过表达微RNA-590-3p对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的探讨微RNA-590-3p(miR-590-3p)过表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用及其机制。方法将24只Sprague Dawley大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、阴性对照(NC)组和agomir-miR-590-3p组,每组6只。模型组、NC组和agomir-miR-590-3p组大鼠通过左冠状动脉结扎法制备MIRI模型,agomir-miR-590-3p组大鼠于结扎前经左心室前壁注入5 nmol agomir-miR-590-3p,NC组大鼠于结扎前经左心室前壁注入5 nmol agomir NC,模型组大鼠注入等量生理盐水;假手术组大鼠仅做开胸和心脏分离不进行结扎,并经左心室前壁注入等量生理盐水。模型制备后4组大鼠经腹主动脉取血,分离血清保存备用;断颈法处死大鼠,取心肌组织用于后续实验。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测大鼠心肌组织中miR-590-3p相对表达量,苏木精-伊红染色法观察大鼠心肌组织病理改变,酶联免疫吸附实验检测大鼠血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测大鼠心肌细胞凋亡率,Western blot法检测大鼠心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因、Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达水平。结果agomir-miR-590-3p组大鼠心肌组织中miR-590-3p相对表达量显著高于假手术组、模型组、NC组(P<0.05);模型组、NC组大鼠心肌组织中miR-590-3p相对表达量显著低于假手术组(P<0.05);模型组与NC组大鼠心肌组织中miR-590-3p相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。假手术组大鼠心肌纤维结构完整,细胞排列整齐;模型组和NC组大鼠心肌纤维断裂,细胞排列较乱,部分细胞出现坏死;与模型组和NC组相比,agomir-miR-590-3p组大鼠心肌纤维断裂和心肌细胞排列紊乱情况得到缓解。模型组、NC组和agomir-miR-590-3p组大鼠血清IL-1β、TNF-α、CK、LDH、MDA水平显著高于假手术组,SOD水平显著低于假手术组(P<0.05);agomir-miR-590-3p组大鼠IL-1β、TNF-α、CK、LDH、MDA水平显著低于模型组和NC组,SOD水平显著高于模型组和NC组(P<0.05);模型组与NC组大鼠血清IL-1β、TNF-α、CK、LDH、MDA、SOD水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、NC组和agomir-miR-590-3p组大鼠心肌细胞凋亡率、心肌组织Bax蛋白表达水平显著高于假手术组,Bcl-2蛋白表达水平显著低于假手术组(P<0.05);agomir-miR-590-3p组大鼠心肌细胞凋亡率、心肌组织Bax蛋白表达水平显著低于模型组和NC组,Bcl-2蛋白表达水平显著高于模型组和NC组(P<0.05);模型组和NC组大鼠心肌细胞凋亡率、心肌组织Bax和Bcl-2蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达miR-590-3p能够改善MIRI,该作用可能与其减少氧化应激及炎症反应、抑制心肌细胞凋亡有关。

血清微RNA-183-5p和微RNA-144-3p水平与脑出血病人脑出血量及认知功能的相关性

目的检测脑出血病人血清中微RNA(miRNA)-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,分析两者与脑出血量及认知功能的相关性。方法回顾性分析2020年8月至2021年8月荆州市第一人民医院收治的符合纳入、排除标准的89例脑出血病人的临床资料(观察组),另收集体检健康者89例为对照组。根据头颅影像学检查结果,将观察组分为少量出血组(<15 mL)31例,中量出血组(15~30 mL)36例和大量出血组(>30 mL)22例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,Pearson相关分析脑出血量与血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p表达水平的相关性,根据是否出现认知功能障碍,将观察组病人分为预后良好组57例和预后不良组32例;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p水平对脑出血病人预后的评估价值。结果观察组血清miRNA-183-5p表达水平0.67±0.16低于对照组1.01±0.24,血清miRNA-144-3p的表达水平3.53±0.73高于对照组1.05±0.21(P<0.05)。大、中、少出血组血清miRNA-183-5p水平为0.49±0.11、0.69±0.11、0.78±0.21,依次显著降低(P<0.05):大量出血组血清miRNA-144-3p水平3.86±0.75与中量出血组水平3.58±0.68显著高于少量出血组水平3.17±0.65(P<0.05)。脑出血量与血清miRNA-183-5p表达呈负相关(r=−0.51,P<0.05)、与miRNA-144-3p表达呈正相关(r=0.54,P<0.05)。预后不良组血清miRNA-183-5p水平0.50±0.12低于预后良好组0.77±0.18,血清miRNA-144-3p水平3.75±0.62高于预后良好组3.41±0.34(P<0.05)。血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p单独及联合评估病人预后的AUC分别是0.94、0.79和0.96,二者联合检测的AUC、灵敏度高于各自单独检测。结论脑出血病人血清miRNA-183-5p水平降低,miRNA-144-3p水平升高,与脑出血量相关性较强,二者联合可评估病人认知功能障碍的发生。

