德氏乳杆菌QS701产ACE抑制肽发酵条件的优化

通过单因素和正交实实验对德氏乳杆菌QS701产ACE抑制肽的发酵条件进行优化,以期提高ACE抑制肽的产量,并对该菌株的生长特征进行探讨。结果显示,影响ACE抑制活性的发酵条件的顺序为:发酵时间>发酵温度>接种量,在此实验中,德氏乳杆菌QS701的最佳发酵条件为:接种量3%、温度43℃、发酵时间72 h,在此条件下ACE抑制率可达到81.58%,所以将此发酵条件应用于ACE抑制肽的制备中。

德氏乳杆菌KY20胞外多糖对C57BL/6小鼠肥胖的预防作用

为探究德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)KY20及其胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)对高脂饮食小鼠肥胖的预防作用,首先对KY20的生长速率、耐酸、耐胆盐活性进行测定,并对其EPS进行提取纯化;采用高脂饮食构建肥胖小鼠模型,设立正常组、模型组、KY20组及其EPS低、中、高剂量组,连续灌胃12周并定期记录小鼠体质量,测定葡萄糖耐量、胰岛素耐量、脏器指数,苏木精伊红染色观察肝脏和脂肪组织变化,试剂盒检测胰岛素、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high⁃density lipoprotein⁃cholesterol,HDL⁃C)、低密度脂蛋白胆固醇(low⁃density lipoprotein⁃cholesterol,LDL⁃C)含量,气相色谱法检测小鼠盲肠内容物中短链脂肪酸(short chain fatty acids,SCFAs)的含量。结果显示,德氏乳杆菌KY20具有较强的耐酸、耐胆盐能力,并对青霉素、庆大霉素等有敏感性;KY20及其胞外多糖能够降低肥胖小鼠的体质量,改善血脂代谢紊乱,有效抑制高脂饮食诱导的肥胖。

氮源对德氏乳杆菌保加利亚亚种B61-3耐冻干能力的影响

本研究针对德氏乳杆菌保加利亚亚种B61-3,分别测定了其对16种氮源的利用情况,筛选出能够提高菌株冻干耐受的氮源种类及添加量,并进一步测定该氮源对菌株冻干粉发酵活力、菌体形态、发酵关键酶活力的影响。结果表明:氮源为30 g/L牛骨蛋白胨时可提高菌株冻干存活率及冻干粉发酵活力,冻干存活率由9.68%提高到18.90%,冻干粉平均发酵活力较对照组提高22.15%;电子显微镜显示,牛骨蛋白胨培养后菌体大小及形态有所改变,对照组发酵菌体表现出不规则、卷曲的形态且菌体较长,而牛骨蛋白胨为氮源时菌体形态呈表面光滑的短杆状,菌体长径比(l/d)和面积体积比(S/V)显著降低(P<0.05),可能与菌株更高的存活率和发酵活力有关。发酵关键酶活力测定结果表明,冷冻干燥显著降低菌株酶活力(P<0.05),牛骨蛋白胨培养菌株冻干后胞内酶活力均显著高于对照组(P<0.05),乳酸脱氢酶、Na^(+)K^(+)-ATP酶及β-半乳糖苷酶分别较对照组提高1.30、1.52及2.75倍,且胞外β-半乳糖苷酶活性低于对照组。结果证实,牛骨蛋白胨培养B61-3菌体能够抵抗冷冻干燥过程对菌体细胞膜造成的损伤,减少酶外泄,从而提高冻干存活率和发酵活力。

德氏乳杆菌的益生功能及其在发酵食品中的应用

德氏乳杆菌是最具经济价值的同型发酵乳酸菌种之一,具有良好的发酵性能和益生功能,在维持畜禽肠道健康、促生长、改善肉品质等方面具有重要作用,被广泛应用于动物和食品发酵生产中。本文介绍了德氏乳杆菌的免疫调节、调节血压、抑制致病菌、促进营养物质吸收和减轻肠道炎症等益生功能,对德氏乳杆菌在发酵乳制品、发酵肉制品、发酵果蔬汁、发酵酒中的应用研究进行综述,以期从传统发酵食品中分离筛选益生特性较好的德氏乳杆菌,进一步探究其对人体的益生功能及作用机制,研发更多功能性食品。

