C57BL/6J乳鼠心肌细胞的提取及鉴定

目的:改良C57BL/6J乳鼠心肌细胞提取方法,使C57BL/6J乳鼠心肌细胞提取规范化、细胞产量、细胞纯度有所提高。方法:在消化时加入自制搅拌子,采用0.06%胰蛋白酶预处理,后以0.04%Ⅱ型胶原蛋白酶给予消化,采用差速贴壁90 min,同时给予0.1 mmol/L 5-溴-2-脱氧尿核苷(Brdu)抑制成纤维细胞生长,同时进行心肌细胞鉴定,及细胞活力鉴定。结果:心肌细胞成活率95.5%,心肌细胞纯度94%。24 h心肌细胞基本贴壁,部分已经出现搏动,72 h可出现同步性搏动。细胞活力在培养至4~7 d逐渐升高,第7 d活力最好,超过7d细胞活力降低。结论:通过此种方法对C57BL/6J乳鼠心肌细胞进行提取,并进行改良,C57BL/6J乳鼠心肌细胞成活率和纯度均能够保持较高水平。心肌细胞在4~7d活力逐渐升高,推荐再此时间段进行实验。