微RNA-93-5p对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及机制

目的探讨血浆微RNA(miR)-93-5p对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及其可能机制。方法选择2022年1月至2023年1月焦作市人民医院收治的120例育龄期PCOS患者为PCOS组,选择同期在本院体检的18例育龄期健康女性为对照组。收集2组受试者的年龄、体质量和身高,计算体质量指数(BMI)。2组受试者均在自然月经周期的卵泡期或黄体酮诱导的撤退性出血期采集空腹静脉血,采用电化学法测定血清黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、总睾酮(TT)、抗米勒管激素(AMH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)水平,并计算胰岛素抵抗稳态模型(HOMA-IR);采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组受试者血浆中miR-93-5p表达水平。取对数生长期人卵巢颗粒细胞KGN,以每孔3×10^(5)个细胞接种至6孔板中,随机分为miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组、阴性对照(NC)组、空白对照组。miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics;LY294002+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50 mmol·L^(-1) LY294002处理;AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50μmol·L^(-1) AZD5363处理;NC组KGN细胞转染阴性对照质粒;空白对照组KGN细胞不做任何处理。应用qRT-PCR法检测各组KGN细胞中miR-93-5p表达,细胞计数试剂盒-8试验检测各组KGN细胞增殖情况。结果PCOS组与对照组受试者的年龄及FSH、ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05);PCOS组患者的BMI、TT、AMH、LH、FINS、FBG、HOMA-IR显著高于对照组(P<0.05)。PCOS组患者血浆中miR-93-5p相对表达量显著高于对照组(t=-5.549,P<0.001)。miR-93-5p与TT、FINS、HOMA-IR呈中度正相关(r=0.434、0.622、0.586,P<0.001),与FBG和LH呈低度正相关(r=0.398、0.398,P<0.001)。ROC曲线显示,血浆miR-93-5p诊断PCOS的最佳临界值为1.380,曲线下面积为0.906(95%置信区间:0.839~0.973,P<0.001),敏感度为0.858,特异度为0.833,约登指数为0.691。miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞中miR-93-5p相对表达量均显著高于空白对照组和NC组(P<0.05)。培养24、48、72 h时,miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞的增殖能力显著高于空白对照组和NC组(P<0.05);LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组细胞的增殖能力显著低于miR-93-5p mimics组(P<0.05)。结论PCOS患者血浆miR-93-5p呈过表达,miR-93-5p可能通过基于调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激B信号通路介导PCOS卵巢颗粒细胞增殖来参与PCOS的发生发展,血浆miR-93-5p水平对PCOS有一定的诊断价值。

急性缺血性脑卒中患者血清微小RNA-140-3p、Krüpple样因子5表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性

目的探索急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA-140-3p(miR-140-3p)、Krüpple样因子5(KLF5)表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性。方法选择2022年10月—2024年1月本院收治的285例AIS患者作为研究对象,依据超声结果将患者分为斑块易损组(196例)、斑块稳定组(53例)以及无斑块组(36例);将患者依据斑块狭窄程度分为狭窄重度组(42例)、狭窄中度组(57例)、狭窄轻度组(150例)以及无狭窄组(36例)。收集患者的一般资料,采用实时荧光定量PCR对血清miR-140-3p、KLF5表达水平进行检测;多因素Logistic回归分析AIS患者颈动脉斑块不稳定性的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-140-3p、KLF5水平检测对AIS患者颈动脉斑块不稳定的诊断价值;分析不同狭窄程度血清miR-140-3p、KLF5水平;Pearson法和Spearman法相关性分析血清miR-140-3p、KLF5水平的相关性及二者与AIS患者颈动脉斑块稳定及狭窄程度的相关性。结果斑块易损组患者高血压人数、糖尿病人数、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)、膀抑素C(Cys-C)及KLF5水平高于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),血小板(PLT)及miR-140-3p水平低于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),斑块稳定组LDL-C、FIB、D-D、Cys-C及KLF5水平高于无斑块组(P<0.05),PLT及miR-140-3p水平低于无斑块组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示PLT、D-D、FIB、Cys-C、miR-140-3p、KLF5是AIS患者斑块不稳定性的影响因素(P<0.05);ROC分析显示,miR-140-3p、KLF5联合诊断AIS患者颈动脉斑块不稳定的ROC曲线下面积(AUC)显著大于miR-140-3p单独诊断的AUC(Z=4.617,P<0.001),KLF5单独诊断的AUC(Z=3.473,P=0.001);随着患者狭窄程度的增加,患者血清miR-140-3p水平降低(F=341.819,P<0.001),血清KLF5水平升高(F=152.186,P<0.001);Pearson法相关性分析显示,血清miR-140-3p水平与血清KLF5水平及斑块稳定性、狭窄程度呈负相关(r=-0.536,-0.529,-0.601,P<0.001),血清KLF5水平与斑块稳定性及狭窄程度呈正相关(r=0.511,0.634,P<0.001)。结论AIS患者血清miR-140-3p水平降低,血清KLF5水平升高,其水平变化与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度密切相关。

