德宏奶水牛乳腺组织miR-21-5p基因及其脂类代谢靶基因表达研究

试验旨在探究德宏奶水牛乳腺组织miR-21-5p基因及其靶基因的表达规律。选取饲养条件相同、同一胎次、年龄相近、处于泌乳中期的健康德宏奶水牛,分为高乳脂率组(H组)、中乳脂率组(M组)和低乳脂率组(L组)。每组选取3头奶水牛,屠宰后采集乳腺组织,提取总RNA。采用生物信息学方法预测miR-21-5p的靶基因。利用荧光定量PCR技术检测miR-21-5p及其靶基因的表达水平,并与课题组前期测定的乳脂率进行相关性分析。结果显示,miR-21-5p的靶基因可能为AGPAT6和GPAM。L组德宏奶水牛乳腺组织中miR-21-5p的表达水平高于M组和H组(P<0.01)。相关性分析结果显示,miR-21-5p与靶基因AGPAT6的表达水平呈极显著负相关(P<0.01),与靶基因GPAM的表达水平呈显著负相关(P<0.05),德宏奶水牛乳腺组织miR-21-5p表达量与乳脂率呈显著负相关(P<0.05),靶基因AGPAT6和GPAM与乳脂率呈极显著正相关(P<0.01)。蛋白互作网络结果显示,AGPAT6和GPAM互作关系最强。研究表明,miR-21-5p可能通过负调控靶基因AGPAT6和GPAM的表达影响乳脂合成,进而影响乳脂率。

德宏奶水牛FASN基因乳腺组织表达及生物信息学分析

【目的】研究德宏奶水牛乳腺组织FASN基因表达水平及水牛FASN蛋白的生物学特性。【方法】用乳成分分析仪测定乳脂率,并按照乳脂率将德宏奶水牛分为高(H)、中(M)、低(L)组;运用qPCR法测定乳腺组织FASN基因的表达水平,分析其与乳脂率的相关性;运用生物信息学方法分析水牛FASN蛋白的理化性质及结构特征。【结果】H组德宏奶水牛乳腺组织的FASN基因表达水平极显著高于L组和M组(P<0.01),M组极显著高于L组(P<0.01),其mRNA表达水平与乳脂率呈极显著正相关(P<0.01)。水牛FASN蛋白的分子式为C_(12188)H_(19327)N_(3363)O_(3631)S_(109),分子质量为274.56 ku,蛋白不稳定;在细胞内主要分布于细胞核;具有2个结构域,均与脂类合成代谢有关;二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主;进化树及同源性分析显示:水牛FASN蛋白与牦牛和家牛的亲缘关系较近,序列同源性较高;FASN主要与ACACB、ACACA和ACLY互作较为紧密。【结论】德宏奶水牛乳腺组织中FASN基因表达可能促进乳脂率提高。

德宏奶水牛SCD基因乳腺组织表达及生物.信息学分析

本试验旨在研究德宏奶水牛SCD基因表达规律和探究水牛SCD生物学特性。用乳品分析仪测定乳脂率,依照乳脂率高低进行分组,分为高、中、低组(分别为H组、M组、L组)。采用qPCR法检测SCD基因表达量,与乳脂率进行关联分析。利用生物信息学方法对水牛SCD的结构进行预测。结果表明,H组SCD表达量极显著高于M组和L组(P<0.01),M组极显著高于L组(P<0.01)。其mRNA表达水平与乳脂率呈强正相关。生物信息学分析结果显示,水牛SCD为不稳定亲水蛋白,不存在信号肽,主要在内质网(44.4%)发挥作用。二级结构主要由无规则卷曲(40.39%)、α-螺旋(39.55%)构成。SCD与ELOVL6、SREBP1、FASN等脂质代谢关键分子互作。研究表明,德宏奶水牛SCD基因的表达可能影响乳脂合成。

高产与低产德宏奶水牛耐热性能差异的试验研究

基于DHI数据,选择高产与低产的德宏奶水牛各15头作为实验动物。在平均温湿指数(THI)在72以上的饲养环境中进行为期27 d的试验,对奶水牛的泌乳量、乳品质、热应激相关激素的浓度和生理参数进行了测试分析。相比高产奶水牛,低产奶水牛的体细胞数量较高,非脂乳固体含量却相对较低(P<0.05),其他乳品质参数在两组间无显著性差异。在热应激条件下,低产组奶水牛的促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)浓度相对较低,而皮质醇(cortisol,Cor)浓度却相对较高,反映代谢水平的胰岛素(insulin,INS)和T_3浓度相对较高。从热应激相关激素浓度和乳成分来看,仍不能推断高产与低产德宏奶水牛在耐热性能上有差异。

