心肌球源性心肌干细胞联合心室肌细胞外基质治疗大鼠急性心肌梗死效果

目的拟研究心室肌细胞外基质(ECM)能否促进植入心肌梗死心肌组织内的心肌球源性心肌干细胞(CDC)向心肌细胞,血管内皮及血管平滑肌细胞分化,改善大鼠心肌梗死后的心脏结构及功能。方法心肌组织块培养法培养CDC,脱细胞法配置ECM,结扎Wistar大鼠前降支建立急性心肌梗死模型。分别向心肌梗死心肌组织内注入IMDM(I组),ECM悬液(E组),含106CDCs的IMDM溶液(IC组),含106CDCs的ECM悬液(EC组),每组心肌梗死大鼠6只。3周后心脏彩超评估心脏功能,Masson染色分析心肌纤维化阳性面积百分比,免疫荧光定性分析CDC在体表达v WF,α-SA,α-SMA。结果心肌梗死3周后,EC组左室射血分数及短轴缩率(FS%)最高;EC组心肌梗死后心肌纤维化阳性面积百分比最低;EC组CDC向内皮,心肌及平滑肌细胞的分化阳性面积百分比较高,P<0.05。结论心肌组织源性的ECM能够促进植入心肌梗死组织内的CDC向心肌,内皮及平滑肌细胞分化。联合移植CDC及ECM能够取得最佳的心脏结构及功能上的益处。

心肌细胞外基质对心肌球源性心肌干细胞体外分化、增殖及凋亡影响的研究

目的研究大鼠心肌组织源性细胞外基质(ECM)对心肌球源性干细胞(CDC)体外分化、增殖及凋亡的影响。方法采用心肌组织块培养法培养大鼠CDC,采用脱细胞法制备ECM,ECM包被于培养皿上,与常规CDC培养方法比较CDC体外分化、增殖及凋亡的差异。结果 ECM能够促进CDC向血管内皮细胞,心肌肌动蛋白及平滑肌细胞分化(0.060±0.002 vs.0.043±0.002,P<0.001;0.082±0.003 vs.0.051±0.002,P<0.001;0.055±0.002 vs.0.034±0.001,P<0.001);促进CDC体外增殖,降低凋亡坏死率(0.052±0.002 vs.0.025±0.001,P<0.001)。结论本实验细胞培养法可获得表达c-kit的CDC细胞,脱细胞法提取的心肌ECM可有效脱掉心肌组织中的细胞成分,较好地保留了心肌ECM的成分和结构。体外研究证实ECM可促进CDC向血管内皮、血管平滑肌、心肌细胞分化,促进增殖、降低凋亡。

心肌球源性干细胞对急性心肌梗死的治疗作用及机制

目的探讨心肌球源性干细胞(cardiosphere-derived cells,CDCs)在急性心肌梗死模型中的保护作用及机制。方法建立心肌球源性干细胞的培养方法,将成年的SD大鼠随机分为3组:对照组(假手术)、心梗组(通过结扎冠状动脉前降支建立大鼠心肌梗死模型并向梗死区域周围心肌内注射PBS)和CDCs+心梗组(通过结扎冠状动脉前降支建立大鼠心肌梗死模型并向梗死区域周围心肌内注射CDCs)。检测各组心肌组织中活化的caspase-3蛋白表达水平,通过TUNEL染色检测心肌组织中细胞凋亡情况,通过TTC染色检测各组心肌梗死面积的差异。结果心肌梗死以后心肌组织中活化的caspase-3蛋白表达水平、凋亡细胞数目及心肌梗死面积均明显增加,而通过向梗死心肌边缘区域注射CDCs能使活化的caspase-3蛋白表达水平显著降低,凋亡细胞数目明显减少,心肌梗死面积明显减小(均P<0.05)。结论CDCs可以通过抑制心肌细胞凋亡,减小梗死面积,从而对大鼠急性心肌梗死起到保护作用。

心肌球和心肌球源性干细胞的研究进展

心肌球和心肌球源性干细胞来源于心脏,具有无性繁殖、自我更新、多向分化的潜能,移植到受损心脏后能通过直接再生、旁分泌及激活内源性修复等多种修复机制,降低心肌梗死面积、抑制心室重塑、提高心脏功能等。联合应用基因修饰、组织工程等为进一步优化心肌梗死的治疗效果带来了新的希望。