血清微小RNA-1-3p及微小RNA-182-5p联合检测对原发性肝癌诊断及预后的预测价值研究

目的:探讨血清微小RNA-1-3p(miRNA-1-3p)及微小RNA-182-5p(miRNA-182-5p)联合检测对原发性肝癌(PHC)诊断及预后的预测价值。方法:选取2021年9月—2022年9月吉林省肿瘤医院收治的PHC患者78例作为PHC组,另选取同期健康体检者50名作为对照组;另根据随访3年后患者转归将PHC组患者分为存活组(n=56)和死亡组(n=22)。分别比较各组患者的血清miRNA-1-3p、miRNA-182-5p水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miRNA-1-3p及miRNA-182-5p联合检测对PHC预后的预测价值。结果:PHC组血清miRNA-1-3p水平低于对照组,miRNA-182-5p水平高于对照组(P<0.05)。死亡组血清miRNA-1-3p水平低于存活组,miRNA-182-5p水平高于存活组(P<0.05);死亡组、存活组miRNA-1-3p水平低于对照组,miRNA-182-5p水平高于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miRNA-1-3p及miRNA-182-5p联合检测预测PHC预后的ROC曲线下面积为0.923,特异度为94.6%。结论:血清miRNA-1-3p及miRNA-182-5p与PHC密切相关,且联合检测对PHC预后的预测价值较高。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

微RNA-454-3p、FERM结构域蛋白6在乳腺癌组织中的表达水平及临床意义

目的探讨微RNA(miR)-454-3p、FERM结构域蛋白6(FRMD6)在乳腺癌组织中的表达水平以及临床意义。方法选取唐山市人民医院2016年12月至2018年12月住院手术的150例乳腺癌病人术中切除的乳腺癌组织标本及癌旁组织标本;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-454-3p、FRMD6在组织中的水平;采用Kaplan-Meier法分析miR-454-3p、FRMD6水平与乳腺癌病人预后的关系,并用log-rank法进行检验;Cox回归分析影响乳腺癌病人预后的因素。结果乳腺癌组织miR-454-3p水平(1.25±0.24)高于癌旁组织(0.99±0.22),FRMD6水平(0.79±0.19)低于癌旁组织(1.01±0.24),差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中miR-454-3p、FRMD6水平与淋巴结转移、组织分化以及TNM分期有关(P<0.05);miR-454-3p高表达组和FRMD6低表达组病人3年累积生存率分别低于miR-454-3p低表达组和FRMD6高表达组病人(均P<0.05);miR-454-3p高表达、FRMD6低表达、TNM分期为Ⅲ/Ⅳ期、淋巴结转移是影响乳腺癌病人预后的危险因素(P<0.05)。结论miR-454-3p在乳腺癌组织中表达上调,FRMD6在乳腺癌组织中表达降低,二者与乳腺癌病人预后密切相关,有望成为临床上预测乳腺癌病人预后的生物性标志物。

血清长链非编码RNA肺癌相关转录本1、微RNA-514b-3p、甲胎蛋白检测对早期肝癌根治术后复发的预测价值分析

目的探究血清长链非编码RNA肺癌相关转录本1(lncRNA LUCAT1)、微RNA-514b-3p(miR-514b-3p)、甲胎蛋白(AFP)表达水平对预测早期肝细胞癌(HCC)病人根治术后复发的临床价值。方法选取2016年3月至2019年6月西安市中心医院诊治的130例Ⅰ~Ⅱ期HCC病人为研究对象,对所有早期HCC病人随访3年,按其行根治术后是否复发分为未复发组(n=92)和复发组(n=38)。检测并比较复发组、未复发组早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p、AFP水平;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p、AFP对早期HCC病人根治术后复发的预测价值;多因素logistic回归分析早期HCC病人根治术后复发的影响因素;Pearson法分析根治术后复发的早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1表达水平与miR-514b-3p的关系。结果与未复发组[0.99±0.33、(17.42±3.67)μg/L、1.01±0.34]相比,复发组早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1(1.87±0.63)、AFP水平(25.38±5.18)μg/L升高(P<0.05),miR-514b-3p水平(0.56±0.19)降低(P<0.05)。血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p、AFP预测早期HCC病人根治术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.81、0.68、0.83,且血清lncRNA LUCAT1、AFP联合预测早期HCC病人根治术后复发的AUC为0.93,灵敏度为93.8%,特异度为84.8%。血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p联合预测AFP阴性病人根治术后复发的AUC为0.91,高于二者单独预测(P<0.05);血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p单独及联合预测AFP阳性病人根治术后复发的AUC与AFP单独预测相比,差异无统计学意义(P>0.05)。AFP、lncRNA LUCAT1是影响早期HCC病人根治术后复发的独立危险因素(P<0.05),miR-514b-3p是独立保护因素(P<0.05)。根治术后复发的早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1水平与miR-514b-3p水平呈负相关(P<0.05),且lncRNA LUCAT1与miR-514b-3p存在结合位点。结论根治术后复发的早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1水平较高,miR-514b-3p水平较低,血清lncRNA LUCAT1与AFP联合检测更有利于临床预测早期HCC病人根治术后复发情况,且血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p联合预测AFP阴性病人根治术后复发的效能更高。

