非肌型肌球蛋白轻链激酶的结构、功能及其生理与病理学意义

肌球蛋白轻链激酶(myosin light-chain kinase,MYLK)在哺乳动物中由MYLK基因编码,编码的产物主要包括长链非肌型肌球蛋白轻链激酶(non-muscle myosin light-chain kinase,nm MYLK,220 kDa),短链平滑肌型肌球蛋白轻链激酶(smooth muscle myosin light-chain kinase,sm MYLK,130 kDa)及端蛋白(telokin)(17 kDa)。其中nm MYLK的特殊N端结构域赋予其参与更多病理生理学过程的特性,包括炎症、细胞黏附、肿瘤细胞浸润、动脉粥样斑块形成等。本文综述nmMYLK的结构、功能研究进展,梳理nmMYLK与炎症、癌症及其他疾病间的关系。

心肌型肌球蛋白轻链激酶调控肌球蛋白轻链对心肌肥大的影响

目的探讨心肌型肌球蛋白轻链激酶(cardiac myosin light chain kinase,cMLCK)对AngⅡ诱导的心肌肥大的作用。方法纯化cMLCK作为激酶,体外激酶反应实验探索cMLCK活性位点。制作野生型cMLCK(WT-cMLCK)及敲除了氨基端(N端)的变异体(ΔNT-cMLCK)腺病毒,感染原代心肌细胞,并用随机数法随机分为6组:对照组、AngⅡ组、WT-cMLCK组、WT-cMLCK+AngⅡ组、ΔNT-cMLCK组、ΔNT-cMLCK+AngⅡ组,每组3个样本。RT-PCR检测心衰因子表达;Western blotting检测cMLCK及底物的表达;免疫荧光检测细胞表面积。结果WT-cMLCK在体外体系能对其底物MLC2v进行磷酸化;而ΔNT-cMLCK对MLC2v的磷酸化作用消失;使用AngⅡ处理后,可见细胞面积增大[(1787.0±142.6)μm^(2)vs.(2458.0±211.3)μm^(2),P<0.001],ANP、β-MHC表达上调(均P<0.05);cMLCK及p-MLC2v表达上调(均P<0.05);过表达WT-cMLCK可逆转心肌肥大[(2527.0±116.4)μm^(2)vs.(1775.0±88.5)μm^(2),P<0.001];敲除N端可使cMLCK的保护作用丧失[(1775.0±88.5)μm^(2)vs.(2613.0±118.4)μm^(2),P<0.001]。结论过表达cMLCK可改善AngⅡ诱导的心肌肥大,该作用依赖于其N端。

牛心肌肌球蛋白轻链激酶的提纯及其一些生物化学性质的研究

本文采用离子交换柱层析、硫酸铵盐析、亲和层析等方法,从牛心肌中提取、纯化了肌球蛋白轻链激酶(MLCK),酶的比活性为12nmolPi/mg Min^(-1).提纯倍数为499倍,对底物ATP的km值为220μmol/L,MLCK为Ca^(2+)、钙调蛋白依赖性酶,在EGTA存在时,激酶无活性。同时还发现.低Mg^(2+)浓度时.MLCK 活性升高.高Mg^(2+)(4.5mmol/L以上)时,MLCK活性反而下降。

硫化氢对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶表达的影响

目的:观察外源性硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)表达的影响。方法:32只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DM组)、Na HS治疗组(DM+Na HS组)和Na HS对照组(Na HS组),每组8只。采用链脲佐菌素55 mg/kg腹腔注射诱导1型糖尿病大鼠模型。造模成功后,DM+Na HS组和Na HS组大鼠腹腔注射Na HS溶液28μmol/kg干预治疗。8周后,测定大鼠左心室功能指标;计算心体比;测定血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB isozyme,CK-MB)水平;透射电镜观察心肌细胞超微结构变化;RT-PCR和Western印迹分别检测心肌组织MLCK m RNA和蛋白表达。结果:与NC组比较,Na HS组各项指标差异无统计学意义(均P>0.05),而DM组左心室收缩和舒张功能下降,心体比明显增大(均P<0.01),血清中LDH和CK-MB水平明显增高(均P<0.01),心肌超微结构损伤明显,心肌组织MLCK m RNA和蛋白表达明显降低(均P<0.01)。与DM组比较,DM+Na HS组左心室功能和心肌超微结构损伤明显改善,心体比明显降低(均P<0.05),血清中LDH和CK-MB水平明显下降(均P<0.01),MLCK m RNA和蛋白表达明显升高(均P<0.01)。结论:外源性H2S对糖尿病大鼠心肌损伤具有保护作用,机制可能与增强心肌MLCK表达有关。

