用不同浓度5-氮杂胞苷(5′-Aza-Cd R)药物处理MGC-803细胞72 h后,同法检测mi R-200b的表达量及启动子区甲基化水平变化。根据上述实验结果选择合适的药物作用浓度和时间即(10μmol/L,72 h)作为处理组。通过Transwell侵袭实验观测细胞侵袭能力;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡的分布情况;Western-blot检测上皮间质转化(EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin、ZEB1、Slug、基质金属蛋白酶(MMP)9等的表达水平。结果 mi R-200b在GES-1中表达量较MGC-803高(P=0.022)。启动子区甲基化水平则与之相反(P=0.034)。药物不同浓度作用后的MGC-803细胞系mi R-200b表达量有随浓度升高而升高的趋势,作用浓度为10μmol/L时mi R-200b启动子区甲基化水平较对照组低(P=0.043)。与对照组相比,处理组细胞晚期凋亡数增多;G0/G1期细胞数显著增多,S期显著减少;穿过Transwell小室细胞数显著减少;Western-blot实验表明E-cad-herin表达量升高,N-cadherin、ZEB1、Slug、MMP9表达量降低。结论 mi R-200b启动子区甲基化程度的不同可以影响其表达量,而mi R-200b表达量的异常又与胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭能力密切相关。

微RNA-200b-3p/SOX2基因信号轴调控非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的体外研究

目的研究微RNA(miR)-200b-3p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法以人正常支气管上皮细胞HBE为对照,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌细胞H1299、A549和PC14中SOX2 mRNA和miR-200b-3p的表达,免疫印迹检测A549细胞中那个SOX2、Cyclin D1、p21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-200b-3p与SOX2的调控关系。结果与对照组相比,在肺癌细胞H1299、A549和PC14中SOX2的mRNA和蛋白表达量均显著升高(P<0.05),miR-200b-3p表达量均显著下调(P<0.05);过表达miR-200b-3p可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;miR-200b-3p靶向负调控SOX2的表达;沉默SOX2可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭;过表达SOX2逆转了过表达miR-200b-3p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论在体外miR-200b-3p/SOX2信号轴可调控非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-200b-3p是非小细胞肺癌的潜在分子靶点。

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中微RNA-223及核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族蛋白3炎性小体的表达及临床意义

目的检测SLE患者PBMCs中微RNA-223(miR-223)及核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性小体组分[NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶(caspase)-1]mRNA表达水平,探讨其在SLE发病中的作用及临床意义。方法实时荧光定量PCR技术检测35例初诊SLE患者、30名健康对照及20例治疗后SLE患者PBMCs中miR-223及NLRP3炎性小体组分mRNA表达量,采用χ2和t检验进行统计学分析;采用Pearson检验分析SLE患者miR-223及NLRP3炎性小体组分mRNA表达水平与抗dsDNA抗体、抗核小体抗体(AnuA)、ESR、SLEDAI的相关性。结果SLE患者PBMCs中miR-223、caspase-1mRNA表达水平高于健康对照[(1.17±0.15)和(0.68±0.14),t=2.416,P=0.0186;(1.89±0.13)和(1.32±0.13),t=3.123,P=0.0027],NLRP3、ASCmRNA表达水平低于健康对照[(0.64±0.05)和(0.98±0.06),t=4.442,P<0.01;(0.98±0.08)和(1.32±0.12),t=2.391,P=0.0198];相关分析显示SLE患者PBMCs中miR-223mRNA表达水平与NLRP3mRNA表达水平呈负相关(r=-0.7849,P<0.05),而与ASC、caspase-1mRNA表达水平无相关性;SLE患者PBMCs中miR-223mRNA表达水平与抗dsDNA抗体、ESR、SLEDA呈正相关(r=0.7035、0.6923、0.6873,P均<0.05),与AnuA无相关性;给予药物治疗后,SLE患者PBMCs中miR-223、caspase-1mRNA表达水平明显降低[(1.30±0.22)和(0.79±0.11),t=2.07,P=0.0453;(2.05±0.19)和(1.50±0.11),t=2.471,P=0.0183],NLRP3mRNA表达水平明显升高[(0.69±0.08)和(0.94±0.07),t=2.445,P=0.0193];在LN患者与SLE无肾损害患者PBMCs中miR-223mRNA表达水平差异无统计学意义。结论miR-223、caspase-1在SLE患者PBMCs中呈高表达,NLRP3、ASC在SLE患者PBMCs中呈低表达,miR-223mRNA表达水平与NLRP3mRNA表达水平呈负相关,且SLE患者PBMCs中miR-223mRNA的表达水平与疾病活动呈正相关,治疗后miR-223mRNA表达水平明显下降,提示miR-223可能在SLE发病中扮演重要角色。