肾透明细胞癌组织中微小RNA-3680-3p、FOX蛋白家族因子1在肾透明细胞癌中的表达及其与预后相关性分析

目的:探讨肾透明细胞癌组织中微小RNA-3680-3p(miR-3680-3p)、FOX蛋白家族因子1(FOXD1)基因表达的特点及与患者预后结局的关系。方法:采取自身病例对照研究方法,选择80例肾透明细胞癌患者的原发病灶组织及其癌旁组织进行实时荧光定量(qRT-PCR)检测,比较两组患者的miR-3680-3p、FOXD1 mRNA表达情况,并按照患者的临床病理学特点分别进行比较分析,采用生存分析方法分析miR-3680-3p、FOXD1 mRNA高表达与低表达患者的生存时间差异。结果:肾透明细胞癌患者癌组织miR-3680-3p表达低于癌旁组织,癌组织FOXD1 mRNA表达高于癌旁组织,有统计学差异(均P<0.05);在不同肿瘤直径、是否发生肿瘤病灶坏死、不同TNM分期、是否发生淋巴结转移、不同Fuhrman分级的肾透明细胞癌组织miR-3680-3p表达水平比较有统计学差异(均P<0.05);不同TNM分期、是否发生淋巴结转移、不同Fuhrman分级的肾透明细胞癌组织FOXD1 mRNA表达水平相比较有统计学差异(均P<0.05)。miR-3680-3p高表达肾透明细胞癌患者5年生存率77.14%与低表达组的62.22%比较,差异无统计学意义(P>0.05);miR-3680-3p高表达肾透明细胞癌患者生存时间长于低表达组,相比较有统计学差异(χ^(2)=4.771,P<0.05)。FOXD1 mRNA高表达肾透明细胞癌患者5年生存率59.57%低于低表达组81.82%,有统计学差异(P<0.05);miR-3680-3p高表达肾透明细胞癌患者的生存时间短于低表达组,有统计学差异(χ^(2)=5.155,P<0.05)。结论:肾透明细胞癌组织中miR-3680-3p低表达、FOXD1 mRNA高表达,并且与疾病进展、患者预后结局有关。

血清微小RNA-1-3p、转录激活因子4在老年慢性心力衰竭患者中的表达水平及其与认知功能损伤的关系

目的探讨老年慢性心力衰竭(CHF)患者血清微小RNA-1-3p(miR-1-3p)、转录激活因子4(ATF4)的表达水平及其与认知功能损伤的关系。方法选取老年CHF患者150例为研究对象。根据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分将患者分为认知功能损伤组(n=75)和认知功能正常组(n=75)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测2组血清miR-1-3p水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测2组血清ATF4水平。采用Pearson相关性分析法分析老年CHF伴认知功能损伤患者血清miR-1-3p与ATF4水平的相关性。采用Logistic回归分析法分析老年CHF患者发生认知功能损伤的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-1-3p、ATF4水平对CHF患者发生认知功能损伤的预测价值。结果认知功能损伤组的左心室射血分数(LVEF)、MoCA评分、血清miR-1-3p水平低于认知功能正常组,N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平、血清ATF4水平高于认知功能正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。老年CHF伴认知功能损伤患者血清miR-1-3p水平与血清ATF4水平呈负相关(r=-0.523,P<0.001)。miR-1-3p、ATF4是老年CHF患者发生认知功能损伤的影响因素(P<0.05)。血清miR-1-3p、ATF4联合预测老年CHF患者发生认知功能损伤的曲线下面积(AUC)大于血清miR-1-3p、ATF4单独预测的AUC,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。结论血清miR-1-3p表达水平与老年CHF患者认知功能呈正相关,血清ATF4表达与老年CHF患者认知功能呈负相关。血清miR-1-3p、ATF4可能是评估老年CHF患者认知功能损伤的潜在标志物。

血清微小RNA-325-3p和成纤维细胞生长因子10表达水平对急性胰腺炎病情及预后评估的价值

目的 探讨急性胰腺炎血清微小RNA-325-3p(miR-325-3p)和成纤维细胞生长因子10(FGF10)表达水平对病情严重程度及预后的评估价值。方法 2021年6月~2022年10月我院诊治的急性胰腺炎病人265例,分为轻症急性胰腺炎组(100例)、中重症急性胰腺炎组(70例)和重症急性胰腺炎组(95例);同期260例健康体检志愿者为对照A组,260例慢性胰腺炎病人为对照B组。根据重症病人入院28天的生存情况,将病人分为生存组(68例)和死亡组(27例)。比较各组病人miR-325-3p和FGF10水平。分析急性胰腺炎病人血清miR-325-3p、FGF10水平与急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)评分的相关性以及miR-325-3p与FGF10的相关性;对影响重症急性胰腺炎病人预后的因素进行Logistic回归分析;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-325-3p、FGF10水平对重症急性胰腺炎病人预后的预测价值。结果 与对照A、B组相比,轻症、中重症、重症急性胰腺炎组病人血清miR-325-3p水平依次显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),FGF10水平依次明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);急性胰腺炎病人血清miR-325-3p与FGF10水平、APACHEⅡ评分均呈负相关(APACHEⅡ:r=-0.664,P<0.05;FGF10:r=-0.687,P<0.05)。FGF10与APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.676,P<0.05)。与生存组相比,死亡组身体质量指数(BMI)、APACHEⅡ评分、FGF10水平均明显升高(P<0.05),miR-325-3p水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析发现,BMI、APACHEⅡ评分、FGF10是影响重症急性胰腺炎病人预后的危险因素(P<0.05),miR-325-3p是影响重症病人预后的保护因素(P<0.05);miR-325-3p、FGF10联合预测重症急性胰腺炎病人预后的ROC曲线下面积(AUC)为0.972,均优于其各自单独预测(Z二者联合-miR-325-3P=1.984,P=0.047;Z二者联合-FGF10=2.219,P=0.027)。结论 急性胰腺炎病人血清miR-325-3p水平降低,FGF10水平升高,与病人病情严重程度及预后相关。

