孕早期血清半乳糖凝集素3、微RNA-29a对孕妇发生妊娠糖尿病风险的预测价值分析

目的分析孕早期血清半乳糖凝集素3(Gal-3)、微RNA(miR)-29a对孕妇发生妊娠糖尿病(GDM)风险的预测价值。方法选取2021年3月至2022年3月在东部战区总医院进行围生期检查的60例GDM病人作为GDM组,同期体检健康的孕妇60例作为对照组。抽取病人空腹静脉血,检测并比较两组间病人孕早期血清Gal-3(以酶联免疫吸附测定检测)、miR-29a(PCR法)表达水平。绘制受试者操作特征曲线(ROC曲线)评估孕早期血清Gal-3、miR-29a水平预测孕妇发生GDM风险的价值,行多因素logistic回归分析影响孕妇发生GDM的因素。结果GDM组血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、Gal-3[(40.31±4.12)μg/L比(35.79±3.58)μg/L]、糖化血红蛋白(HbA1c)、服糖后2 h血糖(2 hPG)、空腹血糖(FPG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平均明显高于对照组(P<0.05),空腹胰岛素(FINS)、miR-29a(26.78±2.72比30.46±3.09)水平明显低于对照组(P<0.05);绘制ROC曲线评估血清Gal-3、miR-29a水平预测GDM发生的价值显示,单独检测时,Gal-3的特异度86.67%最高,miR-29a的灵敏度90.00%最高,两者联合检测灵敏度、特异度均处于较高水平(95.00%、88.33%)。行多因素logistic回归分析显示,血清Gal-3、miR-29a、HOMA-IR、HbA1c为GDM发生的影响因素(P<0.05)。结论GDM病人孕早期血清Gal-3水平较高、miR-29a水平较低,可能为预测GDM发生的潜在指标,两者联合检测价值更高。

胸腔积液中微RNA-29a和腺苷脱氨酶联合检测对结核性胸膜炎的临床 诊断 效能

目的探讨胸腔积液中微RNA-29a(miR-29a)和腺苷脱氨酶(ADA)联合检测诊断结核性胸膜炎的临床效能。方法选择2018年1月至2019年6月新乡医学院第一附属医院收治的142例胸腔积液患者为研究对象,根据原发病分为结核性胸腔积液(TPE)组(n=63例)和恶性胸腔积液(MPE)组(n=79例),TPE患者给予抗结核治疗方案治疗后根据有无胸膜增厚分为预后良好组和预后不良组。采用酶速率法检测胸腔积液中ADA水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胸腔积液中miR-29a的相对表达量。比较TPE组和MPE组患者胸腔积液中miR-29a和ADA表达水平,应用Spearman分析2组患者胸腔积液中miR-29a相对表达量与ADA水平的相关性,应用受试者操作特征(ROC)曲线分析胸腔积液中miR-29a、ADA单独及联合诊断TPE的临床效能;比较预后良好组和预后不良组TPE患者治疗前胸腔积液中miR-29a表达水平,使用ROC曲线分析TPE患者治疗前胸腔积液中miR-29a和ADA表达水平对治疗后出现胸膜增厚的临床诊断效能。结果TPE组患者胸腔积液中miR-29a相对表达量和ADA表达水平均显著高于MPE组(P<0.05)。TPE组胸腔积液中miR-29a与ADA存在显著正相关性(r=0.314,P>0.05),MPE组患者胸腔积液中miR-29a与ADA无明显相关性(r=0.234,P>0.05)。miR-29a诊断TPE的曲线下面积(AUC)为0.903[95%置信区间(CI):0.853~0.954],当截断值为0.46时,敏感度和特异度分别为90.50%和79.70%;ADA诊断TPE的AUC为0.840(95%CI:0.767~0.913),当截断值为18.63 U·L^(-1)时,敏感度和特异度分别为84.10%和74.70%;miR-29a联合ADA诊断TPE的AUC为0.943,敏感度和特异度分别为94.90%和92.40%。预后不良组患者治疗前胸腔积液中miR-29a相对表达量显著高于预后良好组(P<0.05),预后不良组与预后良好组患者胸腔积液中ADA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前胸腔积液中miR-29a相对表达量诊断TPE患者治疗后出现胸膜增厚的AUC为0.832(95%CI:0.727~0.939),当截断值为0.615时,敏感度和特异度分别为73.50%和78.60%;治疗前胸腔积液中ADA表达水平诊断TPE患者治疗后出现胸膜增厚的AUC为0.614(95%CI:0.432~0.795),当截断值为22.59 U·L^(-1)时,敏感度和特异度分别为46.28%和52.56%。结论胸腔积液中miR-29a联合ADA检测对结核性胸膜炎具有显著的临床诊断效能,miR-29a可作为诊断结核性胸膜炎患者抗结核治疗后出现胸膜增厚的标志物。