同型半胱氨酸对内皮细胞肌球蛋白轻链激酶表达的影响

目的研究同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)运动能力以及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的影响。方法不同浓度的Hcy处理人脐静脉内皮细胞后,MTT法检测Hcy对HUVEC增殖的影响,划痕实验检测Hcy对细胞迁移的影响,免疫组化法及Western blot法检测MLCK表达的变化。结果随着浓度的升高,Hcy对HUVEC的增殖有显著的抑制作用,对HUVEC的迁移有明显的促进作用,免疫组化法及Western blot法结果显示Hcy可以增强MLCK的表达。结论 Hcy对HUVEC的迁移具有促进作用,可能是Hcy通过上调MLCK的表达所致。

肌球蛋白轻链激酶在血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥厚中的作用及机制

目的探讨肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)在血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导心肌肥大中的作用及机制。方法原代培养的乳鼠心肌细胞分成3组:对照组、AngⅡ组和AngⅡ+MLCK抑制剂(ML-7)组(AngⅡ+ML-7组)。免疫荧光染色计算心肌细胞横截面积;定量反转录聚合酶链反应(quan-titative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测心肌肥大标志物[心房利尿钠肽(atrial di-uretic natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)]mRNA含量;Western blotting检测心肌细胞MLCK、肌球蛋白调节性轻链(regulatory myosin lightchain,MLC2)、磷酸化MLC2(P-MLC2)以及凋亡标志物(Bax、Bcl-2与caspase-3)蛋白表达。结果与对照组组相比,AngⅡ组心肌细胞横截面积、肥大标志物m RNA表达、促凋亡因子Bax以及caspase-3蛋白表达显著增加,且抗凋亡的Bcl-2表达含量降低,并伴随MLCK、P-MLC2蛋白表达降低。给予MLCK抑制剂ML-7处理后,与AngⅡ组相比,心肌肥大、凋亡指标均进一步增加,而MLCK、P-MLC2蛋白表达含量显著下调(总MLC2表达无明显变化)。结论抑制MLCK可能加剧Ang Ⅱ诱导的心肌肥厚及凋亡,其机制与抑制MLCK/MLC2通路密切相关。

核肌球蛋白轻链在心肌缺血/再灌注中的作用机制

目的：探讨核肌球蛋白调节轻链（NMLC20）在心肌缺血/再灌注损伤中的作用及其对NOX2的表达机制.方法建立SD大鼠心肌缺血/再灌注或心肌细胞低氧/复氧损伤模型,并用ML7或基因沉默等进行干预.检测心肌梗死损伤,NOX2mRNA和蛋白表达水平以及胞质、胞核MLC20蛋白和磷酸化水平等指标.利用免疫共沉淀、DNApull-down和荧光素报告酶基因等评估MLC20对NOX2的表达调节机制.结果IR处理后,大鼠心肌损伤增加伴随NOX2表达和p-NMLC20水平升高,胞质p-MLC20水平降低.上述现象能被ML-7逆转;HR处理后,心肌细胞凋亡增加伴随NOX2表达和p-NMLC20水平升高,胞质p-MLC20水平降低,上述现象可被ML-7或MLC20siRNA逆转;免疫共沉淀等结果显示p-NMLC20能与RNApolII形成复合物,通过结合NOX2基因启动子区域特定序列促进NOX2表达.结论心肌缺血/再灌注时,核肌球蛋白通过其调节轻链磷酸化,与RNA聚合酶II形成转录起始复合物,进而识别结合NOX2基因启动子特定序列促进NOX2表达.