德宏奶水牛初乳和常乳中五种常量元素含量的动态变化

为了积累德宏奶水牛初乳和常乳中五种常量元素的基础数据,本试验对德宏水牛第1、2、3、5、7天的初乳及第15、30、60、90天的常乳进行测定。结果显示,初乳中钠、镁和磷的含量随泌乳天数的增加呈下降趋势,初乳略高于常乳,常乳中含量在一定范围内变化,差异不显著。钾在初乳中含量略微上升,初乳略高于常乳,常乳中钾含量变化差异不显著。钙含量在初乳中呈上升趋势,初乳中钙含量低于常乳,常乳中钙含量变化差异不显著。

不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织中FATP1基因表达研究

为研究不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织中FATP1基因的表达情况,试验选取216头处于泌乳盛期的健康德宏奶水牛,分为高乳脂率组(H组)、中乳脂率组(M组)和低乳脂率组(L组),采集乳样,用乳品分析仪测定乳脂率,利用气相色谱法测定脂肪酸含量。采集乳腺组织,利用荧光定量PCR法检测FATP1基因的mRNA表达水平,并与乳脂率和脂肪酸含量进行相关性分析。结果表明:H组乳脂率、总脂肪酸含量和长链脂肪酸含量均极显著高于M组和L组(P<0.01),M组显著高于L组(P<0.05)。不饱和脂肪酸含量H组极显著高于L组(P<0.01),显著高于M组(P<0.05),而M组与L组无显著差异(P>0.05)。FATP1基因mRNA表达水平为H组极显著高于L组(P<0.01),而H组与M组、M组与L组均无显著差异(P>0.05)。相关性分析表明,乳脂率与乳中总脂肪酸、长链脂肪酸和不饱和脂肪酸含量间呈极显著正相关(P<0.01),FATP1基因mRNA表达量与乳脂率、脂肪酸总量、长链脂肪酸含量、不饱和脂肪酸含量均呈极显著正相关(P<0.01)。研究表明在乳脂合成的过程当中FATP1基因对脂肪酸的摄取和转运起到重要的调控作用。

德宏奶水牛乳腺组织CD36基因的表达研究

【目的】研究不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织CD36基因的表达差异。【方法】选取同一养殖小区中饲养条件相同的健康德宏奶水牛216头,采集乳样,用乳成分分析仪测定乳脂率;以乳脂率(7.5±0.5)%为基准,将德宏奶水牛分为高、中、低乳脂率组(分别为H、M、L组),每组选取胎次相同、年龄相近、处于泌乳中期的德宏奶水牛各3头,屠宰后采集乳腺组织,提取总RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测CD36基因mRNA表达水平,并与乳脂率进行相关性分析。【结果】H组的CD36基因m RNA表达水平极显著高于M组和L组(P<0.01),M组极显著高于L组(P<0.01)。相关性分析表明:CD36基因表达量与乳脂率呈极显著正相关(P<0.01)。【结论】CD36基因表达对德宏奶水牛乳质量可能具有促进作用。

不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织脂滴形成相关基因的表达研究

本研究旨在探索脂滴形成相关基因嗜乳脂蛋白(BTN1A1)、黄嘌呤脱氢酶(XDH)、围脂滴蛋白1(PLIN1)和PLIN2在不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织中的表达差异。试验选取同一养殖小区的健康德宏奶水牛216头,采集乳样,用乳品分析仪测定乳脂率。根据乳脂率测定结果,分为低乳脂率组(L组,<7.0%)、中乳脂率组(M组,7.5%±0.5%)和高乳脂率组(H组,>8.0%),每组选取第2胎、年龄相近、处于泌乳中期的德宏奶水牛各3头,采集乳样,进行乳脂率测定;屠宰后采集乳腺组织,提取总RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测脂滴形成相关基因的mRNA表达水平,并与乳脂率及脂肪酸含量进行相关性分析。试验结果显示,BTN1A1、XDH、PLIN1和PLIN2基因具有相同的表达趋势:H组>M组>L组;其中H组德宏奶水牛乳腺组织BTN1A1、XDH、PLIN1和PLIN2基因mRNA表达水平均极显著高于M组和L组(P<0.01);M组BTN1A1基因表达水平与L组差异不显著(P>0.05),但XDH、PLIN1和PLIN2基因mRNA表达水平均极显著高于L组(P<0.01)。相关性分析表明,BTN1A1、XDH、PLIN1和PLIN2基因表达水平均与乳脂率、总脂肪酸、长链脂肪酸及不饱和脂肪酸含量呈极显著正相关(P<0.01)。本研究结果表明,BTN1A1、XDH、PLIN1和PLIN2基因在乳腺组织的表达可能对德宏奶水牛的乳脂合成及分泌有显著促进作用,可为深入解析脂滴形成相关基因在泌乳过程中的调控机制提供参考。

