心肌早期缺血再灌流损伤免疫组化观察

探询原癌基因c fos蛋白产物在心肌早期缺血再灌流损伤中的病理形态学改变。用SD大白鼠建立心肌早期缺血再灌流损伤模型 ,3 2只大鼠分为正常、缺血对照组与缺血再灌流组。心脏标本经HE染色及免疫组化观察。结果发现 :在缺血 3 0min再灌流 3 0min后 ,再灌流区心肌细胞有部分细胞核 ( 3 7 76%± 9 66% )呈弱阳性着色 ,而在缺血 60min再灌流 3 0min后 ,心肌细胞核 ( 4 0 3 4 %± 3 3 2 % )呈棕褐色阳性染色 ,但正常和单纯缺血组心肌细胞核未见有阳性反应 ;HE染色无明显改变。提示c

心肌早期缺血再灌流损伤HSP_(70)的表达

目的 探讨早期缺血再灌流损伤心肌组织热休克蛋白 70 (HSP70 )的变化 ,为心源性猝死的法医病理学鉴定寻找新的依据。方法 建立家兔早期心肌缺血再灌流动物模型 ,用免疫组化SABC法观察HSP70 的表达。结果 心肌缺血 15min再灌流 30min后 ,再灌流区心内膜下可见HSP70 阳性表达 ;缺血 30min再灌流 30min后 ,HSP70 阳性反应细胞数目较多 ,散布于心肌全层 ;缺血 6 0min再灌流 30min后 ,再灌流区阳性表达明显减少 ,而其边缘见阳性表达略有增强。各实验组正常区和对照组心肌组织均未见阳性反应。结论 心肌组织HSP70 的阳性表达是一项显示心肌早期缺血再灌流损伤的灵敏指标 ,HSP70 的免疫组化检测对缺血再灌流损伤所致心性猝死的死后诊断具有一定的应用价值。

心肌早期缺血再灌流损伤HSP70表达研究

目的 探讨早期缺血再灌流损伤心肌组织热休克蛋白 70 (HSP70 )的变化 ,为心源性猝死的法医病理学鉴定寻找新的依据。 方法 建立家兔早期心肌缺血再灌流动物模型 ,用免疫组化SABC法观察HSP70的表达。 结果 心肌缺血 15min再灌流 30min后 ,再灌流区心内膜下可见HSP70阳性表达 ;缺血30min再灌流 30min后 ,HSP70阳性反应细胞数目较多 ,散布于心肌全层 ;缺血 6 0min再灌流 30min后 ,再灌流区阳性表达明显减少 ,而其边缘见阳性表达略有增强。各实验组正常区和对照组心肌组织均未见阳性反应。 结论 心肌组织HSP70的阳性表达是一项显示心肌早期缺血再灌流损伤的灵敏指标 ,HSP70的免疫组化检测对缺血再灌流损伤所致心源性猝死的死后诊断具有一定的应用价值。

自噬流障碍在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制研究现状及进展

心肌缺血再灌注损伤是心血管疾病的重要并发症,可导致自噬流障碍,表现为自噬体形成和降解阶段的异常。在分子水平上,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、重组人自噬效应蛋白Beclin1等关键信号通路在自噬流的调控中发挥了关键作用。本文综述了自噬流障碍在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制及其干预措施,旨在为心肌缺血再灌注损伤的治疗提供理论基础。

大鼠心肌缺血再灌流损伤的免疫组化研究

用16只 SD 大白鼠建立缺血再灌流心肌损伤模型,其中8只预先静脉注射吗啡以抗心律失常。此外,再用8只大鼠开胸作正常对照。其心脏标本进行 HE 染色及抗肌动蛋白单克隆抗体(HHF_(35))免疫组化观察:对照组心肌呈均匀一致的棕褐色染色;注射吗啡后再灌流组心肌呈小灶性分布的 HHF_(35)染色缺染区;未注射吗啡组心肌缺染呈广泛大面积分布。结果表明,HHF_(35)免疫组化法对显示实验性心肌缺血再灌流损伤有重要价值,且心肌缺血再灌流损伤程度与心律失常有关。

大鼠心肌缺血再灌注损伤后无复流模型的制备

目的制备大鼠心肌缺血再灌注损伤后无复流模型,探讨建立模型过程中的关键点,为该疾病模型的成功复制提供参考。方法选取20只SD大鼠,随机分成无复流组(n=15)和假手术组(n=5)。无复流组结扎冠状动脉左前降支45 min后再灌注120 min;假手术组只穿线不结扎。在再灌注末予硫磺素S活体染色确定无复流区,同时监测大鼠呼吸及心电图变化。结果 20只大鼠全部存活,且心电图在心肌缺血期均出现心率加快、Ⅱ导联ST段抬高;恢复心肌灌注后,ST段下降<30%;硫磺素S染色显示出无复流区域。结论该方法可成功复制无复流动物模型,且模型制作方法成功率高,动物存活率也高。

