微RNA-543对过氧化氢诱导的人静脉内皮细胞氧化应激的影响

目的探讨微RNA-543(miR-543)对过氧化氢(H 2O 2)诱导的人静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激的影响。方法将对数生长期的HUVECs随机分为对照组及100、200、300、400μmol·L^(-1)H 2O 2组。对照组细胞于达尔伯克改良伊格尔培养基中常规培养;100、200、300、400μmol·L^(-1)H 2O 2组细胞分别加入终浓度100、200、300、400μmol·L^(-1)H 2O 2诱导培养;各组细胞培养3 h时采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性。另设inhibitor+H 2O 2组和inhibitor-NC+H 2O 2组。inhibitor+H 2O 2组HUVECs转染miR-543 inhibitor后,再用300μmol·L^(-1)H 2O 2诱导培养3 h;inhibitor-NC+H 2O 2组HUVECs转染inhibitor-NC后,再用300μmol·L^(-1)H 2O 2诱导培养3 h。取对照组、300μmol·L^(-1)H 2O 2组、inhibitor+H 2O 2组和inhibitor-NC+H 2O 2组HUVECs,采用MTT法检测细胞活性,实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中miR-543水平,酶标仪法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平,Western blot法检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子(ICAM1)、血管细胞黏附分子(VCAM1)、血栓调节蛋白(TM)、组织因子途径抑制因子(TFPI)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的相对表达量;双荧光素酶报告基因法检测HUVECs中荧光素酶活性。结果与对照组比较,300μmol·L^(-1)H 2O 2组、inhibitor+H 2O 2组和inhibitor-NC+H 2O 2组HUVECs细胞活性显著降低,miR-543相对表达量显著增高,SOD和GSH-Px活性、NO水平以及TM、TFPI、eNOS蛋白相对表达量显著降低,MDA水平及IL-1β、ICAM1和VCAM1蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。与300μmol·L^(-1)H 2O 2组和inhibitor-NC+H 2O 2组比较,inhibitor+H 2O 2组HUVECs细胞活性显著升高,miR-543相对表达量显著降低,SOD和GSH-Px活性、NO水平以及TM、TFPI、eNOS蛋白相对表达量显著升高,MDA水平及IL-1β、ICAM1和VCAM1蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。300μmol·L^(-1)H 2O 2组与inhibitor-NC+H 2O 2组HUVECs细胞活性和miR-543相对表达量、SOD和GSH-Px活性、NO、MDA水平及TM、TFPI、eNOS、IL-1β、ICAM1和VCAM1蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-543 mimic+pGL3-TFPI 3′-UTR组荧光素酶活性显著低于miR-543 mimic+pGL3-TFPI 3′-UTR mut组(P<0.05);miR-543 mimic+pGL3-eNOS 3′-UTR组荧光素酶活性显著低于miR-543 mimic+pGL3-eNOS 3′-UTR mut组(P<0.05)。miR-543 mimic组miR-543表达高于对照组和mimic-NC组(P<0.05);miR-543 mimic组TFPI和eNOS相对表达量显著低于对照组和mimic-NC组(P<0.05);对照组与mimic-NC组miR-543、TFPI和eNOS相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抑制miR-543表达能够抵抗H 2O 2诱导的HUVECs损伤,提高细胞活性、抑制氧化应激和炎症因子水平,提高抗血栓能力。

原发性肝癌组织中微RNA-543表达与微血管密度的相关性

目的探讨原发性肝癌(PLC)组织中微RNA-543(miR-543)与微血管密度(MVD)的相关性。方法选择2016年6月至2020年6月涿州市医院收治的100例PLC患者作为观察组,另选择同期因外伤行部分肝切除的70例患者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测PLC组织和正常肝组织中miR-543的表达;免疫组织化学染色观察PLC组织中MVD;分析PLC组织中miR-543表达与MVD的相关性。结果PLC组织和正常肝组织中miR-543相对表达量分别为3.231±0.312、1.021±0.052,PLC组织中miR-543相对表达量显著高于正常肝组织(t=4.216,P<0.05)。PLC组织和正常肝组织中MVD分别为44.79±8.54、9.68±3.27,PLC组织中MVD显著高于正常肝组织(t=3.175,P<0.05)。miR-543表达和MVD与肿瘤直径、肿瘤分期有相关性(P<0.05),与肿瘤数目、是否合并肝硬化无相关性(P>0.05);PLC组织中miR-543表达与MVD呈正相关(r=0.601,P<0.05)。结论PLC组织中miR-543表达上调,PLC组织中miR-543表达与MVD呈显著正相关,miR-543可能在PLC的发生、发展中起促进作用。