德宏奶水牛乳腺组织中H-FABP基因表达研究

为研究不同乳脂含量水平的德宏奶水牛乳腺组织中H-FABP基因的表达差异,本试验采集216头德宏奶水牛的乳样,用乳成分分析仪测定乳脂率,将其中乳脂率在7%~8%的定为中乳脂率组(M组),高于8%的为高乳脂率组(H组),低于7%的为低乳脂率组(L组),并选取同一养殖小区、饲养条件和胎次相同、年龄相仿、泌乳盛期的不同乳脂率的德宏奶水牛各3头,采集乳腺组织,利用实时荧光定量PCR技术检测H-FABP基因的mRNA表达水平,并与乳脂率进行相关性分析。结果显示,H-FABP基因mRNA表达水平H组极显著高于M组和L组(P<0.01),M组极显著高于L组(P<0.01)。相关性分析表明,H-FABP基因表达量与乳脂率呈极显著正相关(P<0.01)。结果表明,H-FABP基因的表达影响乳脂的合成。

德宏奶水牛PRL基因克隆、分子特征及组织差异表达分析

【目的】分离鉴定德宏奶水牛催乳素(prolactin,PRL)基因,并分析其分子特征和组织mRNA表达差异。【方法】采用PCR技术对德宏奶水牛PRL基因完整编码序列(CDS)进行分离鉴定,并利用生物信息学方法和半定量RT-PCR技术分别对水牛PRL进行分子特征以及泌乳期和非泌乳期的组织差异表达分析。【结果】水牛PRL基因CDS长690 bp,编码229个氨基酸。水牛PRL蛋白为亲水性分泌蛋白,无跨膜结构域,含有1个信号肽序列(AA1~30)、5种功能修饰位点和1个prolactin_like结构域(AA32~229),且参与了JAK-STAT和PI3K-AKT-mTOR信号通路。PRL的转录区结构及其编码蛋白的结构和保守结构域在牛科物种中高度相似。水牛PRL基因在所检测的11个组织中均有表达,其中,在乳腺中的表达量呈泌乳期极显著高于非泌乳期(P<0.001)。【结论】水牛PRL与其他牛科物种的PRL功能一致。PRL参与JAK-STAT和PI3K-AKT-mTOR乳蛋白合成信号通路,且水牛PRL在乳腺和肺脏等多种组织中均发挥功能,推测其参与水牛乳蛋白和乳脂合成。

德宏奶水牛TLR8基因乳腺组织表达及生物信息学分析

试验研究不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织中TLR8基因的表达规律及水牛TLR8的结构。利用乳品分析仪测定乳脂率,以7%~8%为中乳脂率组(M组),高于8%为高乳脂率组(H组),低于7%为低乳脂率组(L组)。采用实时荧光定量PCR技术检测TLR8基因表达量,与乳脂率进行相关性分析,利用生物信息学方法分析水牛TLR8的结构特征。结果表明,L组TLR8基因的表达量极显著高于H组和M组(P<0.01)。TLR8基因mRNA的表达水平与乳脂率呈显著负相关(P<0.05)。TLR8分子式为C_(5338)H_(8275)N_(1399)O_(1567)S_(31),分子质量为118 kD,理论等电点为5.90,亲水性总平均值为-0.134。TLR8属于跨膜蛋白,具有信号肽序列MTLRFLLLTSLFLLISDS,第18~19位氨基酸之间存在切割位点。TLR8的胞外区含有12个LRR、3个LRRTYP和1个LRRCT,胞内区具有1个TIR结构域。二级结构以α螺旋为主。TLR8主要与MyD88、IRAK1、IRAK4等蛋白相互作用。研究表明,水牛TLR8结构与TLR家族相似,且德宏奶水牛乳腺组织TLR8基因的表达量随着乳脂率增加呈下降趋势。

