微RNA-205与人食管癌放射治疗抵抗细胞株Eca-109R放射抗性的相关性

目的探讨人食管癌放射治疗抵抗细胞株Eca-109R中微RNA(miR)-205的表达水平与放射抗性的相关性。方法取人食管鳞状细胞癌细胞株Eca-109,采用多次逐渐递增剂量的射线照射建立人食管癌放射治疗抵抗细胞株Eca-109R;另取Eca-109细胞,待细胞培养至融合度达到50%~70%时将miR-205 mimics转染入Eca-109细胞,形成Eca-109 miR-205过表达细胞。根据照射剂量将Eca-109细胞、Eca-109R细胞和Eca-109 miR-205过表达细胞分别分为0 Gy组、2 Gy组、4 Gy组、6 Gy组、8 Gy组、10 Gy组。用倒置显微镜观察Eca-109和Eca-109R细胞的形态,细胞计数试剂盒-8实验检测Eca-109细胞、Eca-109R细胞和Eca-109 miR-205过表达细胞的存活率;细胞克隆形成实验检测Eca-109细胞、Eca-109R细胞和Eca-109 miR-205过表达细胞的增殖情况;反转录聚合酶链式反应检测Eca-109细胞、Eca-109R细胞和Eca-109 miR-205过表达细胞中miR-205的表达水平。结果Eca-109细胞形态均一,大小一致,大多呈片状或梭状,折光性良好;Eca-109R细胞可见少量多角形细胞,伴有颗粒感,折光性差。在0 Gy组,Eca-109R细胞、Eca-109 miR-205过表达细胞与Eca-109细胞的存活率和细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。在2、4、6 Gy组,Eca-109R细胞、Eca-109 miR-205过表达细胞的存活率和细胞增殖能力显著高于Eca-109细胞(P<0.05)。在8 Gy组,Eca-109R细胞的存活率和细胞增殖能力显著高于Eca-109细胞(P<0.05);Eca-109 miR-205过表达细胞与Eca-109细胞的存活率和细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。在10 Gy组,Eca-109R细胞、Eca-109 miR-205过表达细胞与Eca-109细胞的存活率和细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。在0 Gy组,Eca-109R细胞、Eca-109 miR-205过表达细胞中miR-205的相对表达量显著高于Eca-109细胞(P<0.05)。在4 Gy组,Eca-109R细胞中miR-205的相对表达量显著高于Eca-109细胞(P<0.05)。4 Gy组的Eca-109细胞中miR-205的相对表达量显著高于0 Gy组中Eca-109细胞(P<0.05);4 Gy组的Eca-109R细胞中miR-205的相对表达量显著高于0 Gy组的Eca-109R细胞(P<0.05)。结论miR-205的表达与人食管癌放射治疗抵抗细胞株Eca-109R的放射抗性具有相关性,过表达miR-205可提高食管癌细胞的放射抗性。

微RNA-205对帕金森病大鼠脑额叶皮层纹状体多巴胺能神经元凋亡的影响

目的探讨微RNA-205(miR-205)通过胰岛素样生长因子-1(IGF-1)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框蛋白O3a(FoxO3a)通路对帕金森病(PD)大鼠脑额叶皮层纹状体多巴胺能神经元凋亡的调控作用。方法将30只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为干预组、阴性对照(NC)组、假手术组,每组10只。干预组、NC组大鼠经脑立体定位仪注射6-羟多巴胺建立PD模型,假手术组大鼠注射等体积的生理盐水。建模成功后24 h,干预组和NC组大鼠于纹状体内分别注射miR-205双链寡核苷酸抑制剂(miR-205-inhibitor)及miR-205阴性对照试剂(miR-205-inhibitor-NC)2μL,假手术组大鼠注射等量的磷酸缓冲盐溶液。观察干预1周后大鼠一般情况,比较各组大鼠异常不自主动作(AIM)评分;脱氧核糖核苷末端转移酶介导的缺口末端标记法检测各组大鼠纹状体神经元凋亡情况;实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组大鼠纹状体中miR-205及IGF-1、Akt、FoxO3a mRNA表达;Western blot检测各组大鼠纹状体中IGF-1、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、FoxO3a、磷酸化FoxO3a(p-FoxO3a)蛋白表达。结果干预1周后,假手术组大鼠进食、饮水、活动正常;NC组大鼠进食、进水、活动减少,活动时动作缓慢或姿势异常,部分有易激惹、狂躁、自残行为;干预组大鼠上述症状轻于NC组。NC组、干预组大鼠AIM评分和神经元凋亡率均显著高于假手术组(P<0.001);干预组大鼠AIM评分和神经元凋亡率显著低于NC组(P<0.001)。NC组、干预组大鼠纹状体中miR-205 mRNA相对表达量显著高于假手术组(P<0.001),干预组大鼠纹状体中miR-205 mRNA相对表达量显著低于NC组;NC组、干预组大鼠纹状体中IGF-1 mRNA相对表达量显著低于假手术组(P<0.001),干预组大鼠纹状体中IGF-1 mRNA相对表达量显著高于NC组(P<0.001);3组大鼠纹状体中Akt、FoxO3a mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。NC组、干预组大鼠纹状体中IGF-1蛋白相对表达量及p-Akt/Akt、p-FoxO3a/FoxO3a显著低于假手术组(P<0.001);干预组大鼠纹状体中IGF-1蛋白相对表达量及p-Akt/Akt、p-FoxO3a/FoxO3a显著高于NC组(P<0.001)。结论通过抑制大鼠脑额叶皮层纹状体中miR-205表达可抑制多巴胺能神经元凋亡,改善PD症状,其机制可能与上调IGF-1表达及p-Akt、p-FoxO3a水平有关。

核仁小RNA宿主基因16和微RNA-205-5p在肝癌患者对奥沙利铂耐药中的作用及机制研究

目的探讨长链非编码(long non-coding,lnc)RNA核仁小RNA宿主基因16(small nucleolar RNA host gene 16,SNHG16)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖、凋亡及对奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)耐药的影响和作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应检测HepG2、HL7702细胞及肝癌耐药细胞(HepG2/OXA)中lncRNA SNHG16和微RNA(micro RNA,miR)-205-5p表达;MTT法、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡情况;在线数据库预测lncRNA SNHG16的靶基因,双荧光素酶报告试验验证两者结合关系;蛋白质印迹法检测多药耐药蛋白(multidrug resistance protein,MRP)1、细胞周期素D1和裂解的半胱氨酸蛋白酶3及Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果HepG2/OXA细胞中lncRNA SNHG16表达较HepG2和HL7702细胞显著升高(P<0.05)。OXA对HepG2/OXA细胞增殖活力的抑制作用随浓度的增加而增强。si-SNHG16组HepG2/OXA细胞耐药敏感性、细胞活力及MRP1,细胞周期素D1,磷酸化(phosphorylated,p)-mTOR,p-Akt蛋白表达较对照组均降低,半胱氨酸蛋白酶3蛋白表达及细胞凋亡率则显著升高(P<0.05)。MiR-205-5p是lncRNA SNHG16的靶基因。下调miR-205-5p可逆转干扰SNHG16对HepG2/OXA细胞耐药敏感性、增殖、凋亡及信号通路的抑制/促进作用。结论LncRNA SNHG16通过靶向调控miR-205-5p,激活Akt/mTOR通路,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,促使HCC细胞对OXA耐药。