舒芬太尼延迟性预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤早期细胞凋亡的影响

心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemic reperfusion injure，MIRI）是影响患者康复和手术成功的重要因素。心肌缺血预处理可使心脏对随后更严重的缺血损伤产生较强的耐受能力。近年来药物预处理尤其是延迟性预处理成为防治MIRI的研究热点。舒芬太尼（sufentainil）是一种新合成的强效拟吗啡类镇痛药，尤其适于心血管麻醉。本研究拟评价舒芬太尼延迟性预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及作用机制，为围手术期用药提供参考。

纳洛酮对缺血/再灌注损伤家兔心肌前列腺素代谢产物及再灌注血流的影响

目的观察纳洛酮对缺氧心肌组织再灌注血流及前列腺素代谢产物生成的影响。方法30只新西兰大白兔随机分为:再灌注组10只,结扎冠状动脉左前降支1 h再开放4.5 h;纳洛酮组10只,手术过程同前,同时静注纳洛酮;假手术组10只,手术过程同前,不结扎前降支动脉。用激光多谱勒血流测定仪测定再灌注组及纳洛酮组结扎前、后及再灌注4.5 h后缺血区心肌再灌注血流量;放射免疫法测定各组再灌注4.5 h后的血浆6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2含量。结果(1)结扎前,再灌注组及纳洛酮组局部心肌组织血流无差别;再灌注后,两组血流均较前下降,再灌注组的缺血区血流量明显低于纳洛酮组(P<0.01)。(2)再灌注后,再灌注组、纳洛酮组血浆血栓素B2含量及血栓素B2/6-酮-前列腺素F1α比值显著高于假手术组,再灌注组又高于纳洛酮组,各组间血浆6-酮-前列腺素F1α含量无显著性差异。结论纳洛酮可以抑制缺血/再灌注后家兔心肌血栓素B2的生成,改善再灌注部位血流。

蛇毒血小板抑制因子对心肌缺血再灌注损伤大鼠血小板膜糖蛋白Ⅵ表达以及血液流变的影响及意义

目的:探讨皖南蝮蛇毒血小板抑制因子(agkistrodon halys venom platelet inhibitor,AHV-PI)对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)、大鼠血小板膜糖蛋白VI(GPVI)表达以及血液流变的影响及意义。方法:SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(6只)、心肌缺血再灌注损伤模型组(6只)和AHV-PI实验组(18只),实验采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备大鼠MIRI模型。AHV-PI实验组根据大鼠舌下静脉注射AHV-PI的剂量(0.05,0.1,0.2 mg/kg)再依次分为低、中、高三组,每组6只,RM6240生物信号采集处理系统监测心电变化。蛋白质免疫印迹法(Western blot)监测AHV-PI干预下,大鼠GPVI的表达水平。血栓弹力仪(TEG■5000)描记凝血时间(R)、血凝块形成时间(K)、Alpha角度(A)和凝血最大幅度(MA)。采用比浊法检测血小板聚集率。结果:与MIRI模型组相比,AHV-PI中剂量实验组和高剂量实验组GPVI表达水平明显降低(P<0.05);R值和K值明显延长,A值和MA值减小(P<0.05);血小板聚集时间、聚集幅度和聚集率均明显降低(P<0.05)。结论:AHV-PI可显著抑制MIRI大鼠GPVI的表达并可改善大鼠心肌损伤相关的血液流变学特性,进而弱化其损伤过程。

缺血预适应减轻心肌无复流和再灌注损伤的作用及机制

目的探讨缺血预适应对心肌梗死冠状动脉再通治疗后心肌无复流和再灌注损伤的影响及作用机制。方法将32只小型猪按随机数字表法分为四组,每组8只。A组为假手术组,B组为心肌梗死(MI)组,C组为缺血预适应(IPC)组,D组为IPC+蛋白激酶A(PKA)抑制剂组[H-89,1μg/(kg.min)]。采用病理学方法测定心肌无复流和心肌坏死面积,左心室、心肌缺血区和非缺血区含水量。组织学观察测定心肌细胞横切面面积和线粒体横切面面积。结果 C组无复流心肌面积明显低于B组(P<0.01),D组无复流心肌面积明显高于C组(P<0.05)。C、D两组梗死心肌面积均明显低于B组(P均<0.05)。C组复流区、无复流区心肌含水量相比B组有所下降(P均<0.05)。D组各部位心肌含水量与B组比较无统计学差异(P均>0.05)。C组复流区心肌细胞横切面面积明显低于B组(P<0.01)。D组复流区心肌细胞横切面面积明显高于C组(P<0.05)。C组复流区和无复流区线粒体横切面面积均小于B组(P均<0.01)。D组复流区线粒体横切面面积明显高于C组(P<0.05)。结论 IPC可减轻急性心肌梗死(AMI)后心肌无复流和再灌注损伤,其机制与减轻心肌水肿有关,PKA通路可能在减轻心肌水肿和保护线粒体功能中起到重要作用。