骨形态发生蛋白-2在骨髓源性心肌干细胞向心肌分化中的作用

目的研究骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对骨髓源性心肌干细胞(MCSC)向心肌分化的作用,探讨MCSC向心肌分化中的BMP-2信号转导机制.方法从SD大鼠骨髓中筛选MCSC,用BMP-2诱导向心肌定向分化.RT-PCR检测诱导前后BMP-2受体BMPRIA和BMPRII、心肌早期转录因子Nkx2.5和GATA-4以及cTnT mRNA的表达.免疫细胞化学标记诱导后细胞cTnT和Cx-43的表达.结果用BMP-2诱导后,MCSC的形态和排列发生变化.RT-PCR检测结果显示,诱导前BMPRIA和BMPRII以及Nkx2.5和GATA-4呈低表达,诱导后1周表达增加,3～4周表达明显.cTnT mRNA在诱导前不表达,诱导后1周开始表达,3～4周表达明显.免疫细胞化学染色显示,cTnT和Cx-43从诱导后2周开始表达.3～4周cTnT表达增强,呈现密集的横纹样结构.Cx-43在2周位于细胞膜下,3周分布于相邻细胞连接处,4周呈颗粒状密集分布于肌管的相邻细胞连接处. 结论BMP-2通过BMPRIA和BMPRII的介导作用诱导MCSC分化为心肌细胞.

Smad信号通路在骨髓源性心肌干细胞向心肌分化中的作用

目的研究Smad信号通路在BMP_2诱导的骨髓源性心肌干细胞(MCSCs)向心肌分化中的作用,探讨MCSCs向心肌分化的信号转导机制。方法从SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,用骨形态发生蛋白-2(BMP_2)诱导向心肌定向分化。Westernblotting和免疫细胞化学法检测诱导后细胞内磷酸化的Smadl/5/8的表达及其随诱导时间在细胞内分布的变化。RT_PCR检测诱导前后细胞内GATA_4和心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)mRNA的表达。结果BMP_2诱导后15min,细胞内可检测到磷酸化的Smadl/5/8的表达,30min^1h表达明显增加,1h后开始降低,4h呈低表达。BMP_2诱导后15min,磷酸化的Smadl/5/8仅见于胞质中,30min胞质和胞核均见表达,1h主要在胞核内表达。BMP_2诱导后2周,细胞明显表达GATA_4和cTnTmRNA。诱导后4周细胞呈现成熟心肌细胞样形态。用SB203580抑制Smad信号后,GATA_4和cTnTmRNA的表达显著降低,细胞形态变化不明显。结论Smad信号通路在BMP_2诱导MCSCs向心肌分化中发挥重要的介导作用。

5-氮杂胞苷诱导骨髓源性心肌干细胞向心肌分化过程中心肌肌钙蛋白T的表达变化

目的研究5_氮杂胞苷诱导骨髓源性心肌干细胞(MCSC)向心肌分化过程中,心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达变化和超微结构。方法从SD大鼠骨髓间充质干细胞(MMSC)中筛选MCSC,用5_氮杂胞苷诱导向心肌定向分化。取分化后不同时间的细胞作cTnT免疫细胞化学染色,并对结果进行图像分析。透射电镜下观察分化细胞的超微结构。取不同发育期和成熟期的SD大鼠心肌作对比研究。结果用5_氮杂胞苷诱导后2周,细胞内开始表达cTnT;诱导后3周,cTnT表达增强,可见横纹样结构;诱导后4周,cTnT表达明显增强,横纹增多,但排列不规则。诱导后4周的细胞内出现心房粒,可见丰富的粗面内质网和糖原。胚胎11d大鼠的心肌内,横纹样结构较少且排列不规则。新生大鼠心肌内横纹增多,排列较规则。1月龄和3月龄心肌的横纹样结构发达,排列规则。诱导分化后4周的细胞cTnT表达特征与胚胎11d的心肌相似。结论MCSC经5_氮杂胞苷诱导后可分化为心肌细胞,表现为未成熟心肌的结构和功能特征。

脂肪源性干细胞向心肌细胞分化及其移植治疗心血管疾病(英文)