微RNA-29在糖尿病周围神经病变中的研究进展

糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)是慢性高血糖引起微血管损伤的主要表现之一。迄今为止,关于DPN的发病机制尚不完全清楚。近几年,随着生物信息学和高通量测序技术的崛起,有研究报道miRNA-29可能参与了DPN的发病过程中的氧化应激、慢性炎症、胰岛素抵抗、血管内皮功能障碍等病理生理环节,但具体机制尚不明确。以下综述miRNA-29在DPN中的研究现状,以期为DPN的早期防治提供新的诊疗思路。

特发性肺纤维化患者血清微RNA-29b表达与肺动脉高压的关系

目的 观察特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)患者血清微RNA-29b(mirco RNA-29b,miR-29b)表达变化,并分析其与肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)的关系。方法 选取河北省胸科医院2018年3月至2021年5月收治的116例初诊IPF患者作为IPF组,同期招募112例健康志愿者作为健康对照组。两组均取外周血并采用实时荧光定量PCR检测血清miR-29b表达水平并进行比较。IPF组患者根据是否并发PH分为PH组(并发PH)和对照组(未并发PH),比较两组血清miR-29b表达水平,并采用logistic多元回归分析IPF患者发生PH的危险因素。结果 IPF组血清miR-29b表达水平低于健康对照组,差异有显著性(P<0.05);IPF组PH发生率为32.76%,且PH组血清miR-29b表达水平低于对照组(P<0.05)。Logistic多元回归分析显示,一氧化碳弥散量、血清miR-29b表达水平是IPF患者发生PH的危险因素(OR=5.248、5.551,P<0.05)。结论 IPF患者血清miR-29b表达水平下降,且发生PH的患者表达水平更低,一氧化碳弥散量、血清miR-29b表达水平均是IPF发生PH的危险因素。

微RNA-29家族降解PTEN mRNA促进非小细胞肺癌细胞存活与淋巴结侵袭

目的:探索微RNA(microRNA,miRNA/miR)-29家族对淋巴结侵袭性非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖、侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 :TCGA数据库分析磷酸酶和张力蛋白同源基因(phosphatase and tension homology deleted from chromosome 10, PTEN)mRNA在是否有淋巴结转移的NSCLC患者组织中的表达水平;蛋白质印迹检测非淋巴结转移NSCLC细胞A549以及淋巴结转移NSCLC细胞H1299中PTEN蛋白水平;生物信息学预测调节PTEN的miRNA,实时定量反转录PCR(quantitative reverse transcriptase-mediated PCR,qRT-PCR)检测miR-29家族在A549和H1299中的表达水平;生物信息学预测miR-29家族与PTEN mRNA 3’非翻译区(untranslated region,UTR)结合位点,且通过双荧光素酶报告基因系统验证;转染miR a/b/c类似物或者抑制子,蛋白质印迹检测细胞中PTEN蛋白表达水平;用CRISPR Cas9技术构建miR-29家族敲低的稳转细胞;蛋白质印迹检测磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)、Akt、磷酸化黏着斑激酶(phosphorylated focal adhesion kinase,p-FAK)、FAK表达水平,qRT-PCR检测存活蛋白mRNA表达水平以及蛋白质印迹检测存活蛋白;细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖及Transwell检测细胞侵袭的改变。结果:TCGA数据库分析PTEN m RNA的均值在无淋巴结转移NSCLC患者癌组织中表达高于有淋巴结转移的患者(7.916比7.242,P=0.026 8);PTEN蛋白在A549细胞表达水平高于H1299细胞(3.1倍);而在H1299细胞中miR-29家族分别是A549细胞的4、4.4和4.1倍(P<0.01);荧光素酶报告基因实验验证了miR-29家族可靶向结合PTEN mRNA 3’UTR区的位点。A549细胞转染miR a/b/c类似物36 h后,PTEN蛋白表达水平下降,H1299细胞转染miR a/b/c抑制子36 h后,PTEN蛋白表达分别恢复25%、21%和62%。与对照组相比,敲低miR-29家族后H1299细胞中p-Akt与p-FAK水平降低,存活蛋白m RNA水平下调35%以及蛋白表达水平也相应下调70%;敲低miR-29家族后H1299细胞增殖活性下降,同时细胞的侵袭能力降低75%。结论:NSCLC细胞中miR-29家族通过下调PTEN,致p-Akt、p-FAK信号通路异常活化,进而上调存活蛋白表达,促进NSCLC细胞增殖和淋巴结侵袭。