脂质过氧化对培养心肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化系统的影响

应用氢过氧化枯烯（ＣＨＰＯ）作为机体产生自由基的引发剂，作用于培养的心肌细胞，激起和促使细胞遭受过氧化损伤，同时使用硒（Ｓｅ）、维生素Ｅ（ＶＥ）等抗自由基物质，观察细胞中肌球蛋白轻链磷酸化系统的变化。结果表明，ＣＨＰＯ引发的自由基以及脂质过氧化反应，造成肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和ＡＴＰ酶活性显著下降，Ｓｅ、ＶＥ以及二者联合应用，可使心肌细胞抗自由基损伤的能力极大增强，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性都有不同程度的提高。提示：ＣＨＰＯ引发的自由基已造成了对心肌细胞肌球蛋白磷酸化系统的损害，Ｓｅ和ＶＥ的应用，对保护肌球蛋白分子的完整结构和其生化功能起着重要作用。

异丙基肾上腺素对大鼠心肌肌球蛋白磷酸化系统影响的研究

本研究给予不同剂量的异丙基肾上腺素(ISP),造成大鼠不同程度的心肌损伤,动态观察心肌匀浆中肌球蛋的白轻链激酶(MLCK)和肌动球蛋白ATP酶的活性变化。结果表明,低剂量ISP导致MLCK和ATP酶活性下降,心肌组织病理切片基本正常。高剂量注射ISP、MLCK和ATP酶活性显著下降,与正常对照组和低剂量组相比,差异显著(P<0.01)。在病理形态学上,大鼠心肌组织有多处较大的坏死灶。提示,在未发生明显的病理性变化前,心肌细胞内就已发生了一系列的代谢紊乱,如酶活性下降。当心肌组织出现病理形态学改变时,细胞内酶活性的显著下降,表明由可逆性损害发展到不可逆的心肌坏死。

生血通便颗粒对血虚肠燥型慢传输型便秘大鼠结肠肌电及Ca^(2+)/CaM/MLCK信号通路的影响

目的观察生血通便颗粒对血虚肠燥型慢传输型便秘(STC)大鼠结肠肌电及Ca^(2+)/CaM/MLCK信号通路的影响,探讨其治疗STC的作用机制。方法采用洛哌丁胺灌胃结合尾部放血法建立血虚肠燥型STC大鼠模型。将大鼠分为对照组、模型组、枸橼酸莫沙必利组和生血通便颗粒组,每组8只,给药组分别予相应药物灌胃,连续14 d。观察大鼠治疗前后一般状况,检测大鼠粪便含水量,生物机能实验系统检测结肠肌电慢波频率、振幅及变异系数,测定肠道推进率,HE染色观察结肠组织病理变化,比色法检测结肠平滑肌细胞Ca^(2+)浓度,Western blot检测结肠平滑肌组织缝隙连接蛋白43(Cx43)、钙调蛋白(CaM)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、磷酸化肌球蛋白轻链20(p-MLC20)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠体质量、粪便含水量和肠道推进率显著降低(P<0.01),结肠肌电慢波频率减慢、频率变异系数增加(P<0.01),慢波振幅和振幅变异系数增加(P<0.01);结肠黏膜结构受损,可见炎性改变,糜烂明显,结肠平滑肌细胞内Ca^(2+)浓度及Cx43、CaM、MLCK、p-MLC20蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,枸橼酸莫沙必利组和生血通便颗粒组大鼠体质量、粪便含水量和肠道推进率显著升高(P<0.05,P<0.01),结肠肌电慢波频率加快、频率变异系数减小(P<0.01),慢波振幅和振幅变异系数减小(P<0.05,P<0.01);结肠黏膜结构较完整,糜烂情况改善,结肠平滑肌细胞内Ca^(2+)浓度及Cx43、CaM、MLCK、p-MLC20蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论生血通便颗粒可改善血虚肠燥型STC大鼠症状,恢复结肠动力,其机制可能与调节结肠肌电节律性、激活Ca^(2+)/CaM/MLCK信号通路相关。

