长链非编码核糖核酸KCNQ1重叠转录物1、Runt相关转录因子3与急性心肌梗死的关系

目的 探讨急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者血清长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(long non-coding RNA KCNQ1 overlapping transcript 1,lncRNA KCNQ1OT1)、Runt相关转录因子3(Runt-related transcription factor 3,Runx3)表达水平及意义。方法 选取2019年1月至2020年4月在德阳市人民医院住院治疗的231例AMI患者为研究对象(AMI组),AMI患者按美国纽约心脏病协会心功能分级标准分为Ⅱ级组72例、Ⅲ级组81例、Ⅳ级组78例;同期选取229例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,fqRT-PCR)法检测血清lncRNA KCNQ1OT1、Runx3表达水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzymes,CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cardiac troponin,cTn)I、肌红蛋白(myoglobin,MYO)浓度;超声心动图检查左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter,LVEDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular end-systolic diameter,LVESD);分析AMI患者血清lncRNA KCNQ1OT1、Runx3表达水平与心功能指标的相关性;分析血清lncRNA KCNQ1OT1、Runx3表达水平对AMI的诊断价值;分析影响AMI发生的因素。结果AMI组患者lncRNA KCNQ1OT1(1.54±0.36 vs. 1.01±0.26)、LVESD[(52.68±6.74)mm vs.(42.73±6.52)mm]、LVEDD[(61.79±6.03)mm vs.(51.62±5.32)mm]、NT-proBNP[(292.23±34.27)ng/L vs.(96.27±23.42)ng/L]、CK[(746.82±210.55)U/L vs.(70.32±15.48)U/L]、CK-MB[(156.95±49.87)U/L vs.(1.25±0.37)U/L]、cTnI[(27.48±7.92)ng/mL vs.(1.13±0.26)ng/mL]、MYO[(678.94±159.78)ng/mL vs.(12.45±2.73)ng/mL]浓度高于对照组,Runx3(0.67±0.20 vs.1.02±0.24)、LVEF(43.26%±4.31%vs. 56.38%±5.12%)低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。心功能Ⅳ级组lncRNA KCNQ1OT1、LVESD、LVEDD、NT-proBNP、CK、CK-MB、cTnI、MYO高于Ⅲ级组和Ⅱ级组,Runx3、LVEF低于Ⅲ级组和Ⅱ级组,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ级组lncRNA KCNQ1OT1、LVESD、LVEDD、NT-proBNP、CK、CK-MB、cTnI、MYO高于Ⅱ级组,Runx3、LVEF低于Ⅱ级组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清lncRNA KCNQ1OT1、Runx3表达水平与病变支数、Gensini积分有关,且随着病变支数、Gensini积分增加,lncRNA KCNQ1OT1表达水平升高、Runx3表达水平降低(P<0.05)。AMI患者血清lncRNA KCNQ1OT1与Runx3表达水平呈负相关(r=-0.584;P<0.05);lncRNA KCNQ1OT1与LVESD、LVEDD、NT-proBNP、CK、CK-MB、cTnI、MYO呈正相关,与LVEF呈负相关(P<0.05);Runx3与LVESD、LVEDD、NT-proBNP、CK、CK-MB、cTnI、MYO呈负相关,与LVEF呈正相关(P<0.05)。血清lncRNA KCNQ1OT1、Runx3水平诊断AMI的曲线下面积(AUC)分别为0.859、0.743,特异度分别为81.6%、74.7%,敏感度分别为76.1%、78.3%;两者联合诊断的曲线下面积为0.901,特异度为92.0%,敏感度为73.9%。lncRNA KCNQ1OT1是影响AMI发生的独立危险因素(P<0.05),Runx3是影响AMI发生的保护因素(P<0.05)。结论 血清lncRNA KCNQ1OT1、Runx3参与AMI的发生、发展,二者表达水平对AMI的诊断可能具有重要意义。