腺苷预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中微RNA-29b及凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2、磷酸化蛋白激酶B、人髓细胞白血病1表达的影响

目的观察腺苷预处理(AP)对大鼠脑缺血再灌注(IR)后脑组织中微RNA-29b(miR-29b)及凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、人髓细胞白血病1(Mcl-1)表达的影响,探讨AP对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的保护作用及机制。方法将健康雄性清洁级Sprague Dawley大鼠135只随机分为假手术组、IR组、AP组,每组45只。AP组大鼠在手术前3 d腹腔注射2 mL腺苷注射液(1.5 mg·kg^(-1)),每日1次;假手术组和IR组大鼠在手术前3 d每日相同时间点腹腔注射2 mL生理盐水。IR组及AP组大鼠采用改良线栓法行脑中动脉栓塞并于栓塞2 h后拨出栓线恢复血供制备IR模型,假手术组大鼠不做颈动脉结扎,其余手术方法同IR组和AP组。根据5分制神经行为学评分标准对大鼠进行神经功能损伤评分;术后24 h分别取各组造模成功大鼠,断头处死,应用氯化三苯四氮唑染色法观察脑梗死情况,并计算脑梗死体积占比;苏木精-伊红染色观察大鼠海马区神经元细胞存活情况,实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组大鼠海马组织内miR-29b表达,Western blot法检测大鼠海马组织中Bcl-2、p-Akt、Mcl-1表达。结果假手术组、IR组和AP组大鼠神经行为学评分和脑梗死体积占比比较差异有统计学意义(F=186.500、191.300,P<0.05),IR组和AP组大鼠神经行为学评分和脑梗死体积占比显著高于假手术组(P<0.05),AP组大鼠神经行为学评分和脑梗死体积占比显著低于IR组(P<0.05)。假手术组大鼠脑皮质神经元形态结构正常;IR组大鼠脑皮质神经元排列紊乱、数目明显减少、结构疏松,细胞体积变小,细胞核溶解、出现空泡,细胞膜完整性破坏,细胞呈三角形或梭形,间质水肿;与IR组比较,AP组大鼠神经元损伤显著减轻。手术后2、6、24、48 h, IR组和AP组大鼠海马组织miR-29b相对表达量显著高于假手术组(P<0.05),AP组大鼠海马组织miR-29b相对表达量显著高于IR组(P<0.05)。假手术组大鼠手术后2、6、24、48 h海马组织miR-29b相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);IR组大鼠手术后2、6、24 h海马组织miR-29b相对表达量呈增高趋势,手术后48 h开始降低(P<0.05);AP组大鼠手术后2、6、24 h海马组织miR-29b相对表达量呈增高趋势,手术后48 h开始降低(P<0.05)。假手术组大鼠手术后2、6、24、48 h海马组织Bcl-2、Mcl-1和p-Akt相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);IR组和AP组大鼠手术后2、6、24 h脑组织Bcl-2、Mcl-1和p-Akt相对表达量呈显著增高趋势(P<0.05),手术后48 h开始降低。手术后2、6、24、48 h, IR组和AP组大鼠海马组织Bcl-2相对表达量显著高于假手术组,AP组大鼠海马组织Bcl-2相对表达量显著高于IR组(P<0.05)。IR组大鼠手术后2、6、24 h海马组织Mcl-1相对表达量显著高于假手术组,手术后48 h显著低于假手术组(P<0.05);AP组大鼠手术后2、6、24 h海马组织Mcl-1相对表达量显著高于假手术组(P<0.05);AP组与假手术组大鼠手术后48 h海马组织Mcl-1相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);AP组大鼠手术后2、6、24、48 h海马组织Mcl-1相对表达量显著高于IR组(P<0.05)。IR组大鼠手术后2、6、24、48 h海马组织p-Akt相对表达量显著高于假手术组(P<0.05);AP组大鼠手术后2、6、24 h海马组织p-Akt相对表达量显著高于假手术组,手术后48 h海马组织p-Akt相对表达量显著低于假手术组(P<0.05);AP组大鼠手术后2、6、24、48 h海马组织p-Akt相对表达量显著低于IR组(P<0.05)。结论 AP可上调大鼠脑IR后miR-29b的表达,miR-29b通过下调海马组织中Akt蛋白的磷酸化水平、促进抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达来调控细胞凋亡,从而发挥对CIRI的保护作用。