衰老时心肌肌球蛋白轻链激酶(cMLCK)参与调控心肌收缩力的作用机制研究

目的探究衰老时心肌肌球蛋白轻链激酶(cMLCK)及其下游通路参与调控心肌收缩力的作用机制,旨在揭示衰老时心肌收缩力与cMLCK表达及其活性的关系。方法 23只雄性Wistar大鼠分为两组,分别饲养至4和30个月并行心动超声、组织切片、蛋白检测及核酸检测等试验。大鼠乳鼠心肌细胞培养,分为四组:正常对照组、正常疾病组(缺血缺氧)、衰老组(DOX刺激)和衰老疾病组(DOX+缺血缺氧),实验后收取细胞进行rt-PCR和蛋白Western blot检测。结果衰老组(30个月龄)左室收缩末期内径(LVEDs)、左室舒张末期内径(LVEDd)、收缩末左室后壁厚度(LV PWs)和左室重量(LV mass)相较于年轻组(4个月龄)增大(all P<0.01)。另外,左室射血分数(EF)及短轴缩短率(FS)在衰老组更低(all P<0.01)。心脏标本免疫组化Masson染色提示,衰老组纤维化明显增加(P<0.01)。蛋白检测结果提示,衰老组cMLCK蛋白较年轻组表达下降,其下游心肌肌球蛋白轻链2(MLC2)的磷酸化在衰老组相应降低,而MLC2蛋白表达未明显变化。缺血缺氧后衰老组与年轻组cMLCK蛋白表达与MLC2磷酸化(p-MLC)皆上升(all P<0.05),两组±dp/dt在缺血缺氧后都下降,且衰老组±dp/dt数值皆低于年轻组(all P<0.01)。心肌细胞分组培养后,衰老组相比正常组出现心肌细胞明显数量减少和细胞肥大,搏动减弱,衰老疾病组表现出心肌细胞进一步凋亡和肥大,而正常疾病组并未出现以上变化,但出现星状结构增多且有序,搏动速度增加。结论衰老时心肌收缩力的减弱与MLCK表达及其活性减弱有关,同时,在缺血缺氧条件下,衰老的心肌表现出更差的适应性。

血清cMyBP-C、H-FABP、CK-MB及BNP联合检测在早期急性心肌梗死患者诊断中的应用研究

目的探讨血清心脏肌球蛋白结合蛋白C(cMyBP-C)、心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、脑钠肽(BNP)联合检测在早期急性心肌梗死(AMI)患者诊断中的应用价值。方法选取2020年1月至2022年1月于本院收治的65例AMI患者作为观察组,同期非AMI患者65例作为对照组。所有患者均采血检测cMyBP-C、H-FABP、CK-MB及BNP水平,比较两组及不同Killip分级AMI患者血清学指标;绘制ROC曲线分析cMyBP-C、H-FABP、CK-MB、BNP及联合检测诊断早期AMI的临床价值。结果观察组cMyBP-C、H-FABP、CK-MB及BNP水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);65例AMI患者,其中Killip分级Ⅰ级29例,Ⅱ级24例,Ⅲ级12例;Ⅲ级患者cMyBP-C、H-FABP、CK-MB及BNP水平高于Ⅱ级、Ⅰ级患者,差异有统计学意义(P<0.05);绘制ROC曲线显示,cMyBP-C、H-FABP、CK-MB、BNP及联合检测诊断AMI的曲线下面积AUC分别为0.778、0.757、0.753、0.729、0.920,联合检测诊断价值最高。结论血清cMyBP-C、H-FABP、CK-MB、BNP在早期AMI诊断中具有一定价值,联合检测可进一步提高诊断灵敏度和特异度,并能够在一定程度上反映AMI的严重程度。