微小RNA-483-3p在原发性高血压患者血清中的水平及诊断价值

目的探讨微小RNA(miR)-483-3p在原发性高血压患者血清中的水平及诊断价值。方法选取2021年1月至2023年3月于三亚中心医院心内科就诊并确诊为原发性高血压的患者180例作为研究组,选取同期来我院体检且与研究组一般资料匹配的健康志愿者160例作为对照组。实时荧光定量聚合酶链反应检测2组血清miR-483-3p水平。结果与对照组比较,研究组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、收缩压、舒张压水平升高(P<0.01)。研究组血清miR-483-3p水平高于对照组(2.15±0.57 vs 1.00±0.05,P<0.01)。研究组中高血压1级、2级、3级患者血清miR-483-3p水平呈明显升高趋势(1.44±0.45 vs 1.79±0.58 vs 3.35±0.64,P<0.05)。相关性分析显示,研究组血清miR-483-3p水平与高血压分级呈正相关(r=0.745,P=0.000);研究组血清miR-483-3p水平与TC、TG、LDL-C、收缩压、舒张压水平均呈正相关(P<0.01)。miR-483-3p、TC、LDL-C、收缩压、舒张压是原发性高血压的独立影响因素(P<0.05,P<0.01)。血清miR-483-3p水平预测原发性高血压的曲线下面积为0.923(95%CI:0.890~0.949)。结论miR-483-3p在原发性高血压患者血清中的水平随病情严重程度的加重呈上升趋势,对原发性高血压有较高的诊断价值。

微小RNA-483-3p调控细胞自噬减轻大鼠心肌纤维化的机制研究

目的研究微小RNA(miR)-483-3p减轻大鼠心肌纤维化的作用,探讨其机制与细胞自噬的关系。方法选取24只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、空白转染组和高表达组,每组6只,通过尾静脉注射异丙肾上腺素建立心肌纤维化模型。空白转染组及高表达组通过尾静脉分别单次注射腺相关病毒(AAV)-空白转染、AAV-miR-483-3p(5×10^(11)vg)进行预处理。14 d后,假手术组经尾静脉注射0.9%的氯化钠溶液[2.5 ml/(kg·d)],持续14 d;模型组、空白转染组和高表达组通过尾静脉注射异丙肾上腺素[2.5 ml/(kg·d),2 mg/ml],持续14 d。检测大鼠心肌病理损伤程度、心肌纤维化程度、胶原蛋白Ⅰ(Collagen-Ⅰ)表达量以及心肌细胞中微管相关蛋白轻链3(LC3)、细胞自噬相关蛋白5(Atg5)和自噬降解底物(P62)的表达。结果与假手术组比较,模型组心肌纤维化面积、Collagen-Ⅰ阳性表达量、Atg5及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著增加,P62蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,高表达组心肌纤维化面积、Collagen-Ⅰ阳性表达量、Atg5及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低[(13.64±1.51)%vs(27.47±1.55)%,(13.48±3.07)%vs(30.91±2.45)%,0.98±0.17 vs 1.24±0.28,0.66±0.05 vs 1.26±0.09,P<0.05],P62蛋白表达水平显著增高(0.91±0.11 vs 0.74±0.06,P<0.05)。结论miR-483-3p可减轻大鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制心肌细胞自噬有关。