MiR-200家族与消化道肿瘤的相关研究

消化道肿瘤是人类最常见的肿瘤之一,尽管诊疗措施不断改善,但其预后远不尽如人意。因此,探究消化道肿瘤的发生机制,寻找新的诊断方法及治疗措施具有重要意义。微小RNA(mi RNA)是一种广泛存在于真核生物细胞中的非编码单链小分子RNA,长约22个核苷酸分子,参与一系列生命活动,包括细胞增殖及凋亡、器官形成、造血过程、发育进程等,具有广泛的基因调节功能。自被发现以来,微小RNA逐渐受到学者们的关注。研究发现mi RNA在多种肿瘤中存在异常表达,与包括肿瘤在内的一系列疾病的发生、发展以及转归预后过程密切相关,发挥癌基因或者抑癌基因的作用。其中mi R-200家族与消化道肿瘤的关系是近年研究的热点,并且取得了一定的进展,研究发现mi R-200家族在不同的消化道肿瘤中的表达情况也不一致,但均与上皮间质转化进程及Wnt/β-catenin通路密切相关。现将mi R-200家族与消化道肿瘤的关系综述如下。

miR-200a与肝癌发生发展关系的研究进展

微RNA(miR)-200a为miR-200家族的主要成员之一,其在肝癌中低表达,在肝癌的发生、发展中发挥关键作用;同时,其在肝癌的早期诊断、预后判断等方面的临床应用价值也得到了证实。目前对miR-200a与肝癌关系的研究取得了一定进展,但对其生物学功能的相关研究仍不足,其相应的调控机制同样需要深入研究。该文就miR-200a在肝癌中的生物学功能相关研究进展作一综述,以期为进一步探索肝癌诊断和治疗新途径提供依据。

血清miR-24-3p、H2AFX与肝癌患者临床病理特征及术后复发的关系研究

目的探讨血清微RNA(miR)-24-3p、H2A组蛋白家族成员X(H2AFX)与肝癌患者临床病理特征及术后复发的关系。方法选取2018年3月至2022年3月南通大学附属肿瘤医院收治的108例肝癌初诊患者为研究对象(肝癌组), 另选取同期于本院就诊的86例肝脏良性病变患者作为良性病变组, 行体检的64例健康者为对照组。采用荧光定量PCR法检测并分析各组受试者血清miR-24-3p、H2AFX水平, 对复发和未复发肝癌患者血清miR-24-3p、H2AFX水平进行比较, 对不同血清miR-24-3p、H2AFX水平肝癌患者临床病理特征进行比较, logistic回归分析肝癌患者术后复发的影响因素。结果至随访结束, 108例肝癌患者46例复发。对照组、良性病变组、肝癌组血清miR-24-3p水平分别为1.01±0.23、0.79±0.21、0.55±0.13, 差异有统计学意义(F=125.86, P<0.001), 良性病变组、肝癌组患者血清miR-24-3p水平均低于对照组(均P<0.05), 肝癌组患者血清miR-24-3p水平低于良性病变组(P<0.05);3组血清H2AFX水平分别为1.02±0.25、1.27±0.31、1.59±0.37, 差异有统计学意义(F=65.40, P<0.001), 良性病变组、肝癌组患者血清H2AFX水平均高于对照组(均P<0.05), 肝癌组患者血清H2AFX水平高于良性病变组(P<0.05)。miR-24-3p、H2AFX高水平与低水平肝癌患者TNM分期(χ^(2)=7.85, P=0.005;χ^(2)=6.32, P=0.012)、分化程度(χ^(2)=11.59, P=0.001;χ^(2)=9.92, P=0.002)差异均有统计学意义。与未复发肝癌患者相比, 复发患者血清miR-24-3p水平明显降低(0.44±0.12比0.64±0.14), H2AFX水平明显升高(1.87±0.42比1.38±0.33), 差异均有统计学意义(t=7.79, P<0.001;t=6.79, P<0.001)。单因素分析显示, TNM分期(OR=1.57, 95%CI为1.05~2.35, P=0.029)、分化程度(OR=2.20, 95%CI为1.20~4.02, P=0.011)、miR-24-3p水平(OR=0.66, 95%CI为0.45~0.95, P=0.026)、H2AFX水平(OR=1.73, 95%CI为1.14~2.60, P=0.009)均是肝癌患者术后复发的影响因素;多因素分析显示, TNM分期(OR=2.10, 95%CI为1.14~3.86, P=0.017)、分化程度(OR=1.58, 95%CI为1.12~2.23, P=0.009)、miR-24-3p水平(OR=0.76, 95%CI为0.63~0.92, P=0.005)、H2AFX水平(OR=1.90, 95%CI为1.20~2.99, P=0.006)均是肝癌患者术后复发的独立影响因素。结论不同血清miR-24-3p、H2AFX水平的肝癌患者肿瘤TNM分期、分化程度差异均有统计学意义, 血清miR-24-3p、H2AFX水平是肝癌患者术后复发的影响因素。

miR-200c在CIK细胞诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对胃癌细胞凋亡的影响,探讨微RNA-200c(miR-200c)在此过程中的作用。方法实时荧光定量RT-PCR检测胃癌细胞(MKN-45、BGC-803)miR-200c表达,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡。构建包含miR-200c作用位点的psiCHECK2-FAP-1 3’-UTR,转染胃癌细胞,双荧光素酶报告基因试剂盒检测胃癌细胞Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)荧光素酶活性。结果 CIK细胞促进MKN-45细胞miR-200c表达[(2.10±0.25)倍,P<0.05]及凋亡(P<0.01),而miR-200c inhibitor能够拮抗此过程(P<0.05)。另外,miR-200c mimics诱导胃癌细胞凋亡(P<0.05),BGC-803细胞也发现相似趋势。miR-200c直接作用于FAP-1基因3’-UTR区,且CIK细胞降低胃癌细胞荧光素酶活性[MKN-45细胞:(49.67±2.36)%,P<0.01;BGC-803细胞:(43.86±4.41)%,P<0.01]。结论 CIK细胞通过上调miR-200c促进胃癌细胞凋亡,为CIK细胞治疗胃癌提供新的数据。