西格列他钠治疗T2DM患者的效果及对血清FKN、FGF-21、nskMLCK水平的影响分析

目的:研究西格列他钠治疗2型糖尿病(T2DM)患者的效果及对血清不规则趋化因子(FKN)、成纤维细胞生长因子(FGF-21)、非骨骼肌型肌球蛋白轻链激酶(nskMLCK)水平的影响。方法:选取医院2022年5月~2023年3月收治的89例T2DM患者作为研究对象。将其以电脑编号随机分为A组(n=44)及B组(n=45)。B组予以二甲双胍治疗,A组则于B组的基础上增用西格列他钠治疗。对比两组疗效,血糖指标,血清FKN、FGF-21、nskMLCK水平,α、β细胞功能。结果:A组治疗总有效率高于B组(90.91%vs 71.11%)(P<0.05)。治疗10周后两组各项血糖指标水平均低于治疗前,且A组低于B组(P<0.05)。治疗10周后两组血清FKN、FGF-21、nskMLCK水平均低于治疗前,且A组低于B组(P<0.05)。治疗10周后两组HOMA-IR、胰高血糖素均低于治疗前,且A组低于B组;治疗10周后两组HOMA-β高于治疗前,且A组高于B组(P<0.05)。结论:西格列他钠治疗T2DM患者的效果显较好,且能负向调控血清FKN、FGF-21、nskMLCK水平,改善α、β细胞功能。

同型半胱氨酸调控MEK-ERK-MLCK通路影响结肠炎大鼠肠黏膜通透性的实验研究

目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是否通过调控MEK-ERK-MLCK通路影响结肠炎大鼠肠黏膜通透性的机制。方法 SD大鼠分为4组,A组为正常对照组(NS皮下注射+NS灌肠),B组为正常对照+Hcy注射组(Hcy皮下注射+NS灌肠),C组为TNBS模型组(NS皮下注射+TNBS灌肠),D组为TNBS模型+Hcy注射组(Hcy皮下注射+TNBS灌肠)。建立高Hcy血症的实验性结肠炎大鼠模型,实验结束时取大鼠结肠组织病理学检查,并进行结肠匀浆检测MPO活性,采用Western blot方法检测大鼠小肠组织中MEK、ERK、p-ERK、MLCK、p-MLCK的蛋白表达水平,采用RT-q PCR方法检测大鼠小肠组织中MLCK mRNA表达。结果与正常对照组及模型对照组相比,TNBS模型+Hcy皮下注射组大鼠DAI及HI评分增高,结肠匀浆MPO活性增高,小肠黏膜组织MEK、ERK、p-ERK、MLCK、p-MLCK蛋白表达水平增加,MLCK mRNA相对表达量增加。结论 Hcy增加实验性结肠炎大鼠肠黏膜通透性,可能与调控MEK-ERKMLCK信号通路有关。

枳术方对慢传输型便秘大鼠结肠5-HTR及下游CaM-MLCK信号通路的影响

目的通过观察枳术方对慢传输型便秘(STC)大鼠结肠组织中5-羟色胺4受体(5-HT_(4)R)、钙调蛋白(CaM)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的影响,探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、枳术方组及阳性药(普芦卡必利)组。采用复方地芬诺酯片建立STC模型,枳术方组随后灌胃枳术方,阳性药组灌胃普芦卡必利。检测各组大鼠粪便含水量,肠道炭末推进率,结肠组织中5-HT_(4)R、CaM、MLCK的mRNA及蛋白相对表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠粪便含水量和炭末推进率明显降低(P<0.05,P<0.01),结肠组织中5-HT_(4)R、CaM、MLCK的mRNA和蛋白相对表达水平也明显降低(P<0.01)。与模型组相比,枳术方组和阳性药组大鼠粪便含水量和炭末推进率明显升高(P<0.05),结肠组织中5-HT_(4)R、CaM、MLCK的mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。枳术方组与阳性药组比较,各项数据差异无统计学意义(P>0.05)。结论枳术方能改善STC大鼠的便秘症状,可能与上调大鼠结肠组织中5-HT_(4)R表达并激活下游CaM-MLCK信号通路有关。