德氏乳杆菌对哺乳仔猪生长性能、血清生化指标、免疫和抗氧化功能的影响

本试验旨在探讨德氏乳杆菌对哺乳仔猪生长性能、血清生化指标、免疫和抗氧化功能的影响。试验选用产期、胎次、产仔数相近的16窝健康新生仔猪,随机分为对照组和试验组,每组8窝,每窝8头。在仔猪1(吃初乳前)、4、8、15日龄依次分别给对照组和试验组仔猪灌服1、2、3、4 mL无菌生理盐水和德氏乳杆菌菌液,并于7、14和21日龄分别从每窝中选取体况相近的1头仔猪进行前腔静脉采血。试验期21 d。结果表明:1)与对照组相比,试验组仔猪断奶个体均重和平均日增重极显著提高(P<0.01),腹泻率和死亡率极显著降低(P<0.01)。2)在7日龄时,试验组仔猪血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性极显著高于对照组(P<0.01),而2组间碱性磷酸酶(ALP)和α-淀粉酶(α-AMY)活性差异不显著(P>0.05);在14日龄时,与对照组相比,试验组仔猪血清ALP、AST和α-AM Y活性显著升高(P<0.05),ALT活性和尿素(Urea)含量2组间差异不显著(P>0.05);在21日龄时,除血清AST活性和Urea含量2组间差异显著(P<0.05)外,其他各指标差异均不显著(P>0.05)。3)在各日龄阶段,试验组和对照组仔猪血清总蛋白和白蛋白含量差异均不显著(P>0.05),但试验组有升高趋势;在7和21日龄时,试验组仔猪血清免疫球蛋白G含量显著高于对照组(P<0.05);在14和21日龄时,试验组仔猪血清免疫球蛋白M含量较对照组显著提高(P<0.05)。4)与对照组相比,试验组仔猪各日龄阶段血清总抗氧化能力显著提高(P<0.05),丙二醛含量极显著降低(P<0.01),超氧化物歧化酶活性无显著差异(P>0.05);在7和21日龄时,试验组仔猪血清谷胱甘肽过氧化物酶活性显著提高(P<0.05),过氧化氢酶活性无显著差异(P>0.05)。结果提示,德氏乳杆菌可改善哺乳仔猪生长性能、增强免疫力和提高抗氧化能力。

德氏乳杆菌对育肥猪胴体性状及肉品质的影响

本试验旨在研究无抗生素饲粮中添加德氏乳杆菌对育肥猪胴体性状、肉品质及背最长肌营养成分的影响。试验选用健康、平均体重为(65.34±3.64)kg的"杜×(长×大)"育肥猪120头,随机分为2个组,每组6个重复,每个重复10头猪(公母各占1/2)。对照组饲喂无抗生素基础饲粮,试验组饲喂在无抗生素基础饲粮中添加0.1%德氏乳杆菌的饲粮。试验期42 d。结果表明:2组育肥猪的胴体性状差异不显著(P>0.05);与对照组相比,试验组育肥猪的脾重率和胰重率显著升高(P<0.05);宰后45 min时2组育肥猪的肉品质差异不显著(P>0.05),宰后24 h时,与对照组相比,试验组育肥猪肉的黄度显著升高(P<0.05),剪切力显著降低(P<0.05);与对照组相比,试验组育肥猪背最长肌中甘氨酸、丙氨酸和风味氨基酸含量显著升高(P<0.05),葵酸和棕榈酸含量显著降低(P<0.05),棕榈油酸、亚油酸和多不饱和脂肪酸含量显著升高(P<0.05)。结果提示,无抗生素饲粮中添加0.1%德氏乳杆菌对育肥猪的胴体性状、肉品质及肉中营养成分具有一定改善作用。