背景:作为成体干细胞的一种,脂肪源性干细胞具有可塑性并且能在特定条件下分化为心肌细胞。将自体脂肪间充质干细胞移植到心肌梗死区域后,能够分化为心肌细胞及血管内皮细胞,构建新的血管故能改善心泵功能。目的:全面了解影响脂肪干细胞向心肌细胞分化及移植的各种因素,以及目前临床及实验室研究中,应用脂肪干细胞移植治疗心肌病的现状。方法:电子检索 MEDLINE (1981-01/2010- 04)、PubMed 数据库,中国生物医学文献数据库(CBM)(1990-01/2010-04)、中文学术期刊全文数据库(CNKI),筛查相关文章的参考文献,主要检索主题词包括"脂肪源性干细胞; 心肌细胞;细胞分化;细胞移植;心肌病治疗"。结果与结论:纳入综述文献 6 篇;试验研究报告 24 篇。目前脂肪源性干细胞的分离培养方法基本统一,已找到有效的体外扩增技术,但尚无直接方法进行干细胞鉴别;脂肪源性干细胞的诱导分化在体内、体外均可进行,并具有早期分化特性,比骨髓间充质干细胞更有利于向心肌细胞的分化;应针对不同类型心肌病选择不同移植方法;干细胞磁标记技术可以对已经植入体内的脂肪源性干细胞进行活体动态监测;自体移植脂肪干细胞是心肌病的一种新的治疗方法,但要将其成功用于临床实践还需找到可以抑制脂肪源性干细胞的促肿瘤细胞特性的方法以保证术后患者的长期安全性。

PI3-K/Akt信号通路对骨髓源性心肌干细胞分化的调控作用

目的研究磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（PI3-K/Akt）信号通路在骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）向心肌细胞分化中的调控作用,探讨MCSCs向心肌细胞分化的信号转导机制。方法利用单克隆培养技术从SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,用BMP-2诱导其向心肌细胞定向分化,通过免疫细胞化学标记和Western blotting检测BMP-2诱导后细胞内p-Akt水平的变化,并通过RT-PCR检测心肌早期转录因子和心肌特异基因的表达。结果BMP-2诱导前MCSCs内p-Akt水平较低,诱导后渐增强,20~30min达高峰,1h后逐渐降低。用PI3-K抑制剂Ly294002预处理细胞后,p-Akt水平明显降低。RT-PCR检测显示,诱导前MCSCs的Nkx2.5和GATA-4呈低表达,诱导后2周表达增强,4周表达更加明显。cTnT和Cx-43 mRNA在诱导前未见表达,诱导后2周表达明显,4周表达增强。用Ly294002处理后,细胞的Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA的表达显著降低,细胞形态变化不明显。结论BMP-2能诱导MCSCs向心肌细胞分化,PI3-K/Akt信号通路在BMP-2诱导MCSCs向心肌细胞分化中发挥重要的调控作用。

自聚肽纳米纤维支架承载骨髓源性心肌干细胞移植治疗心肌梗死的实验研究

目的探讨自聚肽纳米纤维支架承载骨髓源性心肌干细胞(MCSC)移植对大鼠心肌梗死后心功能恢复的影响,寻找一种更适合承载心肌干细胞治疗心肌梗死的可注射性生物材料。方法通过单细胞克隆培养技术,从骨髓间充质干细胞中筛选具有心肌特异分化潜能的MCSC,固相合成自聚多肽。将雌性大鼠心肌梗死模型随机分为3组:对照组、MCSC移植组、支架承载MCSC移植组。细胞移植后4周,用M型超声心动图检测心功能恢复情况;对心脏组织切片进行Masson染色,利用图像分析检测胶原纤维比率;用原位荧光杂交法标记心肌组织中Y染色体细胞,并检测其心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达。结果支架承载MCSC移植组与MCSC移植组相比,大鼠的心功能指数明显提高,胶原纤维比率明显减小,Y染色体阳性细胞数明显增多,差异均具有统计学意义。结论支架承载MCSC移植治疗心肌梗死,有利于移植细胞在受损心肌内的存活和向功能性心肌分化,并促进心功能恢复,其疗效优于单纯干细胞移植。