LncRNA MIAT在颅内动脉瘤患者血清中的表达及靶向调节miR-331-3p对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的分析长非编码RNA(LncRNA)心肌梗死相关转录物(MIAT)在颅内动脉瘤(IA)患者血清中的表达,探究其对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响及作用机制。方法数字减影血管造影诊断的IA患者15例为IA组,同期无IA家族史的健康参与者15例为对照组(C组),qRT-PCR检测两组受试者血清LncRNA MIAT和miR-331-3p水平;体外培养的VSMCs分为空白对照组(BC组)、过表达LncRNA MIAT阴性对照组(oe-NC组)、过表达LncRNA组(oe-MIAT组)、过表达LncRNA+过表达miR-331-3p阴性对照组(oe-MIAT+miR-331-3p-NC组)及过表达LncRNA+过表达miR-331-3p组(oe-MIAT+miR-331-3p mimic组);采用qRT-PCR检测VSMCs中LncRNA MIAT、miR-331-3p表达,MST测定VSMCs 24、48、72 h时的细胞活力(OD值),EdU染色测定VSMCs增殖,AnnexinⅤ/7-AAD双染法测定VSMCs凋亡,Western blot分析VSMCs中Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3表达;双荧光素酶报告、RNA免疫共沉淀验证LncRNA MIAT、miR-331-3p靶向关系。结果与C组相比,IA组患者血清LncRNA MIAT相对表达量显著升高,血清miR-331-3p相对表达量显著降低(P<0.05);与BC组及oe-NC组相比,oe-MIAT组、oe-MIAT+miR-331-3p-NC组LncRNA MIAT相对表达量、凋亡率、cleaved-Caspase-3、Bax表达增高,miR-331-3p的相对表达量、24 h、48 h、72 h的OD值、EdU阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均下降(P<0.05);oe-MIAT+miR-331-3p-mimic组与oe-MIAT+miR-331-3p-NC组、oe-MIAT组相比,凋亡率、cleaved-Caspase-3、Bax表达下降,miR-331-3p的相对表达量、24 h、48 h、72 h的OD值、EdU阳性细胞比例、Bcl-2蛋白水平均显著增高(P<0.05);双荧光素酶报告、RNA免疫共沉淀表明LncRNA MIAT和miR-331-3p之间存在负向调控。结论LncRNA MIAT在IA患者血清中高表达,高表达的LncRNA MIAT可通过下调miR-331-3p表达诱导VSMCs过度凋亡、抑制VSMCs增殖,参与IA发生或进展。

血清LncRNA MIAT、miR-518a-3p在宫颈癌中表达水平与患者临床病理特征及预后的关系

目的 量化宫颈癌患者血清中长链非编码RNA心肌梗死相关转录物(LncRNA MIAT)和微小RNA-518a-3p(miR-518a-3p)的表达水平,并分析其与患者临床病理特征及预后的关系。方法 将2017年2月至2019年3月于中部战区总医院治疗的86例宫颈癌患者和86例健康女性纳入研究。收集研究对象血清,检测血清中LncRNA MIAT、miR-518a-3p表达情况,分析二者表达与患者临床病理特征的关系,并观察患者生存状况;采用Cox回归分析宫颈癌患者预后的影响因素。结果 与健康女性比较,宫颈癌患者血清中LncRNA MIAT表达显著升高,miR-518a-3p表达显著降低(P<0.05)。国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅲ~Ⅳ期、发生阴道浸润及发生淋巴结转移的宫颈癌患者血清中LncRNA MIAT高表达、miR-518a-3p低表达比例显著高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、未发生阴道浸润及未发生淋巴结转移的宫颈癌患者(P<0.05)。Pearson分析结果显示,宫颈癌血清中LncRNA MIAT与miR-518a-3p表达水平呈负相关性(r=-0.408,P<0.05)。LncRNA MIAT低表达患者3年生存率高于LncRNA MIAT高表达患者(χ2=10.488,P=0.001);而miR-518a-3p高表达患者3年生存率高于miR-518a-3p低表达患者(χ2=4.790,P=0.029)。Cox回归分析发现,LncRNA MIAT表达水平、FIGO分期及淋巴结转移是宫颈癌患者死亡的危险因素(P<0.05),而miR-518a-3p表达水平是宫颈癌患者死亡的保护因素(P<0.05)。结论 血清中LncRNA MIAT、miR-518a-3p表达水平均与宫颈癌患者FIGO分期、阴道浸润及淋巴结转移有关,且二者可能是判断宫颈癌患者预后的潜在指标。