对德氏乳杆菌DM8909菌株的微生物学研究

通过对阴道正常菌群定性、定量研究表明,乳杆菌在阴道正常菌群中的检出率和数量都占有绝对优势,并对致病菌有拮抗作用.乳杆菌对维持阴道微环境,保持其健康状态具有重要意义,乳杆菌作为阴道病防治的微生态调节剂应用具有广泛的应用前景.本文就阴道乳杆菌的分离、生化反应特征、代谢产物分析及菌种鉴定等微生物学研究工作报道如下. 1 材料与方法 1.1 菌种的分离方法根据文献及本课题的阴道菌群与微生态疗法的研究结果 [1],确定乳杆菌为选种对象.用阴道拭子取阴道分泌物,接种于Lbs培养基上,37℃培养72 h.根据乳杆菌的特征筛选菌种.筛选菌落特征为:表面光滑或较光滑、大小不等(1～ 2 m m)、不透明或半透明、革兰染色镜检为G+杆菌、排列不规则、无芽胞、鞭毛及荚膜者列为候选对象,传代保存,以备进一步鉴定和筛选.

人干扰素α-2b基因在德氏乳杆菌的表达与鉴定

目的 :试图用乳酸杆菌在局部分泌干扰素 ,以达到预防和治疗病毒感染。方法 :以 pBLUE/IFNα 2b为模板 ,采用PCR技术将IFNα 2b基因扩增然后插入乳酸菌表达载体 pSC111AE ,将重组质粒电转德氏乳杆菌DM 890 9,获得重组菌株。在含乳糖的MRS培养基培养并诱导表达 ,表达产物分泌到菌液上清。结果 :分别用PCR和ELISA鉴定目的基因和表达产物 ,利用WISH VSV系统采用细胞病变抑制法 ,测定表达产物IFNα 2b的抗病毒活性 ,平均效价为 1 4 1× 10 5IU/ml。结论 :本研究为以乳酸杆菌为载体在局部产生治疗性药物奠定了基础。

德氏乳杆菌对育肥猪生长性能、养分消化率、血清生化指标及肠道结构的影响

本研究旨在探讨德氏乳杆菌对育肥猪生长性能、养分消化率、血清生化指标及肠道结构的影响。试验选用120头健康、体重相近的育肥猪,随机分为2组,每组6个重复（栏）,每重复10头（公母各占1/2）。对照组饲喂基础饲粮（无抗）,试验组饲喂含0.1%德氏乳杆菌制剂的基础饲粮,试验为期42d,在第12～14天（前期）、第26～28天（中期）和第40～42天（后期）分别收集每栏新鲜粪便,并于第42天采血,试验结束后每栏选取体重相近的阉公猪屠宰。结果显示：1）与对照组相比,试验组生长性能得到改善,但差异不显著（P〉0.05）。2）与对照组相比,试验组前期和中期的粗蛋白质（CP）和粗脂肪（EE）消化率均显著提高（P〈0.05）,总能（GE）和粗灰分（ash）消化率均极显著提高（P〈0.01）,2组的粗纤维（CF）消化率在前期差异显著（P〈0.05）,中期差异不显著（P〉0.05）;试验后期,除ash的消化率极显著提高（P〈0.01）外,其他各养分消化率差异不显著（P〉0.05）。3）试验组血清尿素（urea）含量及碱性磷酸酶（ALP）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性均高于对照组,但差异不显著（P〉0.05）。4）与对照组相比,试验组十二指肠、空肠和回肠的黏膜厚度均增加,但差异不显著（P〉0.05）;十二指肠隐窝深度显著降低（P〈0.05）,空肠绒毛高度极显著增加（P〈0.01）;十二指肠、空肠和回肠绒毛高度/隐窝深度（V/C）均极显著或显著增加（P〈0.01或P〈0.05）。结果表明：德氏乳杆菌可改善育肥猪肠道结构形态,促进饲粮养分的消化吸收和代谢,改善育肥猪的生长性能。