纤维蛋白胶对骨髓源性心肌干细胞增殖、迁移和缺血缺氧后的保护作用

目的探讨纤维蛋白胶(FG)对骨髓源性心肌干细胞(MCSC)增殖、迁移和存活的作用,为临床应用干细胞移植治疗心肌梗死等缺血性疾病提供实验手段和理论依据。方法将MCSC接种于FG中制备FG-MCSC,经AO/EB染色选择合适浓度的FG,用细胞计数法检测MCSC在FG中的增殖,通过损伤和自然迁移实验评价MCSC从FG中的迁出。建立细胞缺血缺氧模型(OGD),用AO/EB染色和乳酸脱氢酶(LDH)泄漏法检测FG对MCSC的保护作用。结果 MCSC在低浓度FG中保持较高的活力和增殖能力。接种后1d和2d,仅有少量细胞从FG的刮除线边缘迁出。在接种后3d,有大量细胞从FG中迁出。经缺血缺氧处理后,MCSCOGD组中存活、凋亡和坏死细胞数目分别为14.09±2.05、61.11±5.20和24.80±4.99。与MCSC OGD组相比,FG-MCSC OGD组MCSC的存活数目(61.01±8.86)较高,凋亡(31.67±8.27)和坏死(7.33±2.70)细胞数目较低。MCSC经缺血缺氧处理后,FG-MCSC OGD组LDH的水平明显低于MCSC OGD组。结论低浓度FG作为一种天然生物材料可以为MC-SC的生长提供良好的微环境。在缺血缺氧条件下,低浓度FG能够保护MCSC免受缺血缺氧损伤,促进细胞存活。

自聚肽纳米纤维支架对骨髓源性心肌干细胞的作用研究

目的研究白聚肽纳米纤维支架对骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）生长和存活的作用。方法设计和同相合成自聚肽，扫描电镜和原子力显微镜下观察其白组装后的形态结构和与MCSCs的相互关系；通过CCK-8法和免疫荧光染色检测纳米纤维支架对MCSCs增殖和分化情况。结果1％多肽溶液自组装成直径约10nm，长度为100～300nm纳米纤维，并相互交织成孔径为50～200nm的网状结构；MCSCs在纤维支架中培养1d后，可见细胞呈长梭形，位于三维纳米纤维支架的网孔中，生长状态良好；生长曲线显示细胞在纤维支架中的增殖能力明显高于对照组；MCSCs在纤维支架中诱导培养4周时，形态和排列方式均发生明显改变。结论纤维支架与MCSCs有良好生物相容性，纤维支架有利于MCSCs的生长和定向分化。

二氮嗪预处理骨髓源性心肌干细胞移植治疗心肌梗死的实验研究

目的探讨二氮嗪预处理骨髓源性心肌干细胞(MCSCs)移植治疗心肌梗死的机制及效果。方法通过单细胞克隆培养技术,从雄性幼鼠骨髓间充质干细胞中筛选具有心肌特异分化潜能的MCSCs;将雌性大鼠心肌梗死模型随机分为对照组、MCSCs移植组、二氮嗪预处理MCSCs移植组;细胞移植后4周,用M型超声心动图检测心功能恢复情况,心脏组织切片进行Masson染色,利用图像分析检测胶原纤维比率,用原位荧光杂交法标记心肌组织中Y染色体细胞,并检测其cTnT的表达。结果二氮嗪预处理细胞移植组与MCSCs移植组相比,大鼠的心功能指数明显提高,胶原纤维比率明显减小,Y染色体阳性细胞数明显增多,差异均有统计学意义。结论二氮嗪预处理MCSCs移植治疗心肌梗死,有利于移植细胞在受损心肌内的存活,并促进心功能恢复,其疗效优于单纯干细胞移植。

二氮嗪预处理对大鼠骨髓源性心肌干细胞抗氧化应激的作用

目的探讨二氮嗪预处理对大鼠骨髓源性心肌干细胞(MCSCs)在氧化应激条件下的作用。方法利用过氧化氢溶液(H2O2)处理MCSCs造成氧化应激损伤,Annexin V/PI双标记法检测细胞凋亡的情况,采用RT-PCR和免疫印迹检测二氮嗪预处理对细胞的基因表达和Akt磷酸化水平的影响。结果经二氮嗪预处理后,在氧化应激条件下MCSCs凋亡率下降,细胞的肝细胞生长因子和碱性成纤维生长因子mRNA表达显著增加,磷酸化Akt水平明显上调。结论二氮嗪预处理可以提高大鼠MCSCs的抗氧化应激能力,其机制与提高细胞的HGF和bFGF基因表达和Akt磷酸化水平有关。