大鼠急性心肌缺血再灌流损伤c-fos mRNA原位杂交实验研究

目的 探讨急性心肌缺血和/或再灌流早期不同时间不同区域心肌细胞内原癌基因c-fos mRNA表达变化,为心肌早期缺血死后诊断提供依据。方法 复制心肌早期缺血模型,大鼠分为正常、缺血及缺血再灌流组。采用原位杂交方法结合图像分析与统计学处理方法研究心肌细胞内c-fos mRNA表达情况。结果 缺血10min再灌流30min,部分大鼠再灌流区心肌细胞胞浆内c-fos mRNA弱阳性反应,散在分布。缺血60min再灌流30min时达高峰,120min开始减弱。正常和单纯缺血组中缺血少于60min组未见有阳性表达。HE染色无明显病理改变。结论 原位杂交法检测c-fos mRNA方法灵敏特异,有望成为一项急性心肌缺血/再灌流早期损伤的诊断指标。

猪缺血再灌注损伤无复流心肌中β_3整合素的表达

对于急性心肌梗死,急诊PCI治疗能迅速使闭塞的冠状动脉再通,恢复心肌再灌注从而挽救缺血心肌,改善患者近期与远期预后。然而急性心肌梗死急诊再灌注治疗可并发无复流现象,导致心肌严重缺血,后果严重甚至危及患者生命。对于其机制目前有许多解释,但尚无统一共识。本文用心导管技术将成年香猪建成缺血再灌注损伤无复流心肌模型,观察β3整合素在无复流心肌中的表达,进一步阐释再灌注无复流心肌形成的病理机制。

心肌缺血再灌流损伤HSP70m RNA原位杂交研究

目的观察家兔早期缺血再灌流损伤心肌组织热休克蛋白70mRNA的表达变化,为心性猝死的法医病理学诊断寻找新的方法。方法建立家兔心肌缺血再灌流损伤模型,通过原位杂交技术观察研究。结果心肌缺血15min再灌流30min后,缺血区HSP70mRNA阳性反应增强,阳性颗粒均匀散布于心肌全层,随着缺血时间的延长,阳性反应细胞数目逐渐增多,染色加深。结论HSP70mRNA原位杂交检测可望为早期心肌缺血再灌流损伤的死后诊断提供新方法。

人参皂苷Rb1改善自噬流抗离体大鼠心脏心肌缺血再灌注损伤

目的通过Langendorff系统构建离体大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤模型,探讨人参皂苷Rb1对心肌I/R损伤的保护作用及机制。方法选取健康成年雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、I/R组和人参皂苷Rb1(1、5、10和20μmol/L)预处理组,每组10只。大鼠开胸、结扎主动脉后,取出心脏置于Langendorff系统进行灌流,按照分组情况构建相应模型。采用Lab Chart电生理系统检测心率(HR)、左心室发展压(LVDP)、左室压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)等相关心功能指标;采用TTC染色法检测心肌梗死面积;采用Western blotting检测Beclin 1、LC3、p62和Lamp 2表达情况;采用免疫组织化学法检测Beclin 1表达情况。结果人参皂苷Rb1(1、5、10和20μmol/L)改善由I/R损伤导致的LVDP和±dp/dtmax的下降,减少心肌梗死面积,其中10μmol/L浓度人参皂苷Rb1对心功能保护作用最显著(P<0.05)。Beclin 1在I/R组心肌细胞胞质中阳性表达率显著增高,加入人参皂苷Rb1(10μmol/L)后表达量减少(P<0.05)。与sham组相比,在I/R组发现自噬流受损:自噬相关蛋白Beclin 1、LC3和p62表达水平升高,Lamp 2表达水平下调(P<0.05)。加入人参皂苷Rb1(10μmol/L)后上述蛋白的调控作用被反转,自噬流通畅(P<0.05)。结论人参皂苷Rb1预处理通过改善自噬流受损发挥抗大鼠离体心肌I/R损伤的保护作用,其中以10μmol/L浓度的人参皂苷Rb1保护作用最好。