MIAT过表达载体的构建及其对血肿瘤屏障通透性的影响

目的构建长链非编码RNA心肌梗死相关转录物(MIAT)过表达载体pcDNA3.1-MIAT,并研究其对血肿瘤屏障通透性影响。方法从与脑胶质细胞U87共培养的人脑微血管内皮细胞hCMEC/D3(GECs)提取总RNA,用反转录聚合酶链式反应技术扩增出MIAT基因片段,通过无缝连接技术克隆到pcDNA3.1载体中进行序列分析,转染重组质粒pcDNA3.1-MIAT到GECs中,real-time PCR检测转染效率,应用跨内皮电阻测量系统和辣根过氧化物酶渗漏实验分析血肿瘤屏障通透性的变化。结果成功扩增出MIAT基因,成功构建pcDNA3.1-MIAT表达载体,Blast序列分析与GenBank中NR00349一致。转染pcDNA3.1-MIAT后,96h转染效率最高,过表达MIAT组跨内皮阻抗值最低,辣根过氧化物酶流量最高,血肿瘤屏障通透性最高。结论成功构建pcDNA3.1-MIAT表达载体,过表达MIAT使血肿瘤屏障通透性升高。

肝癌患者血清中lncRNA MIAT的表达及临床意义

目的:检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者血清中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)心肌梗死相关转录本(myocardial infraction association transcript,MIAT)的表达,并探讨其临床意义。方法:qRT-PCR法检测血清MIAT表达;ROC曲线分析其诊断HCC的价值;并研究MIAT表达与疾病进展及预后的关系。结果:MIAT在HCC患者血清中高表达,ROC曲线表明其表达可作为诊断HCC的血清标志物;与临床因素对比后发现MIAT表达与肿瘤数目、TNM分期和BCLC分期密切相关;对血清MIAT水平随访后发现其表达在肝癌肝切除术后降低,并在HCC复发时升高。结论:血清MIAT水平可作为诊断HCC的生物学标志物,其在评估HCC的恶性进展、手术疗效以及预测肿瘤复发方面具有潜在临床应用价值。

