伴心肌特异性肌钙蛋白T升高的皮肌炎

报告1例伴心肌特异性肌钙蛋白T(c Tn T)升高的皮肌炎。患者女,38岁。发热、肌肉无力2个月,躯干及四肢红斑1个月。实验室及辅助检查:肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)及c Tn T明显升高,反复心电图、心脏彩超检查未见异常,除外心肌损伤。诊断:皮肌炎。予糖皮质激素联合甲氨蝶呤治疗3个月,皮损消退,肌无力、肌痛症状缓解,c Tn T随CK、CKMB下降而下降。对国内外文献复习,皮肌炎患者可以有c Tn T升高。因此,对于c Tn T升高的结果判断还需要结合临床表现及其他检查综合分析,避免误诊。

IGF-1基因转染促进胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白、肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白-T的表达

目的观察胰岛素样生长因子-T(IGF-1)基因转染对胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白(myoglobulin)、肌动蛋白(actin)及心肌特异性肌钙蛋白-T(Troponin-T)表达的影响。方法将含有IGF-1基因的真核质粒转染入大鼠胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞中,采用免疫组织化学方法对心肌细胞内上述4种蛋白的表达进行检测。利用HPIAS-2000图像分析系统测定4种蛋白在各组中表达的平均吸光度值和平均阳性面积率。结果IGF-1基因转染后的心肌细胞内上述4种蛋白的表达明显高于未转染的对照组(P<0.05)。结论IGF-1基因转染的心肌细胞较未转染的心肌细胞合成IGF-1、肌球蛋白、肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白-T的能力增强,为IGF-1基因治疗心肌梗死提供了实验依据。

量子点偶联抗体型夹心免疫传感法检测心肌肌钙蛋白I

将纳米量子点（QD）的放大作用与夹心免疫传感技术相结合，首次应用量子点标记抗体和表面等离子体共振生物传感器（SPR）对心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）进行特异性定量检测．利用N-羟基琥珀酰（NHS）和1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC）将量子点偶联到cTnⅠ的单克隆抗体2F11上，再利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）验证偶联是否成功，膜印迹法证明标记后的2F11具有良好的生物学和免疫学活性，最后以蛋白A为基底膜、特异性抗心肌肌钙蛋白Ⅰ多克隆抗体为第-抗体（捕捉抗体）、QD标记的抗心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体2F11为第二抗体（检测抗体），用表面等离子体共振生物传感器构建了对心肌肌钙蛋白Ⅰ具有特异性的夹心免疫传感法，并成功用于检测心肌肌钙蛋白Ⅰ．本法的检测范围为0．4～15μg/L，检出限为0．4μg/L，较未标记夹心法和直接法分别提高了约2倍和10倍．

Smad信号通路在骨髓源性心肌干细胞向心肌分化中的作用

目的研究Smad信号通路在BMP_2诱导的骨髓源性心肌干细胞(MCSCs)向心肌分化中的作用,探讨MCSCs向心肌分化的信号转导机制。方法从SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,用骨形态发生蛋白-2(BMP_2)诱导向心肌定向分化。Westernblotting和免疫细胞化学法检测诱导后细胞内磷酸化的Smadl/5/8的表达及其随诱导时间在细胞内分布的变化。RT_PCR检测诱导前后细胞内GATA_4和心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)mRNA的表达。结果BMP_2诱导后15min,细胞内可检测到磷酸化的Smadl/5/8的表达,30min^1h表达明显增加,1h后开始降低,4h呈低表达。BMP_2诱导后15min,磷酸化的Smadl/5/8仅见于胞质中,30min胞质和胞核均见表达,1h主要在胞核内表达。BMP_2诱导后2周,细胞明显表达GATA_4和cTnTmRNA。诱导后4周细胞呈现成熟心肌细胞样形态。用SB203580抑制Smad信号后,GATA_4和cTnTmRNA的表达显著降低,细胞形态变化不明显。结论Smad信号通路在BMP_2诱导MCSCs向心肌分化中发挥重要的介导作用。

骨髓间质干细胞体外转化为心肌细胞的实验研究

目的采用骨髓间质干细胞体外转化为心肌细胞 ,为心衰的干细胞移植治疗提供新的细胞材料。 方法抽取贵州香猪骨髓液 3ml,按照Wakitani的方法培养出骨髓间质干细胞 ,经 5 -氮胞苷刺激 2 4h后 ,进行结蛋白、肌球蛋白重链、心肌特异性肌钙蛋白Ⅰ、连接蛋白 - 4 3免疫组化 ,电镜鉴定。 结果骨髓间质干细胞经 5 -氮胞苷刺激后 ,部分细胞呈梭形 ,结蛋白、肌球蛋白重链、心肌特异性肌钙蛋白Ⅰ、连接蛋白 - 4 3免疫组化阳性 ,电镜示梭形细胞有明显的肌丝 ,细胞核呈单椭圆形 ,位于细胞中央。 结论骨髓间质干细胞可在体外的环境下向心肌细胞转化 。