微RNA-29b和血管内皮生长因子在激素性股骨头坏死中的表达关系

目的检测激素性股骨头坏死(steroid-induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)患者血清中微RNA-29b(microRNA-29b,miR-29b)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达情况并分析二者的相关性。方法选取2014年3月至2020年6月安徽中医药大学第一附属医院收治的100例SANFH患者纳入试验组,股骨头坏死ARCO分期Ⅰ期35例、Ⅱ期23例、Ⅲ期42例。选取同期该院75例健康体检者纳入对照组。采用定量反转录聚合酶链反应检测SANFH患者血清中miR-29b和VEGF表达情况,采用Pearson相关系数分析miR-29b与VEGF表达的相关性;采用受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic curve,ROC曲线)分析miR-29b和VEGF表达水平对SANFH的诊断价值。结果SANFH患者血清中miR-29b表达水平显著高于对照组(P<0.05),并随病情加重而显著升高(均P<0.05);VEGF表达水平显著低于对照组(P<0.05),并随病情加重而显著降低(均P<0.05)。Pearson相关性分析发现,SANFH患者血清中miR-29b与VEGF表达呈显著负相关(P<0.05)。miR-29b联合VEGF预测SANFH发病的ROC曲线下面积为0.916,灵敏度为85.00%,特异度为86.70%。结论SANFH患者血清中miR-29b表达水平显著增加,VEGF表达水平显著降低,二者呈显著负相关,且可用于SANFH早期监测和判断病情进展。

多囊卵巢综合征患者血清miR-29a、miR-143-3p表达及临床意义

目的分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清微RNA(miRNA)-29a、miR-143-3p表达与肥胖、糖脂代谢和胰岛素抵抗(IR)的关系。方法选取2019年6月至2022年6月厦门大学附属中山医院(以下简称“我院”)收治的86例PCOS患者为PCOS组,另选取我院同期49名体检健康志愿者为对照组。根据体重指数(BMI)将PCOS患者分为肥胖组(36例)与非肥胖组(50例),根据稳态模型评估(HOMA)-IR分为IR组(61例)与非IR组(25例)。比较各组血清miR-29a、miR-143-3p表达,肥胖指标[BMI、腰臀比(WHR)]、糖脂代谢指标[空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]及HOMA-IR;分析PCOS患者血清miR-29a、miR-143-3p表达与肥胖指标、糖脂代谢指标和HOMA-IR的相关性。结果PCOS组BMI、WHR、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、miR-29a、miR-143-3p高于对照组,HDL-C低于对照组(P<0.05)。肥胖组血清miR-29a、miR-143-3p表达高于非肥胖组(P<0.05)。IR组血清miR-29a、miR-143-3p表达高于非IR组(P<0.05)。PCOS患者血清miR-29a、miR-143-3p表达与BMI、WHR、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C呈正相关(r/rs>0,P<0.01),与HDL-C呈负相关(r<0,P<0.01)。结论PCOS患者血清miR-29a、miR-143-3p高表达,与肥胖、糖脂代谢和IR密切相关。

肌萎缩侧索硬化模型鼠中microRNA-29b的表达

目的:探讨microRNA-29b(miR-29b)在肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)中的表达水平及其在该病诊断中的可能价值。方法:留取16只SOD1-G93A ALS模型鼠和16只野生型鼠脑皮质、脊髓、前肢肌肉组织和血浆,提取microRNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RTq PCR)方法检测miR-29b的表达量,并通过受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic curve,ROC)评估SOD1-G93A ALS模型鼠miR-29b对于ALS的诊断价值。结果:以U6 snRNA为内参,实验组SOD1-G93A ALS模型鼠脑皮质miR-29b相对表达量显著高于对照组水平(P=0.001)。按周龄分组,8、12和16周龄实验组SOD1-G93A ALS模型鼠脑皮质miR-29b的相对表达量显著高于对照组水平(3个不同周龄的实验组vs.对照组显著性检验分别为P=0.044、P=0.018、P=0.045)。通过SOD1-G93A ALS模型鼠脑皮质miR-29b的相对表达量(以U6 snRNA为内参)对ALS进行诊断时,ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.885,如果以0.185 6为诊断临界值,灵敏度和特异度均较高,分别为92.9%和71.4%。结论:miR-29b可能会成为早期诊断ALS的检测指标。