长链非编码RNA-MIAT在转化生长因子β2诱导的晶状体上皮－间质转化中的作用

目的探讨长链非编码RNA（LncRNA）－心肌梗死相关转录物（MIAT）在转化生长因子β2（TGF-β2）诱导的晶状体上皮细胞（LECs）纤维化过程中的作用及其对后发性白内障形成的影响。 方法对LECs永生系SRA01/04细胞进行培养，将培养的细胞分为正常对照组和TGF-β2组，分别用DMEM培养液和含10 ng/ml TGF-β2DMEM培养液培养48 h，光学显微镜下观察TGF-β2诱导的各组细胞形态学变化，采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测细胞中MIAT及上皮－间质转化（EMT）相关标志物E－钙黏素（E-cad）、α－平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和胶原蛋白Ⅰ（CollⅠ）蛋白及其mRNA相对表达量变化；分别用siRNA空载体和siRNA-MIAT转染DMEM培养的（siNRA空载体组、siRNA-MIAT转染组）或用含10 ng/ml TGF-β2 DMEM培养的（siNRA＋TGF-β2组、siRNA-MIAT＋TGF-β2组）SRA01/04细胞48 h，光学显微镜下观察各组细胞形态学变化，采用实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测细胞中MIAT、E-cad、α-SMA、CollⅠ蛋白及其mRNA的表达变化。结果正常对照组培养细胞呈圆形和多角形，TGF-β2诱导组细胞呈长梭形。与正常对照组比较，TGF-β2诱导组细胞中MIAT mRNA、α-SMA mRNA和CollⅠmRNA相对表达量明显升高（2.497±0.644 vs.0.827±0.062；2.951±0.146 vs.1.085±0.517；2.115±0.090 vs.1.002±0.088），而E-Cad mRNA相对表达量明显下降（0.102±0.027 vs.1.020±0.262），差异均有统计学意义（P＝0.045、0.004、0.000、0.025），上述因子的蛋白水平表达趋势与mRNA相同。与siRNA空载体组比较，siRNA-MIAT转染组均能明显下降细胞内MIAT含量，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。与siRNA＋TGF-β2组比较，siRNA-MIAT＋TGF-β2组细胞中α-SMA、CollⅠ蛋白及其mRNA相对表达量均明显下降，差异均有统计学意义（均P〈0.01），E-cad蛋白及其mRNA相对表达量明显增加，差异有统计学意义（P＝0.008、0.000）。结论MIAT参与TGF-β2诱导的SRA01/04细胞EMT过程，下调MIAT可抑制晶状体上皮－间质转化的发生。

lncRNA MIAT调节miR-495-3p/STAT3信号通路对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录物(lncRNA MIAT)对高糖(HG)诱导的人视网膜色素上皮细胞(RPE)凋亡的影响及分子机制。方法用HG处理人RPE细胞系ARPE-19以在体外模拟糖尿病视网膜病变(DR)。将用于lncRNA MIAT沉默的小干扰RNA(siRNA,si-MIAT)和阴性对照(si-NC)、miR-495-3p抑制剂(miR-495-3p inhibitor)及抑制剂对照(inhibitor-NC)转染ARPE-19细胞,分为HG+si-NC组、HG+si-MIAT组、HG+si-MIAT+anti-NC组、HG+si-MIAT+anti-miR-495-3p组,另设正常糖(NG)组和HG组。使用逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞lncRNA MIAT、miR-495-3p、信号转导和转录激活因子(STAT)3 mRNA水平,MTT法测定细胞活性,流式细胞术测定细胞凋亡,蛋白质印迹分析STAT3与凋亡相关蛋白表达。双荧光素酶实验检测miR-495-3p与lncRNA MIAT或STAT3的靶标关系。建立DR小鼠模型,分为对照(Control)组、DR组、DR+si-NC组、DR+si-MIAT组,苏木素-伊红(HE)染色和原位末端标记染色(TUNEL)染色观察lncRNA MIAT敲低对DR小鼠视网膜组织损伤的影响,RT-qPCR和Western印迹检测视网膜组织lncRNA MIAT、miR-495-3p、STAT3表达。结果与NG组相比,HG组lncRNA MIAT、STAT3 mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平和(Cleaved-Caspase)-3/Caspase-3比值升高,miR-495-3p水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白水平降低(均P<0.05)。敲低lncRNA MIAT可明显上调miR-495-3p,明显抑制STAT3表达,明显升高细胞存活率和Bcl-2蛋白水平,明显降低细胞凋亡率、Bax蛋白水平和Cleaved-Caspase-3/Caspase-3比值(均P<0.05)。下调miR-495-3p可升高STAT3水平,部分消除lncRNA MIAT敲低对HG诱导的ARPE-19细胞凋亡的抑制作用(均P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,过表达miR-495-3p可降低MIAT-野生型(WT)和STAT3-WT的荧光素酶活性(P<0.05)。体内实验结果显示,lncRNA MIAT敲低可通过上调miR-495-3p抑制STAT3表达,减轻DR小鼠视网膜损伤,抑制视网膜细胞凋亡。结论敲低lncRNA MIAT可能通过增强miR-495-3p对STAT3的抑制作用,减少HG诱导的人RPE细胞凋亡,减缓DR进展。