心脏瓣膜病心房颤动患者心房肌超极化激活环化核苷酸门控通道基因表达的研究

目的研究心脏瓣膜病心房颤动（房颤）患者心房肌超极化激活环化核苷酸门控通道（HCN）各亚型及其调控因子环腺苷酸（cAMP）的基因转录，探讨房颤患者心房肌超极化激活电流（If）改变的分子机制。方法心外科心脏瓣膜病需开胸换瓣的病人45例，分为两组，其中房颤者27例，窦性心律者18例，术中取左心房组织，采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）测定HCN1、HCN2、HCN4、cAMP的mRNA的含量。结果同窦性心律组相比，房颤组患者心房肌HCN2、14CN4的mRNA表达水平上调（P〈0．05），HCN1、cAMP的mRNA表达水平在房颤组患者中亦有增高，但差异无统计学意义（P〉0．05）。HCN2的mRNA表达与左心房内径呈正相关（r=0．441，P=0．002）。结论心房肌HCN2、HCN4的mRNA表达水平上调可能是心脏瓣膜病房颤患者心房肌If电流改变的重要分子基础，通过If的改变进一步参与心房的电重构。

超极化激活环化核苷酸门控通道2基因转染后293T细胞中目的基因的表达

背景:研究证实超极化激活环化核苷酸门控通道电流在调控心脏的自发搏动中起着非常重要的作用。目的:观察超极化激活环化核苷酸门控通道2基因重组质粒转染后293T细胞中目的基因在核酸和蛋白质水平的表达。方法:采用脂质体转染试剂Lipofectamine2000将含全长超极化激活环化核苷酸门控通道2基因的质粒CMV-hHCN2-3xHA-IRES-EGFP转染至293T细胞中。结果与结论:用脂质体转染试剂Lipofectamine2000成功地将质粒CMV-hHCN2-3xHA-IRES-EGFP转染至293T细胞中。反转录PCR定性地检测到在100-250bp处可见高度特异DNA的条带,与携带超极化激活环化核苷酸门控通道2基因的质粒扩增出的片段位置相同。经过RT-PCR、Western-blot方法检测提示超极化激活环化核苷酸门控通道2基因在mRNA和蛋白水平都有高表达。表明质粒CMV-hHCN2-3xHA-IRES-EGFP成功转染后的293T细胞中超极化激活环化核苷酸门控通道2基因可以在核酸和蛋白水平表达。

心脏瓣膜病心房颤动患者左心房HCN通道及5-HT4一R表达的研究

目的研究心脏瓣膜病心房颤动（房颤）患者左心房肌超极化激活环化核苷酸门控通道（HCN）各亚型及其调节受体5一羟色胺4受体（5-HT4一R）基因表达及蛋白表达。方法86例心脏瓣膜置换术后患者，窦性心律38例，房颤48例，术中取左心耳组织，用实时定量聚合酶链反应（pcR）和蛋白免疫印记法（westernblot）的方法测定HCN通道各亚型及5-HT4．R基因表达和蛋白表达。结果同窦性心律组相比，房颤组患者心房肌HCN2、HCN4的mRNA表达及蛋白表达水平上调，5-HT4-RmRNA表达及蛋白表达水平下调，HCNl的mRNA表达及蛋白表达在房颤组患者中亦有增高，但差异无统计学意义。HCN2的mRNA表达及蛋白表达与左心房内径呈正相关。5-HT4-RmRNA表达水平下调与左心房内径呈负相关。结论左心房肌HCN2、HCN4的mRNA表达及蛋白表达上调及5-HT4．RmRNA表达及蛋白表达水平下调可能是瓣膜病房颤患者左心房肌电重构的分子基础之一。