同型半胱氨酸影响Caco-2细胞通透性的机制研究

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对Caco-2细胞通透性的影响及其机制。方法 Caco-2结肠癌细胞分为空白对照组、Hcy处理组(10、20、50μmol/L)、Hcy+不同抑制剂处理组(ERK抑制剂PD98059、MLCK抑制剂ML-7、P38MAPK抑制剂SB203580、Ca2+/Calmodulin抑制剂KN62、Rho抑制剂Y27632及PKC抑制剂Staurosporine)。通过检测跨上皮电流阻抗(TEER)及异硫氰酸荧光素(FITC)跨膜转运量评估Caco-2细胞模型通透性,Western blot法检测Caco-2细胞中MEK、ERK、MLCK、p-ERK、p-MLCK、ZO-1、Occludin、Claudin-1及Claudin-2蛋白表达水平。结果与空白对照组相比,使用50μmol/L Hcy预处理的Caco-2细胞通透性改变速率最快。Claudin-1、Occludin、ZO-1表达降低,MEK、ERK、MLCK、p-ERK、p-MLCK、Claudin-2蛋白表达升高。与Hcy处理组相比,使用ML-7及PD98059处理Caco-2细胞,可减弱Hcy预处理引起的Caco-2细胞通透性增加,降低MEK、ERK、MLCK、p-ERK、p-MLCK、Claudin-2蛋白表达,提高Claudin-1、Occludin及ZO-1蛋白表达。结论 Hcy可能通过MEK-ERK-MLCK细胞信号通路,调控细胞紧密连接(TJ)相关蛋白表达,影响Caco-2细胞通透性。

病毒性心肌炎患儿心肌肌凝蛋白轻链-1的变化及意义

目的探讨心肌肌凝蛋白轻链-1(CMLC-1)在小儿病毒性心肌炎(VMC)诊治中的应用价值。方法对63例VMC患儿(VMC组)和42例健康儿(对照组)检测血清CMLC-1和心肌肌钙蛋白T(cTnT),进行相关性分析;并对不同心功能级别VMC患儿CMLC-1比较,VMC患儿心血管事件发生组与未发生组CMLC-1、左室射血分数(LVEF)比较。结果 VMC组患儿血清CMLC-1、cTnT水平较对照组明显升高(均P<0.01),治疗后较治疗前明显下降(P<0.01)。CMLC-1与cTnT水平呈显著正相关(P<0.01)。心功能分级不同,CMLC-1水平不同,心功能愈差,CMLC-1水平愈高,差异有统计学意义(P<0.01),发生心血管事件的VMC患儿血清CMLC-1水平明显高于未发生者(P<0.01),CMLC-1水平与LVEF呈显著负相关(P<0.01)。结论血清CMLC-1水平可作为VMC诊断、病情严重程度评估及预后判定的指标。

ATRA通过ERK/MAPK通路调控AS兔心脏MLCK的表达

目的研究全反式维甲酸(ATRA)通过信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)通路调控动脉粥样硬化(AS)模型兔心脏中肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达。方法普通新西兰大耳朵白兔随机分为正常组、模型组、ATRA组,正常组给予普通饲料喂养,模型组和ATRA组给予高脂饲料(普通饲料+1%胆固醇+5%猪油)喂养,并且ATRA组同时给予ATRA灌胃5 mg/(kg·d)。12周后,取动脉和心脏组织,油红染色分析动脉壁斑块形成情况;HE染色和Masson染色观察心肌组织形态学变化,免疫组织化学染色观察心脏中MLCK的表达;Western blot法检测各组MLCK蛋白和ERK蛋白磷酸化水平。体外培养H9c2心肌细胞,分为正常组、模型组、ATRA组、ERK/MAPK选择性抑制剂(PD)组。Western blot法检测各组MLCK蛋白的表达水平。结果 12周以后,AS兔模型建立成功。与正常组比较,模型组动脉壁形成大量粥样斑块;HE染色结果显示模型组心肌组织出现严重的紊乱情况;Masson染色结果显示模型组心肌组织发生明显胶原纤维堆积;免疫组化结果显示模型组心肌组织中MLCK表达量增多;而给予ATRA以后,心肌组织紊乱情况得到改善,胶原纤维堆积得到缓解,MLCK表达量和ERK磷酸化水平均有所降低。并且模型组细胞中MLCK蛋白表达升高,给予ATRA和PD98059后,MLCK表达降低。结论 ATRA可能通过ERK/MAPK通路降低模型兔心肌细胞MLCK的表达。

