超声微泡介导miR-181c-shRNA质粒转染对人肝癌HepG2细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的探讨miR-181c表达与肝细胞肝癌(HCC)患者预后的相关性及超声微泡介导miR-181c干扰质粒(miR-181c-shRNA)转染对人肝癌HepG2细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法下载癌症基因组图谱(TCGA)中HCC患者数据集,分析miR-181c表达与HCC患者生存时间及预后的关系,利用前期实验筛选的最优超声转染条件介导miR-181c-shRNA质粒转染人肝癌HepG2细胞,实时荧光定量PCR(qPCR)检测转染后细胞miR-181c的表达情况,并检测沉默miR-181c表达后细胞增殖、周期及凋亡情况。结果生存分析结果显示,miR-181c高表达患者的无病生存期较低表达患者明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),而总生存期相比较差异无统计学意义(P>0.05);Cox比例风险模型提示miR-181c表达是HCC的独立预后因素(P<0.05);转染miR-181c-shRNA质粒后细胞的miR-181c表达下调,人肝癌HepG2细胞的增殖受到抑制、周期受到阻滞(P<0.05),但对凋亡无明显影响。结论miR-181c表达可作为HCC的独立预后因素,超声微泡介导miR-181c-shRNA转染人肝癌HepG2细胞后,miR-181c表达下调,细胞增殖受到抑制、周期发生阻滞,但对凋亡无明显影响,本研究有望为HCC的基因治疗提供新的靶点。

MiR-181c对人脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的作用

目的观察miR-181c对人脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,进一步探讨miR-181c的生物学功能。方法化学合成miR-181c,脂质体转染U251细胞。应用cck-8法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡。结果miR-181c上调后对U251细胞具有抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,而对照组无明显抑制作用。结论化学合成的miR-181c在人脑胶质瘤细胞增殖和凋亡过程中发挥重要作用,可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。

海马注射miR-181c对CCI模型大鼠机械痛和NF-L表达的影响

目的:在坐骨神经缩窄性损伤(CCI)大鼠海马背侧CA1区给予miR-181c激动剂及抑制剂,观察大鼠机械痛阈以及海马神经微丝轻链多肽(NF-L)表达变化。方法:雄性SD大鼠分为假手术组(sham)、CCI组+生理盐水组、CCI+miR-181c激动剂组和CCI+miR-181c抑制剂组。在术前和术后第1、3、5、7、10和14 d测定机械缩足反射阈值(MWT);免疫组化观察NF-L表达,Western Blot检测三结构蛋白2(TRIM2)、NF-L和N-甲基-D天门冬氨酸受体NR1亚单位(NMDAR1)的表达。结果:与sham组相比,CCI+生理盐水组MWT降低(P <0.05);与CCI组相比,miR-181c激动剂组MWT明显升高(P <0.05),而miR-181c抑制剂组MWT进一步降低(P <0.05)。免疫组化观察到,与sham组相比,CCI+生理盐水组NF-L阳性纤维减少;与CCI组相比,CCI+miR-181c激动剂组NF-L阳性纤维增多,而CCI+miR-181c激动剂组NF-L阳性纤维减少。Western Blot实验显示,与sham组相比,CCI+生理盐水组海马TRIM2的表达升高(P <0.05),而NF-L与NR1的表达下降(P <0.05);与CCI组相比,CCI+miR-181c激动剂组TRIM2表达下降(P <0.05)而NF-L与NMDAR1(NR1)表达上升(P <0.05);而CCI+miR-181c抑制剂组TRIM2表达上升(P <0.05),NF-L与NR1表达下降(P <0.05)。结论:海马CA1区给予miR-181c可以减轻CCI大鼠机械痛敏,抑制海马TRIM2表达,促进NF-L与NR1表达上调,减轻海马神经元损伤。