脂肪间充质干细胞CD73亚群心肌分化能力评价

目的探讨CD73+和CD73-脂肪间充质干细胞(ADMSCs)两个亚群向心肌分化能力的差异,筛选出心肌分化优势亚群,为进一步开展细胞治疗心肌疾患提供实验参考。方法流式细胞仪分选CD73+/CD73-ADMSCs亚群,HE染色观测其形态。体外5-氮杂胞甙(5-aza)诱导CD73+/CD73-亚群,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白T(c Tn T),Real-time PCR检测c Tn T、Gata-4变化;4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记两个亚群后,移植到大鼠心肌内,免疫荧光法检测移植细胞c Tn T表达。结果 CD73+ADMSCs形态以小细胞为主呈细长形或纺锤状,CD73-细胞以宽大扁平或方形等为主。体外成心肌诱导后,CD73+ADMSCs心肌特异性c Tn T表达率为45.5%、CD73-亚群为5.75%,基因水平上CD73+亚群表达c Tn T、Gata-4明显高于阴性亚群(P<0.01)。体内CD73+亚群较阴性亚群高表达c Tn T。结论 CD73+ADMSCs较CD73-ADMSCs具有更高向心肌分化的潜能,CD73+ADMSCs可能更具有心肌治疗的前景。

窦房结细胞裂解液对大鼠骨髓间充质干细胞的诱导分化作用

目的:观察不同浓度的窦房结细胞裂解液对骨髓间充质干细胞(MSCs)的诱导分化作用。方法:体外分离乳鼠窦房结细胞并制备窦房结细胞裂解液。密度梯度离心法分离成年SD大鼠骨髓MSCs,分别加入含1、2、4和8倍浓度的窦房结细胞裂解液培养基诱导培养,普通培养基培养作对照,观察细胞形态变化,并通过免疫荧光染色法检测MSCs心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)的表达,免疫细胞化学染色检测超极化激活的环核苷酸门控的离子通道蛋白HCN2和HCN4的表达。结果:经1、2、4和8倍浓度窦房结细胞裂解液诱导1周后的骨髓MSCs均表达cTnI和HCN2;5组间HCN2阳性细胞率比较,差异有统计学意义(F=93.113,P<0.001),且在一定浓度下随着裂解液浓度的升高而增高(P<0.05)。结论:窦房结细胞裂解液能够体外诱导骨髓MSCs分化为具有起搏功能的心肌样细胞。

非ST段抬高急性冠脉综合征危险分层模式回顾

目前认为不稳定性心绞痛(UA)和非ST段抬高急性心肌梗死(NSTEMI)是同一严重的、需紧急处理的临床综合征,即非ST段抬高急性冠脉综合征(NSTEACS).

量子点标记的斑点免疫渗滤分析定量检测cTnI

利用量子点良好的光谱特征和光化学稳定性,结合免疫分析技术,对心肌肌钙蛋白I(cTnI)特异性进行定量检测.用量子点标记cTnI的单克隆抗体(2F11),通过SDS-PAGE电泳证明标记成功.斑点免疫膜渗滤法证明标记后的2F11仍具有良好的生物学活性,再将标记并纯化后的2F11与NC膜上不同浓度的cTnI进行免疫反应,使用Im ageM aster图像分析软件对膜上荧光斑点图像进行定量分析.应用此方法测得cTnI的浓度和斑点处相对荧光值有良好的线性关系(R2=0.9966),最低检出值为120 ng.

人心房肌细胞的培养与鉴定

目的 探索人心房肌细胞的原代及传代培养方法。方法 取心外科手术患者 (1 5～6 0岁 ,平均 2 5岁 )常规切除的右心耳 ,利用组织贴块法原代培养心房肌细胞并进行传代培养 ,对培养细胞 (取第 3代 )进行光镜、透射电镜形态学观察和免疫细胞化学鉴定 ,并绘制生长曲线。结果原代培养 1 0d左右时细胞数目可达 1 0 6～ 1 0 7/ml;此后每 4～ 5d可传代一次 ,大多可传至第 8代。透射电镜观察到典型心肌细胞的超微结构 ,免疫细胞化学分析显示 90 %以上的细胞呈α 肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白Ⅰ抗体染色阳性。细胞生长曲线显示第 3代细胞在密度为 1× 1 0 6～ 8× 1 0 6/ml呈对数生长 ,倍增时间约 2 4h。结论 利用组织贴块法成功培养出人心房肌细胞 ,所得心房肌细胞纯度高并能传代培养 ,为深入研究人心房肌细胞的病理生理及分子生物学奠定了基础。