微RNA-887-3p能抑制大鼠椎间盘纤维环细胞中MDM4表达和细胞增殖并促进细胞凋亡

目的探讨微RNA(microRNA,miRNA或miR)-887-3p对大鼠椎间盘纤维环细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法取8周龄SPF级雄性SD大鼠的纤维环组织,离心制备并鉴定纤维环细胞。实验随机分为4组:正常组(Normal group)是不做任何处理的原代纤维环细胞;对照组(Control group)用10 ng/mL白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)处理纤维环细胞24 h,形成退变细胞模型;干扰组(miR-887-3p inhibitor)是在对照组的基础上用Lipo3000转染miR-887-3p抑制子;过表达组(miR-887-3p mimics)是在对照组的基础上用Lipo3000转染miR-887-3p模拟物。采用CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;实时荧光定量PCR法检测miR-887-3p和鼠双微体4(murine double minute 4,MDM4)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测MDM4、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达水平。结果免疫荧光染色法鉴定分离培养的细胞发现,大鼠椎间盘纤维环细胞中Collagen I的阳性率在90%以上,提示纤维环细胞纯度大于90%。实时荧光定量PCR结果显示,利用IL-1β构建纤维环退变细胞模型后,miR-887-3p表达水平与正常组相比显著上升(P<0.001);与对照组相比,转染miR-887-3p抑制子后,miR-887-3p表达水平显著下降(P<0.001)。CCK-8法检测结果表明,与正常组相比,对照组细胞活力显著下降(P<0.001);与对照组相比,抑制miR-887-3p的表达后,细胞增殖能力显著增强;miR-887-3p过表达后,细胞增殖能力显著下降。流式细胞仪检测结果表明,与正常组相比,对照组的细胞凋亡率显著增加(P<0.001);与对照组相比,miR-887-3p干扰组的细胞凋亡率显著降低(P<0.001),miR-887-3p过表达组的细胞凋亡率显著增加(P<0.001)。蛋白质印迹法检测结果发现,与正常组相比,对照组中Bcl-2的表达水平显著降低(P<0.001),Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.001);与对照组相比,miR-887-3p干扰组中Bcl-2和MDM4表达水平显著升高(P<0.01),Caspase-3的表达水平显著降低(P<0.01);而miR-887-3p过表达组中Bcl-2和MDM4表达水平显著降低(P<0.05),Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05)。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果显示,干扰miR-887-3p后,MDM4蛋白和mRNA的表达增加(P<0.001);过表达miR-887-3p后,MDM4蛋白和mRNA的表达降低(P<0.01,P<0.001)。结论miR-887-3p可能通过调控MDM4的表达来影响大鼠椎间盘纤维环细胞的增殖和凋亡,进而影响椎间盘退变的发生和发展。

微RNA-509-3p/干扰素刺激基因15轴对喉癌细胞血管生成及血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的探究微RNA(miR)-509-3p/干扰素刺激基因15(ISG15)轴对喉癌细胞血管生成及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法2022年1―9月,将喉癌M4E细胞分为Con组、miR-NC组、miR-509-3p组、pcDNA-ISG15组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞中miR-509-3p表达;细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Matrigel体外成管实验检测血管生成能力;蛋白质印迹法检测细胞中ISG15、VEGF蛋白表达;萤光素酶活性报告检测miR-509-3p和ISG15的靶向关系。结果与喉上皮细胞NP69中miR-509-3p表达(1.01±0.13)μg/L相比,喉癌细胞SCC-40、SCC-2、M4E中miR-509-3p表达[(0.61±0.08)、(0.45±0.07)、(0.18±0.07)μg/L]均降低,且M4E细胞中miR-509-3p表达低于SCC-40、SCC-2细胞(P<0.05)。与Con组相比,miR-509-3p组细胞中miR-509-3p表达增加[(1.17±0.05)μg/L比(118±0.03)μg/L];Con组细胞中miR-509-3p表达与miR-NC组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与Con组相比,miR-509-3p组细胞增殖(1.71±0.02比3.09±0.07)、侵袭(55.33±2.52比150.67±2.52)、迁移(30.58±2.08比98.33±1.53)、形成小管数量(61.28±2.15比135.62±2.54)及细胞中ISG15(0.24±0.03比1.11±0.13)、VEGF(0.35±0.02比0.99±0.04)蛋白表达均降低,细胞凋亡率[(18.76±0.18)%比(5.61±0.08)%]增加(P<0.05);Con组细胞增殖、侵袭、迁移、形成小管数量、凋亡率及细胞中ISG15、VEGF蛋白表达和miR-NC组相比差异无统计学意义(P>0.05);与miR-509-3p组相比,pcDNA-ISG15组细胞增殖(3.25±0.06)、侵袭(144.00±2.65)、迁移(89.34±5.13)、形成小管数量(131.56±2.08)及细胞中ISG15(0.83±0.05)、VEGF蛋白(0.89±0.03)表达增加,细胞凋亡率降低(6.85±0.06)%(P<0.05)。结论过表达miR-509-3p可抑制喉癌细胞血管生成及VEGF蛋白表达。