德氏乳杆菌对育肥猪生产性能、血脂指标及粪和组织中总胆固醇和总胆汁酸含量的影响

本试验旨在研究德氏乳杆菌对育肥猪生产性能、血脂指标及粪和组织中总胆固醇（TC）和总胆汁酸（TBA）含量的影响。试验选用健康、平均体重为（65.34±3.64） kg的杜×（长×大）育肥猪120头,随机分为2组,每组6个重复,每个重复10头（公母各占1/2）。对照组饲喂无抗基础饲粮,试验组饲喂无抗基础饲粮＋0.1%德氏乳杆菌制剂。预试期7 d,试验期42 d。试验期间,依次采集育肥猪在第14、28和42天的前腔静脉血（每组公母各3头）,第12～14天、第26～28天和第40～42天的新鲜粪便（每重复）；试验结束后,每重复选取1头体重接近平均体重的阉公猪进行屠宰,分离肝脏、背最长肌和心脏。结果表明：1）与对照组相比,试验组平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）及料重比（F/G）无显著差异（P〉0.05）,而腹泻率和发病率则极显著或显著降低（P〈0.01或P〈0.05）。2）试验第14、28和42天,2组间血清TC、甘油三酯（ TG）、低密度脂蛋白胆固醇（ LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（ HDL-C）含量和HDL-C/LDL-C差异不显著（ P〉0.05）,而血清TBA含量在试验第14和42天差异显著（ P〈0.05）。3）试验第12～14天,试验组粪中TBA含量显著提高（ P〈0.05）,TC含量极显著降低（ P〈0.01）；第26～28天,2组间粪中TBA和TC含量差异不显著（P〉0.05）；第40～42天,试验组粪中TBA含量较对照组显著提高（P〈0.05）,TC含量差异不显著（P〉0.05）。4）2组间肝脏、心肌和背最长肌中TC含量以及肝脏中TBA含量差异不显著（ P〉0.05）。结果提示：饲粮中添加0.1%德氏乳杆菌制剂具有改善育肥猪生产性能和血脂状况、促进粪胆固醇和胆汁酸排泄的功效。

德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵乳风味成分分析

本实验采用同时蒸馏萃取-气谱-质谱(SDE-GC-MS)联用技术对5株德氏乳杆菌保加利亚亚种L.b-01、L.b-3、L.b-MYC、L.b-SP1.1和L.b-M01A发酵乳中风味物质进行了定性和定量测定,经分析分别有13、19、11、9、12种成分为发酵乳的风味物质,共涉及酸类化合物、酯类化合物、醇类化合物、羰基化合物、芳环和杂环化合物6大类、22种物质。除L.b-M01A菌产乙醇、乙酸含量较高外,其他各菌株间未发现存在明显的代谢差异。