骨形态发生蛋白-2诱导骨髓源性心肌干细胞向心肌细胞分化过程中形态和电生理特性的变化

目的研究骨形态发生蛋白-2(BMP-2)诱导骨髓源性心肌干细胞(MCSCs)向心肌分化中细胞形态变化、特异性蛋白的表达以及电生理学特征变化。方法从SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,用10 ng/mL BMP-2诱导培养24 h后,换成含10%胎牛血清的DMEM继续培养。相差显微镜下观察细胞的形态变化,免疫细胞化学染色观察诱导后细胞心肌特异性蛋白cTnT的表达。以正常大鼠心室肌细胞为对照,用全细胞膜片钳技术记录诱导后细胞的动作电位(AP)和L型钙电流(ICa-L)。结果 BMP-2诱导后MCSCs的形态和排列方式发生变化。诱导后4周,可见多个细胞相互连接形成肌管样结构,cTnT表达呈现密集的横纹样。诱导后3周,可记录到具有心室肌细胞特点的AP,但平台期不明显;4周细胞的AP出现明显的平台期,类似于成年大鼠心室肌细胞的AP。诱导后3周可记录到ICa-L,但电流值较小;4周细胞ICa-L的电流值增大,激活电位为-40 mV,最大激活电位为0 mV,反转电位为+60 mV,与成年大鼠心室肌细胞的ICa-L相似。结论 BMP-2能够诱导MCSCs向心肌分化,分化后的细胞在形态和电生理学方面具有功能性心肌细胞的特征。

外源性内皮素-1对兔骨髓间质干细胞诱导的心肌样细胞中GATA-4转录因子磷酸化的影响

目的 研究外源性内皮素 - 1(ET - 1)对经 5 -氮胞苷体外诱导兔骨髓间质干细胞分化的心肌样细胞转录因子GATA - 4磷酸化的影响。方法 取幼年兔股骨干骨髓基质细胞经 5 -氮胞苷诱导分化为心肌样细胞 ,分别加入不同浓度 (10、30、5 0nmol/L)的外源性ET - 1,Western -blot分析心肌细胞GATA - 4转录因子的蛋白表达及其磷酸化的改变。结果 分化的心肌样细胞可表达心肌细胞特异性GATA - 4转录因子 ;外源性ET - 1不影响GATA - 4蛋白表达 ,但可快速诱导GATA - 4转录因子的磷酸化 ;其中 ,30nmol/LET - 1时GATA - 4转录因子磷酸化的程度最高。结论 ET - 1可介导 5 -氮胞苷诱导兔骨髓间质干细胞分化的心肌样细胞GATA - 4转录因子的磷酸化而影响其活性。

脂肪源性干细胞移植急性心肌梗死后心脏缝隙连接蛋白43的表达

背景:脂肪源性干细胞作为一种新型的种子细胞,移植后对大鼠心肌梗死治疗作用的研究报道较少。目的:观察脂肪源性干细胞移植后对急性心肌梗死大鼠心功能和缝隙连接蛋白43表达的影响。方法:分离培养SD大鼠脂肪源性干细胞。将SD大鼠分为3组,心肌梗死组、脂肪源性干细胞移植组均建立急性心肌梗死模型,假手术组开胸不结扎。脂肪源性干细胞移植组于心肌梗死后30min心肌内分4点注射脂肪源性干细胞,每点25μL;其他2组分别注射等量的PBS。移植2周后行相应指标观察。结果与结论:心脏彩超结果显示,与心肌梗死组相比,脂肪源性干细胞移植组的左室射血分数、短轴缩短率均上升(P<0.05)。马森三色染色结果显示,脂肪源性干细胞移植组纤维渗出率明显低于心肌梗死组(P<0.05)。免疫荧光结果显示,与心肌梗死组比较,脂肪源性干细胞组缝隙连接蛋白43表达和血管密度均显著上升(P<0.05-0.01)。实时聚合酶链反应结果表明,脂肪源性干细胞移植组缝隙连接蛋白43mRNA的表达高于心肌梗死组(P<0.01)。提示脂肪源性干细胞移植不仅可以显著改善心肌梗死后心功能,还可以减少纤维渗出,上调缝隙连接蛋白43的表达。