褪黑素对实验性动脉粥样硬化兔心脏的保护作用及其可能的分子机制

目的观察褪黑素(MLT)对实验性动脉粥样硬化兔心脏的保护作用及其可能的分子机制。方法普通级纯种新西兰大耳白兔随机分为3组,正常组:饲喂普通饲料;模型组:饲喂高脂饲料(普通饲料+1%胆固醇+5%猪油);褪黑素组:饲喂高脂饲料的同时MLT灌胃10 mg/(kg·d)治疗。纯种大耳白兔适应性饲养一周后,采用高脂饮食诱导造模,同时给予褪黑素药物治疗。于12周后处死进行采血,检测血清中血脂等指标。取动脉进行油红染色,检测脂质斑块形成情况;取心脏组织,包埋后HE染色观察心肌组织的形态变化;Masson染色检测心肌组织中胶原纤维的变化;Western blot法检测p38/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、肌球蛋白轻链(MLC)、肌球蛋白轻链磷酸化(p-MLC)的表达水平。结果动脉油红染色结果显示模型组出现大量脂质斑块,证明造模成功。血脂结果显示模型组总胆固醇(TCH)、三酰甘油(TG)浓度明显上升,而褪黑素组相对模型组下降。油红染色HE染色结果显示MLT能改善心肌组织形态的紊乱情况,Masson染色结果显示MLT能缓解心肌组织胶原纤维的堆积。Western blot结果显示MLT能下调p38的磷酸化水平以及MLCK蛋白的表达水平,以及下调MLC的磷酸化表达水平(P<0.05)。结论 MLT可能通过降低MAPK通路中相关蛋白p38的磷酸化调控MLCK蛋白的表达,从而降低MLC的磷酸化水平对动脉粥样硬化兔心肌组织起到保护作用。

高频振荡通气和常频机械通气对吸人性损伤兔心肌功能影响的比较研究

目的 比较高频振荡通气（HFOV）和常频机械通气（CMV）对吸入性损伤兔心肌功能的影响. 方法 将16只新西兰大白兔制成蒸气吸入性损伤模型后,按随机抽签法分为CMV组和HFOV组,每组8只,分别行定容通气和HFOV治疗.4 h后处死2组家兔,处死前经心脏采血,检测血浆中乳酸脱氢酶1（LDH1）和心肌型肌酸磷酸激酶同工酶（CPK-MB）活性.取家兔左心室部分组织并匀浆,用ELISA法检测TNF-α、IL-8含量,分光光度法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（caspase-1）活性;核素液体闪烁技术测定心肌组织肌球蛋白轻链（MLC）-ATP酶和肌球蛋白轻链激酶（MLCK）活性.部分左心室心肌组织送病理检查.对实验数据行方差分析. 结果 （1）CMV组家兔血浆LDH1、CPK-MB活性分别为（643±108）、（342±48）U,明显高于HFOV组此2项指标[（233±92）、（186±36）U,F值分别为10.326、9.846,P值均小于0.01].（2）CMV组家兔心肌组织匀浆中TNF-α、IL-8含量和caspase-1活性分别为（181±35）pg/g、（89±19）pg/g、（0.56±0.27）g/g蛋白,均明显高于HFOV组[（94±21）pg/g、（43±11）pg/g、（0.24±0.12）g/g蛋白,F值分别为8.239、7.826、5.716,P值均小于0.01].（3）CMV组心肌组织MLC-ATP酶、MLCK活性分别为（0.24±0.12）μmo1·mg-1·min-1、（3.3±1.1）mmol·mg-1·min-1,均明显低于HFOV组[（0.48±0.16）μmol·mg-1·min-1、（7.7±1.7）mmol·mg-1·min-1,F值分别为4.125、4.766,P值均小于0.01].（4）光学显微镜下可见,2组家兔心肌组织无明显坏死、变性及炎性细胞浸润现象,但心肌纤维略显肿胀,HFOV组改变不及CMV组明显. 结论 与CMV模式比较,HFOV模式对吸人性损伤兔心肌肌球蛋白磷酸化系统影响较小.