微RNA-196a-1-3p靶向Ras响应元件结合蛋白调控胆管癌细胞增殖的机制研究

目的探讨转化生长因子β(TGF-β)调控人胆管癌细胞系RBE细胞增殖的关键微RNA(miRNA)及其潜在的机制。方法该研究起止时间为2020年1月至2022年1月。磷酸盐缓冲液(PBS)处理为对照组,TGF-β处理为TGF-β组,TGF-β抗体处理为抗体组。检测三组RBE细胞的增殖水平。miRNA高通量测序检测三组RBE细胞的miRNA调控变化,并进行miRNA模拟物过表达筛选鉴定受TGF-β调控的影响RBE细胞增殖水平的关键miRNA。miRNA数据库(miRDB)在线分析miRNA的潜在底物,并通过小干扰RNA(siRNA)敲低筛选鉴定影响RBE细胞增殖水平的关键底物。结果相比于对照组,TGF-β组RBE细胞的增殖水平上升(1.62±0.07比2.35±0.09,P<0.05),抗体组RBE细胞的增殖水平下降(1.62±0.07比1.11±0.08,P<0.05)。过表达微RNA-196a-1-3p(miR-196a-1-3p)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。敲低Ras响应元件结合蛋白(RREB1)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。过表达miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1的信使RNA(mRNA)和蛋白水平下降(P<0.05)。敲低miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1与SMAD家族蛋白3(SMAD3)的相互作用增加。敲低SMAD3后,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。与仅敲低SMAD3相比,敲低SMAD3的同时过表达RREB1的RBE细胞的增殖水平无显著变化,并且同时敲低SMAD3和miR-196a-1-3p的RBE细胞的增殖水平无显著变化。结论TGF-β能够通过miR-196a-1-3p/RREB1/SMAD3轴促进RBE细胞增殖;miR-196a-1-3p和RREB1可作为潜在的治疗胆管癌的靶标,为针对该靶标的新药研发奠定了基础。

微小RNA-223-3p调控Notch通路对屋尘螨所致过敏性鼻炎小鼠鼻腔炎症反应的影响实验研究

目的:探讨微小RNA(miR)-223-3p对屋尘螨(HDM)所致过敏性鼻炎(AR)小鼠鼻腔炎症反应的影响及相关机制。方法:80只BALB/c小鼠随机分为对照组、HDM致AR组(AR组)、miR-223-3p激动剂组(agomiR-223-3p组)、miR-223-3p抑制剂组(antagomiR-223-3p组)及miR-223-3p激动剂+敲低Notch1组(agomiR-223-3p+sh-Notch1组),每组各16只。利用HDM变应原提取物构建AR小鼠模型,并给予miR-223-3p激动剂(miR-223-3p agomir)、miR-223-3p抑制剂(miR-223-3p antagomir)及敲低Notch1的腺相关病毒(AAV-sh-Notch1)滴鼻治疗。末次激发后,对小鼠进行AR症状评估,并收集血清、鼻腔灌洗液(NALF)和鼻黏膜组织标本。HE染色检测鼻黏膜损伤。Diff-Quik染色检测NALF中嗜酸性粒细胞数量。ELISA检测血清HDM特异性免疫球蛋白E(HDM-sIgE)和NALF中炎症因子水平。RT-qPCR检测鼻黏膜miR-223-3p、炎症因子及Notch通路相关mRNA水平。Western blot检测鼻黏膜Notch1、Jagged1蛋白水平。结果:与对照组比较,AR组小鼠鼻痒、喷嚏、流鼻涕情况严重,鼻黏膜增厚,可见大量炎症浸润;AR症状评分、血清HDM-sIgE水平、鼻黏膜miR-223-3p水平升高;NALF中嗜酸性粒细胞增多,白介素(IL)-4、IL-5、IL-13水平升高,IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)水平降低;鼻黏膜IL-4、IL-5、IL-13 mRNA和Notch1、Jagged1 mRNA及蛋白水平升高,IL-12、IFN-γmRNA水平降低(均P<0.05)。agomiR-223-3p组上述炎症反应较AR组增强,并激活Notch通路;antagomiR-223-3p组上述炎症反应较AR组减轻,并阻断Notch通路(均P<0.05)。与agomiR-223-3p组比较,敲低Notch表达可逆转miR-223-3p对AR小鼠鼻腔炎症反应的激活作用。结论:miR-223-3p通过激活Notch通路增强HDM所致AR小鼠鼻腔炎症反应。

皮肤鳞状细胞癌组织微RNA-103a-2-5p、钙黏附蛋白11表达及其临床意义

目的分析皮肤鳞状细胞癌组织中微RNA-103a-2-5p(miR-103a-2-5p)和钙黏附蛋白11(CDH11)的表达水平,探讨二者在临床研究中的意义。方法选取2017年1月至2019年6月宝鸡市人民医院诊治的98例皮肤鳞状细胞癌病人为研究对象,收集病人术中切除的癌组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中miR-103a-2-5p的表达水平。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测CDH11表达水平。TargetScanHuman网站预测miR-103a-2-5p与CDH11的靶向关系;Pearson相关性分析癌组织中miR-103a-2-5p和CDH11水平的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-103a-2-5p、CDH11表达与皮肤鳞状细胞癌病人预后的关系;影响皮肤鳞状细胞癌病人预后的因素采用Cox回归分析;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析miR-103a-2-5p和CDH11的表达对皮肤鳞状细胞癌的诊断价值。结果与癌旁正常组织[1.03±0.12,(5.06±1.43)µg/L]相比,皮肤鳞状细胞癌组织miR-103a-2-5p表达水平(1.46±0.38)显著升高(P<0.05),CDH11表达水平[(2.96±0.62)µg/L]明显降低(P<0.05);TargetScanHu-man网址预测miR-103a-2-5p与CDH11间存在结合位点;经Pearson相关性分析,miR-103a-2-5p与CDH11水平呈负相关(P<0.05);两者均与病人病理分级、TNM分期、淋巴结转移、侵袭程度相关(P<0.05);miR-103a-2-5p高表达组和CDH11低表达组复发率显著高于miR-103a-2-5p低表达组和CDH11高表达组(P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、miR-103a-2-5p是影响病人预后的危险因素(P<0.05),CDH11是影响病人预后的保护因素(P<0.05);miR-103a-2-5p、CDH11二者联合诊断皮肤鳞状细胞癌的ROC曲线下面积(AUC)为0.836,显著优于其各自单独诊断(P=0.018、0.021)。结论皮肤鳞状细胞癌病人miR-103a-2-5p表达水平升高,CDH11表达水平降低,二者均与病人临床病理特征及预后有密切关系,且二者联合可较好的诊断皮肤鳞状细胞癌。