携带miR-122a的间充质干细胞来源外泌体对糖尿病性心肌病的作用研究

目的:探究携带miR-122a的间充质干细胞来源外泌体对糖尿病性心肌病(DCM)的作用及其相关分子机制。方法:将miR-122a和miR-NC转染至分离的小鼠骨髓来源间充质干细胞(BMSC),提取BMSC外泌体(BMSC-Exos)并通过Western blot鉴定。将30只C57/B6小鼠平均分为:对照组、miR-122a组和miR-NC组。除对照组外,miR-122a组和miR-NC组通过高脂高糖饮食联合STZ诱导DCM模型,随后miR-122a组和miR-NC组分别尾静脉注射BMSC-Exos-miR-122a和BMSC-ExosmiR-NC,而对照组腹腔注射等量枸橼酸钠缓冲液。结束实验后检测各组小鼠心功能指标,通过HE检测心肌组织病理水平,ELISA检测心肌组织ROS、IL-1β、IL-6和TNF-α水平,western blot检测小鼠心肌组织LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Beclin1和γH2AX蛋白表达水平。结果:细胞转染后,与BMSC-miR-NC比较,BMSC-miR-122a中miR-122a表达升高(P<0.05)。提取的BMSC-Exos有典型的Exo形态,粒径大约为100nm,外泌体标志蛋白CD63和CD81高表达。与对照组比较,miR-NC组舒张末期室间隔厚度(IVSd)、舒张末期后壁厚度(PWd)、左室短轴缩短率(LVFS)、每搏输出量(SV)、心排出量(CO)降低(P<0.05),左室舒张末期内径(LVDd)、左室收缩末期内径(LVDs)、左室质量(LVM)升高(P<0.05);心肌结构紊乱,炎性细胞浸润增加;心肌组织ROS、IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达水平降低(P<0.05),γH2AX蛋白表达水平升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-122a组IVSd、PWd、LVFS、SV、CO升高(P<0.05),LVDd、LVDs、LVM降低(P<0.05);心肌结构恢复,炎性细胞浸润减少;心肌组织ROS、IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Bec-lin1蛋白表达水平升高(P<0.05),γH2AX蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:DCM会引发心肌细胞自噬水平大幅度降低。携带miR-122a的BMSC-Exos可通过恢复心肌细胞自噬水平,降低炎性水平和细胞损伤,改善DCM的疾病症状。

脂肪源性干细胞向心肌细胞诱导分化的研究进展

脂肪源性干细胞因具有生物学特性稳定、来源广泛、取材方便、数量充足、易于培养扩增的优点,且在特定的诱导条件下可以分化为心肌细胞,有望成为细胞治疗的理想来源。诱导方法的选择,影响分化因素的研究已成为了细胞治疗领域研究的热点。本文就脂肪源性干细胞向心肌细胞诱导分化的方法和机制的研究进展进行综述。

不同年龄大鼠骨髓源性心肌干细胞生物学特性的比较

目的研究不同年龄大鼠骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）形态和衰老相关指标的差异,探讨年龄因素对MCSCs增殖、存活和向心肌细胞分化的影响。方法利用单细胞克隆培养技术从幼年、成年和老年雄性SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,透射电镜下观察细胞超微结构改变。SA-β-半乳糖苷酶染色和活性氧（ROS）染色检测细胞衰老变化,流式细胞术分析细胞周期分布。Annexin V/PI双标流式细胞术和Hochest33342染色检测细胞存活和凋亡。用骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导不同年龄组MCSCs向心肌细胞分化,通过RT-PCR检测诱导后心肌早期转录因子和心肌特异基因的表达,并通过免疫细胞化学染色检测各年龄组细胞经（BMP-2）诱导后细胞内心肌特异性肌钙蛋T（cTnT）表达的变化。结果老年组MCSCs核质比减小,胞质内可见髓样小体。随着年龄增长,处于增殖期的MCSCs比例下降,β-半乳糖苷酶和ROS阳性细胞数目增多。老年组存活细胞比例较幼年组降低。用BMP-2诱导后4周,幼年组细胞的Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA表达明显,成年组和老年组细胞表达低于幼年组,差异有显著性意义。免疫细胞化学染色显示,BM...