德氏乳杆菌对育肥猪血脂指标、胆固醇代谢和脂肪沉积相关酶活性及基因mRNA表达的影响

本试验旨在研究饲粮中添加德氏乳杆菌制剂对育肥猪血脂指标、肝脏胆固醇代谢和脂肪沉积相关酶活性、组织胆固醇代谢和脂肪沉积相关基因mRNA表达和皮下脂肪组织形态的影响。试验选用120头平均体重为(65.34±3.64)kg的健康"杜×(长×大)"育肥猪,随机分为2组,每组6个重复(栏),每个重复10头(公母各占1/2)。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮中添加0.10%德氏乳杆菌制剂的饲粮,预试期7d,试验期42d。结果显示:1)与对照组相比,试验组育肥猪的血清甘油三酯(TG)(P=0.08)和总胆固醇(TC)(P=0.06)含量均有降低趋势,血清总胆汁酸(TBA)含量显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,试验组育肥猪的肝脏羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)活性有降低趋势(P=0.07),胆固醇7α-羟化酶活性(CYP7A1)显著增加(P<0.05),脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)活性极显著降低(P<0.01)。3)与对照组相比,试验组育肥猪的回肠胆汁酸结合蛋白(IBABP)的mRNA相对表达量有降低趋势(P=0.07),皮下脂肪过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的mRNA相对表达量显著增加(P<0.05);皮下脂肪细胞直径有降低趋势(P=0.09)。结果提示,德氏乳杆菌可通过干扰育肥猪回肠对胆汁酸的吸收来调控肝脏胆固醇和脂肪代谢。

响应面法优化德氏乳杆菌保加利亚亚种增殖培养基

采用响应面方法对德氏乳杆菌保加利亚亚种LB14增殖培养基进行了优化。以MRS培养基作为基础培养基,采用Plackett-Burman(PB)设计法,对12种乳酸菌生长促进因子以及培养基的初始pH等13个因素对德氏乳杆菌保加利亚亚种LB14生长的影响进行评价。筛选出番茄汁与胡萝卜汁为LB14的生长强化因子,且培养基的初始pH值也是影响该菌体生长的关键因子,而其它物质对LB14增菌量的影响不显著。然后用旋转中心组合设计及响应面分析法确定强化因子的最佳浓度以及最佳的培养基初始pH值。在优化培养基中,LB14的菌体浓度达到1.1×109cfu/ml,比优化前的2.4×108cfu/ml提高了近5倍。

单亲灭活德氏乳杆菌和乳酸乳球菌原生质体融合条件优化

利用单亲灭活原生质体技术对德氏乳杆菌FQ菌株和乳酸乳球菌FL菌株的原生质体进行融合,考察原生质体制备、再生和融合条件的影响因素。结果表明:制备德氏乳杆菌FQ菌株原生质体最适条件为温度37℃,在含有10μg/mL变溶菌素和1mg/mL溶菌酶溶液中超声处理90min。在此条件下,原生质体再生率可达6.36%。乳酸乳球菌FL菌株添加1mg/mL甘氨酸处理后,用10mg/mL溶菌酶37℃恒温酶解90min,原生质体形成率可达99.97%。65℃处理乳酸乳球菌FL菌株原生质体120min,原生质体灭活率可达96.89%。融合实验结果表明,在PEG6000 400g/L(含0.02mol/L MgCl2和0.01mol/L CaCl2)、融合时间5min、融合温度20℃、pH6.5的条件下促融,德氏乳杆菌FQ菌株和乳酸乳球菌FL菌株原生质体的融合率可达2.72×10-6。

德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的非融合表达

目的在大肠杆菌中非融合表达德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶,为构建能高效表达β-半乳糖苷酶的食品级益生菌株奠定基础。方法选择德氏乳杆菌保加利亚亚种(1.1480和wch9901)β-半乳糖苷酶基因(lacZ)起始密码ATG上游-18bp到ATG下游1bp的一段包含SD位点和ATGA位点的序列为上游引物,PCR扩增lacZ,插入表达质粒pMG36e构建重组表达质粒。转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,提取重组质粒进行酶切鉴定和测序,并测定转化菌β-半乳糖苷酶活性。结果重组质粒酶切鉴定合格;其中插入的外源片段序列与德氏乳杆菌保加利亚亚种lacZ标准序列符合率达99%以上;携带重组质粒pMG36e-lacZ1.1480的大肠杆菌DH5α酶活性为3.074U/mL,酶比活性为6.939U/mgpro;携带重组质粒pMG36e-lacZwch9901的大肠杆菌DH5α酶活性为4.755U/mL,酶比活性为8.537U/mgpro。结论成功在大肠杆菌中非融合表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶;本研究选择的SD位点和ATGA位点能在大肠杆菌中有效地引导蛋白的非融合表达。