浅谈德宏奶水牛种公牛的饲养管理技术

德宏奶水牛是20世纪的1997年德宏州利用印度的摩拉水牛和巴基斯坦的尼里·拉菲水牛与德宏州的德宏水牛杂交育成的奶水牛,德宏奶水牛至今是德宏州,乃至邻近的保山市主要用于挤奶的水牛,也是近年来中国培育的奶水牛中的一个品种。俗话说“母牛好,好一窝;公牛好,好一坡”,有好公牛才能培育出好的母牛,而有了好的公牛没有好的饲养管理技术措施,也不可能繁育出健康、产奶量高等性能优越的好木奶水牛。现将探索奶水牛种用公牛饲养管理技术措施。

不同蛋白水平日粮对德宏奶水牛体重及产奶量的影响

为探讨德宏奶水牛日粮中不同蛋白水平对其体重及产奶量的影响,进而筛选出德宏奶水牛饲料的最佳配方,本试验选择24头健康的德宏奶水牛,随机分成1个对照组和3个试验组,饲喂不同蛋白水平的饲料。结果表明,试验奶水牛在试验前期、中期、后期平均体重变化差异不显著;各组平均产奶量依次为:对照组1 323.78kg/头,试验Ⅰ组1 282.30 kg/头,试验Ⅱ组1 404.65 kg/头,试验Ⅲ组1 632.82 kg/头。说明配方Ⅲ(粗蛋白12.6%±1.2%)产奶效果最好,泌乳曲线也呈现出最佳效果。

不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织中LPL基因表达研究

为了研究脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,LPL)基因在不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织中的表达情况,试验选取216头德宏奶水牛,采集乳样,用乳品分析仪测定乳脂率,德宏奶水牛的乳脂率大部分为(7.5±0.5)%,将其确定为中乳脂率组(M组),而乳脂率>8.0%的确定为高乳脂率组(H组),乳脂率<7.0%的确定为低乳脂率组(L组)。根据乳脂率测定结果,选择同一养殖小区中饲养条件及胎次相同、年龄相近、处于泌乳盛期的不同乳脂率的健康德宏奶水牛各3头,采集乳样,用乳成分分析仪测定乳脂率,采用气相色谱法测定脂肪酸含量;采集乳腺组织,采用实时荧光定量PCR法检测LPL基因mRNA表达水平,采用蛋白免疫印迹法检测LPL蛋白表达水平,并与德宏奶水牛乳中的乳脂率和脂肪酸含量进行相关性分析。结果表明:H组乳脂率、总脂肪酸和长链脂肪酸含量均极显著高于M组和L组(P<0.01),M组显著高于L组(P<0.05);H组不饱和脂肪酸含量极显著高于L组(P<0.01),显著高于M组(P<0.05),而M组与L组间差异不显著(P>0.05)。LPL基因mRNA和蛋白相对表达量均为H组极显著高于L组(P<0.01),而H组与M组、M组与L组间均差异不显著(P>0.05)。乳脂率与乳中总脂肪酸、长链脂肪酸和不饱和脂肪酸含量间呈极显著正相关(P<0.01);LPL基因mRNA表达水平与乳脂率、总脂肪酸含量、长链脂肪酸含量均呈显著正相关(P<0.05),而与不饱和脂肪酸含量无显著相关性(P>0.05)。说明LPL基因在乳脂合成过程中对脂肪酸的摄取和转运具有重要的调控作用。

饲喂不同蛋白水平精料对德宏杂交奶水牛乳品质的影响

选择24头健康的德宏奶水牛(摩/本杂F_1代),根据年龄、体重、胎次和泌乳期相近的原则分为4组,研究在能量基本相同的条件下,饲喂不同蛋白水平精料(对照组:粗蛋白10.2±1.3%;试验Ⅰ组:粗蛋白16.0±1.1%;试验Ⅱ组:粗蛋白14.3±1.5%;试验Ⅲ组:粗蛋白12.6±1.2%),对泌乳奶水牛乳品质(乳干物质含量、乳蛋白率、乳脂率、乳糖率、钙和磷含量)的影响。结果表明:试验期间4个组的乳品质没有显著差异(P>0.05)。也就是说,在相近能量水平的前提下,日粮中不同蛋白营养水平并不会引起德宏杂交F_1代奶水牛的乳品质发生差异性变化。