不同抗凝药物对非瓣膜性房颤患者血清炎性因子及miR-29b、miR-223表达的影响

目的观察比较抗凝药物华法林和利伐沙班对非瓣膜性房颤患者血清炎性因子及微RNA-29b(miR-29b)、微RNA-223(miR-223)表达的影响。方法前瞻性选取146例非瓣膜性房颤患者,根据1∶1配对原则随机分组进行对照研究,每组73例(华法林组予以华法林,利伐沙班组予以利伐沙班)。比较两组栓塞或血栓形成、脑出血发生率、出血事件发生率及治疗前后凝血功能[凝血酶原时间(PT)、国际标准化比值(INR)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)]指标、血清炎性因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)]、miR-29b、miR-223。结果疗程结束后,两组PT、TT、APTT、INR、血清miR-29b水平高于治疗前,IL-6、hs-CRP、TNF-α、miR-223水平低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。两组疗程结束后PT、TT、APTT、INR、血清IL-6、hs-CRP、TNF-α、miR-223、miR-29b相比,差异无统计学意义(P>0.05)。两组栓塞或血栓形成、脑出血发生率相比,差异无统计学意义(P>0.05)。利伐沙班组出血性事件发生率低于华法林组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论华法林、利伐沙班均能改善非瓣膜性房颤患者凝血功能,降低炎性反应,调控血清miR-29b、miR-223水平,但利伐沙班有助于降低出血性事件发生率的效果。

miR-29b与Mcl-1蛋白表达的关系及其对肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-29b对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其与髓细胞白血病因子-1(Mcl-1)蛋白表达的关系。方法采用实时定量PCR检测18例肺癌组织、癌旁正常组织以及人非小细胞肺癌株SPC-A1中miR-29b表达情况;Western blotting实验检测SPC-A1细胞中Mcl-1蛋白水平;双荧光素酶实验验证miR-29b与Mcl-1的相关性;MTT增殖实验检测miR-29b对SPC-A1细胞增殖能力的影响;细胞凋亡实验检测miR-29b对SPC-A1细胞凋亡的影响。结果肺癌组织miR-29b表达水平低于癌旁正常组织(P<0.05)。miR-29b mimics组miR-29b的表达水平和细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),miR-29b inhibitor组低于对照组(P<0.05)。培养72 h和96 h时,miR-29b mimics组的增殖活性显著低于对照组(P<0.05)。培养96 h时,miR-29b inhibitor组的增殖活性明显高于对照组(P<0.05)。生物信息学软件预测结果显示,miR-29b与Mcl-1有类似的3'-UTR结合序列。双荧光素酶实验结果显示,转染miR-29b mimics后可以明显抑制Mcl-1的荧光素酶活性。miR-29b mimics组Mcl-1蛋白表达水平低于对照组(P<0.05),miR-29b inhibitor组高于对照组(P<0.05)。结论 miR-29b能抑制肺癌细胞增殖并诱导其凋亡,还能与Mcl-1的3'-UTR特异性结合,并抑制Mcl-1蛋白的表达活性。

miR-29a-3p与ELN在早产儿支气管肺发育不良患儿中的表达意义

目的探讨血清微RNA(miR)-29a-3p、弹性蛋白(ELN)在早产儿支气管肺发育不良(BPD)患儿中的表达意义。方法选取2019年1月至2021年7月该院131例早产儿为研究对象,分为BPD组(34例)和非BPD组(97例)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-29a-3p水平,ELISA法检测早产儿出生后第1、7、14天血清ELN水平,并进行相关性、受试者工作特征(ROC)曲线及多因素分析。结果与非BPD组比较,BPD组机械通气时间、吸氧时间更长,最高氧浓度、院内感染率更高,差异有统计学意义(P<0.05)。早产儿出生后第7、14天,BPD组miR-29a-3p相对表达水平高于非BPD组,ELN水平低于非BPD组,差异有统计学意义(P<0.05)。随着时间推移,BPD组miR-29a-3p相对表达水平逐渐上升,ELN水平逐渐下降,不同时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)。BPD组早产儿出生后第7天miR-29a-3p与ELN水平呈负相关(r=-0.571,P<0.05)。早产儿出生后第7天miR-29a-3p、ELN及其联合预测BPD发生的曲线下面积(AUC)分别为0.863、0.878、0.949。miR-29a-3p(OR=2.379,95%CI:1.582~3.576)、ELN(OR=0.837,95%CI:0.765~0.916)是早产儿BPD发生的独立影响因素(P<0.05)。结论血清miR-29a-3p、ELN水平检测对BPD有早期预测价值。