德氏乳杆菌增殖培养基的优化研究

采用响应曲面法对德氏乳杆菌增殖培养基进行了优化。以麦芽培养基作为基础培养基(取代了传统的MRS培养基),采用Plackett-Burman(PB)设计法,研究了12种乳酸菌促进因子以及培养基的初始pH值对德氏乳杆菌RFX1生长的影响。经试验筛选出了影响该菌体生长的关键因子:牛肉膏、酵母膏、大豆蛋白胨及培养基的初始pH值,而其它物质对RFX1增菌量的影响不显著。然后用旋转中心组合设计及响应面分析法确定强化因子的最佳浓度以及最佳的培养基初始pH值。RFX1的菌体在优化培养基中培养后,浓度达到1.61×109 cfu/mL,比优化前的3.53×108 cfu/mL提高了近5倍。

德氏乳杆菌亚油酸异构酶酶学性质

对从德氏乳杆菌保加利亚亚种中提取出来的亚油酸异构酶进行酶学性质研究。结果表明,该酶最适pH为6.0;最适温度为40℃,此时酶活力最高;金属离子Mg2+、Na+、Zn2+可使酶活力有所提高,Fe2+和Mn2+离子对酶促反应有明显的抑制作用;以Lineweaver-Burk双倒数作图法求得亚油酸异构酶的Km为0.0285 mol.L-1,Vm为2.31 mg.mL-1.h-1。

弱化H^＋-ATPase的德氏乳杆菌乳酸亚种的生理特性研究

以德氏乳杆菌乳酸亚种(L5)为出发菌株,以新霉素为选择"压力",获得了弱化H+-ATPase变异菌株5M1、5M6和5B1。与出发菌株L5(对照)相比,各变异株的H+-ATPase活力分别下降51.3%、27.7%和34.3%。对变异株5M1、5M6和5B1的形态及其生理特性研究表明,变异株的细胞较菌株L5细长。L5的ATP含量为0.63×10-18mol/个,明显低于变异菌株;变异株5M6和5B1的ATP含量分别为1.18×10-18mol/个和1.38×10-18mol/个;变异株5M1的ATP含量最高,约为1.60×10-18mol/个。当各菌株在MRS培养基中37℃培养12 h后,变异株表现出较高的谷氨酸到γ-氨基丁酸的转化率,其中变异株5M6最高,为16.73%,变异株5M1和5B1谷氨酸转化率居中,分别为15.6%和15.4%,出发菌株L5的谷氨酸转化率最低,为13.91%。与出发菌株L5相比,变异株5M6、5M1和5B1的H+-ATPase活性下降导致其耐酸性和耐盐性降低。

一株从酸奶中分离的德氏乳杆菌保加利亚亚种的鉴定和系统发育分析

目的对一株分离自酸奶经表型特征鉴定为德氏乳杆菌保加利亚亚种的菌株(wch9901)进行16S rDNA鉴定和系统发育分析。方法提取wch9901基因组DNA作为模板,以16S rDNA两端的保守序列作为PCR引物,扩增菌株的16S rDNA序列。在T4连接酶的作用下,将扩增得到的16S rDNA序列插入克隆载体pGEM-T,构建重组质粒pGEM-wch990116S rDNA。重组质粒酶切鉴定合格后,交由测序公司对插入的16S rDNA序列进行测序。测序结果于GenBank中Blastn,并用软件Mega3.1构建系统发育树。结果wch9901 16S rDNA序列与Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus中所有菌株的16S rDNA序列同源性均达96%以上;在系统发育树上wch9901单独形成一个分枝,位于Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LGM2遗传分枝和Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus DL2所在的独立小遗传簇及Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus JSQ所在的独立小遗传簇构成的分枝之间,并与Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LGM2遗传分枝距离最近。结论wch9901属于Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus;wch9901与Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LGM2具有最近的亲缘关系。