电针对大鼠全脑缺血再灌流损伤的保护作用

结扎基底动脉后夹闭双侧颈总动脉１０分钟，造成大鼠全脑缺血再灌流损伤模型，观察了电针对其保护作用。结果表明：与模型组相比电针可延长皮层脑电图（ＥＥＧ）消失时间、缩短ＥＥＧ出现时间和恢复时间、降低脑组织含水率和Ｃａ＋＋、Ｎａ＋含量、降低脑组织过氧化脂质（ＬＰＯ）含量。表明电针对大鼠全脑缺血再灌流损伤有保护作用。

水芹甲醇提取物对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

水芹甲醇提取物ｉｖ可显著对抗心肌缺血引起的心律失常，缩小心肌梗塞面积，同时可明显地对抗心肌缺血再灌注引起的心律失常。水芹甲醇提取物（１００ｍｇ／ｋｇ）可明显降低血浆中脂质过氧化产物丙二醛的含量，保护超氧化物歧化酶的活性。

藻蓝蛋白对大鼠脑缺血再灌流后神经元损伤的保护作用

目的 探讨大鼠脑缺血再灌流后神经元损伤的机制以及藻蓝蛋白对神经元的保护作用。方法 用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌流模型 (MCAO) ,分别对假手术组、模型对照组、藻蓝蛋白组进行神经功能缺失评分 ,用TTC染色法测量脑梗死体积 ,用干湿重法计算脑的含水量 ,应用原位末端标记 (TUNEL)观察脑缺血再灌流不同时间点神经元凋亡的变化。结果 (1)在大鼠脑缺血再灌流后 2小时应用藻蓝蛋白 ,能够明显改善神经功能缺失症状 ,脑缺血再灌流后 2 4小时 ,藻蓝蛋白组的Bederson神经功能评分与模型对照组间差别有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,且这种差异一直持续到脑缺血再灌流后 4 8小时。藻蓝蛋白还能够缩小脑梗死的体积 ,脑缺血再灌流后 4 8小时 ,藻蓝蛋白组的脑梗死体积与模型对照组间差别有显著性意义 (P <0 0 5 )。藻蓝蛋白还能够减轻脑水肿 ,使脑组织的含水量明显减少。 (2 )模型对照组 ,脑缺血再灌流后凋亡神经元主要分布于缺血周围区 ,随着再灌流时间的延长 ,凋亡细胞数逐渐增加 ,至 2 4小时达高峰 ,2天开始下降 ,14天时与假手术组间差别仍有显著性意义 (P <0 0 5 )。藻蓝蛋白组凋亡细胞的数量相对较少 ,其变化规律与模型对照组相似 ,同一时间点相比较 。

L-精氨酸对大鼠心肌相对缺血/再灌注损伤保护作用的研究

目的:探索L-精氨酸(L-Arg)对心肌相对缺血/再灌损伤的保护作用,为研究抗心肌损伤的保护措施提供依据。方法:Wastar大鼠24只,随机分为对照组、相对缺血损伤组和相对缺血损伤+L-精氨酸组。采用高频阈上电刺激大鼠离体心脏建立离体心肌相对缺血/再灌注模型,分别于相对缺血前、缺血后15min和30min收集冠脉流出液,测定丙二醛(MDA)含量、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用Pclab生物信号采集处理系统测定相对缺血损伤后5min、10min、20min和30min时的心率脉压乘积(PRP)、左心室收缩压变化速率(+DP/dtmax)和舒张压变化速率(-Dp/dtmAx)的恢复率。结果:L-精氨酸组的PRP、+DP/dtmax和-Dp/dtmax恢复率,明显优于相对缺血损伤组(P<0.05);L-精氨酸组的冠脉流出液和心肌组织中的丙二醛(MDA)含量、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,低于相对缺血损伤组(P<0.05),而L-精氨酸组的心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性高于缺血组(P<0.01)。结论:L-精氨酸对心肌相对缺血/再灌损伤具有一定的保护作用。

Ca^(++)在脑缺血/再灌流损伤中的作用

观察了全脑缺血/再灌流不同时间大鼠脑组织钙、丙二醛(MDA)的含量变化及病理改变。脑组织钙在缺血30分钟后再灌流60分钟时较对照组升高;MDA含量块血30分钟和缺血30分钟后再灌流30分钟时较对照组升高;钙和MDA含量变化呈正相关。讨论了Ca^(++)在脑缺血/再灌流损伤中的作用机理。