肿瘤相关成纤维细胞中微小RNA-214-3p表达对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)中微小RNA-214-3p(miR-214-3p)表达对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法选取64例卵巢癌患者作为研究对象,根据化疗后无进展生存期分为铂部分敏感组和铂敏感组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组患者卵巢癌组织中miR-214-3p相对表达量,比较不同临床特征患者的2年生存率;原代培养CAFs及正常卵巢成纤维细胞(NFs),采用qRT-PCR、免疫荧光实验检测CAFs和NFs中miR-214-3p、p62蛋白表达;通过CSIOVDB数据库检索SQSTM1基因在不同种类卵巢细胞中的表达水平;向CAFs瞬时转染miR-214-3p mimic(mimic组)和miR-214-3p mimic NC(NC组),将未转染CAFs设为对照组;留取各组细胞培养上清,建立卵巢癌细胞SKOV3与各组CAFs间接共培养模型,采用CCK-8法、DCFH-DA法、qRT-PCR及免疫印迹法分别检测不同培养条件下SKOV3细胞增殖率、顺铂半数抑制浓度(IC 50)、细胞活性氧(ROS)含量和miR-214-3p、顺铂耐药基因CCND1、自噬蛋白p62相对表达量。结果铂部分敏感组患者的miR-214-3p相对表达量低于铂敏感组,差异有统计学意义(P<0.01);不同国际妇产科联盟(FIGO)分期、铂部分敏感情况、miR-214-3p低表达情况患者的2年生存率比较,差异有统计学意义(P<0.01);卵巢CAFs中miR-214-3p相对表达量低于NFs,p62蛋白表达水平高于NFs,差异有统计学意义(P<0.01);CSIOVDB数据库在线分析显示,卵巢癌CAFs中的SQSTM1基因表达水平高于卵巢癌上皮细胞、NFs,差异有统计学意义(P<0.01);相较于与对照组CAFs、NC组CAFs间接共培养的SKOV3细胞,与mimic组CAFs间接共培养的SKOV3细胞的增殖率、顺铂IC 50、ROS含量降低,miR-214-3p相对表达量升高,CCND1mRNA和p62蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论CAFs中miR-214-3p表达与卵巢癌细胞对顺铂的敏感性相关,CAFs中miR-214-3p低表达可促进卵巢癌细胞增殖及ROS介导的自噬,进而降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。

微小RNA-148a-3p靶向核心1β13-半乳糖基转移酶1增强肺腺癌细胞的放疗敏感性的研究

目的探讨微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)在肺腺癌中的表达及临床意义,分析miR-148a-3p靶向蛋白核心1β13-半乳糖基转移酶1(C1GALT1)对肺腺癌细胞放疗敏感性的影响及机制。方法选取肺腺癌组织芯片中76例患者肿瘤组织及肺腺癌A549细胞株为研究对象。对组织芯片分别进行miR-148a-3p原位杂交(ISH)染色和C1GALT1免疫组织化学染色,分析76例肺腺癌患者肿瘤组织中miR-148a-3p的表达与临床病理、预后及C1GALT1表达的关系。采用细胞转染技术对A549细胞进行miR-148a-3p过表达质粒的转染;转染细胞接受2 Gy放疗后采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性;采用蛋白质印迹法检测细胞C1GALT1蛋白表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-3p与C1GALT1的靶向调控关系;采用共转染技术分析miR-148a-3p调控A549细胞放疗敏感性的机制。结果76例肺腺癌组织中低表达miR-148a-3p与患者淋巴结转移显著相关(P=0.012);miR-148a-3p高表达者预后显著优于miR-148a-3p低表达者(P=0.005);肺腺癌组织中miR-148a-3p与C1GALT1的表达呈显著负相关(P=0.023)。多因素分析显示,miR-148a-3p低表达、T分期及淋巴结转移是预后的独立危险因素。克隆形成实验显示,过表达miR-148a-3p组克隆形成数显著低于对照组(P<0.001);Western Blot结果显示,miR-148a-3p过表达可以显著下调细胞中C1GALT1蛋白水平(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-148a-3p通过结合C1GALT1的3′UTR来调控C1GALT1的表达。功能拯救试验显示C1GALT1能够部分抵消miR-148a-3p的放疗增敏效应。结论肺腺癌中miR-148a-3p低表达与淋巴结转移、C1GALT1高表达及预后不良显著相关,miR-148a-3p通过负调控C1GALT1的表达增强肺腺癌细胞的放疗敏感性。