心脏康复训练对冠心病PCI术后体适能、心肌酶谱及Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的探究心脏康复训练对冠心病经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后体适能、心肌酶谱及核因子E2相关因子/血红素氧合酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路的影响。方法纳入2022年10月至2023年10月期间于眉山市中医医院接受PCI治疗的冠心病患者100例,根据术后干预方案不同分为观察组(n=52)与对照组(n=48)。对照组予以常规基础干预,观察组在其基础上联合心脏康复训练。比较两组的干预前后的体适能情况、心肌酶谱指标以及Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA表达水平;比较两组干预前后的西雅图心绞痛量表(SAQ)以及中国心血管病人生活质量评定问卷(CQQC)评分。结果干预后观察组的心肺适能、柔韧适能、平衡适能较对照组及干预前均改善,差异有统计学意义(t=3.508、2.183、2.660、2.097、1.921,P<0.05);两组干预后的肌钙蛋白I(cTnI)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平较干预前均较低,且观察组显著低于对照组,差异有统计学意义(t=5.448、11.694、11.020、10.185、8.488,P<0.05);两组干预后的Nrf2 mRNA以及HO-1mRNA水平较干预前均升高,且观察组显著高于对照组,差异有统计学意义(t=41.478、37.970,P<0.05);干预后两组的SAQ、CQQC评分较干预前均升高,且观察组显著高于对照组,差异有统计学意义(t=5.945、20.328,P<0.05)。结论心脏康复对于冠心病PCI术后患者的康复效果显著,能提升体适能水平、改善心肌酶谱指标,可能与调节机体内Nrf2/HO-1信号通路有关。

丹蛭降糖胶囊通过上调Nrf2/HO-1信号通路减轻糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化

目的基于核转录因子E2相关因子(Nrf2)/血红素加氧酶(HO)-1信号通路观察丹蛭降糖胶囊(DJC)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌纤维化的影响。方法80只雄性SD大鼠随机选取10只作为空白对照组,其余70只采用高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)55 mg/kg建立2型DCM模型,最后65只大鼠造模成功,随机分为DJC低、中、高剂量组、二甲双胍组和模型组,DJC低、中、高剂量组按成人6 g/d等效剂量的0.5、1.0、2.0倍(270、540、1080 mg/kg)灌胃处理;二甲双胍组给予二甲双胍150 mg/(kg·d)剂量灌胃处理;模型组给予等容量蒸馏水灌胃处理,每组各13只,空白对照组给予等量蒸馏水,干预8 w后,麻醉状态下取材。取血清和心肌组织,检测血清空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、心肌谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS);采用苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌组织病理学变化;用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测心肌GSH-Px、SOD、MDA、ROS的表达;Western印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测心肌组织Nrf2、HO-1蛋白和基因表达水平。结果与空白对照组比较,模型组光镜下心肌纤维走行较为紊乱,部分溶解、断裂,胞核位置不一,细胞间界限不清,间质出现纤维细胞增生。与模型组比较,DJC各剂量组和二甲双胍组光镜下心肌细胞病变明显减轻。与空白对照组比较,模型组血清FPG、HbAlc、TC、TG及心肌MDA、ROS含量显著升高,心肌GSH-Px、SOD含量及Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对表达水平显著下降(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,DJC各剂量组和二甲双胍组血清FPG、HbA1c、TC、TG及心肌MDA、ROS含量明显下降,心肌GSH-Px、SOD含量及Nrf2 mRNA及蛋白相对表达水平显著升高,DJC中、高剂量组和二甲双胍组心肌HO-1 mRNA及蛋白相对表达水平显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论DJC可能通过上调Nrf2/HO-1信号通路,减轻氧化应激损伤,改善糖脂代谢水平,延缓DCM大鼠心肌纤维化,发挥心肌保护作用。

通络熄风汤介导Nrf2/HO-1信号通路改善糖尿病心肌损伤的作用机制

目的:观察通络熄风汤对2型糖尿病模型大鼠心肌细胞损伤的作用及其对核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路介导的细胞氧化应激的影响。方法:将大鼠分为正常组、模型组及中药组。利用链脲佐菌素(STZ)注射法构建糖尿病大鼠模型。中药组给予中药配方颗粒通络熄风汤悬浮液灌胃治疗,正常组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃,连续8周。采用透射电镜观察心肌组织的超微结构。检测超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧(ROS)水平;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和实时荧光聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌细胞Nrf2/HO-1蛋白及mRNA表达水平。结果:与模型组比较,中药组大鼠体质量及血糖指标改善,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,中药组大鼠心肌细胞组织超微结构得到恢复,ROS水平降低,SOD水平,Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:通络熄风汤通过激活Nrf2/HO-1信号减轻心肌组织细胞氧化应激损伤,提高抗氧化酶活性,保护心脏功能。

基于Keap1/Nrf2/ARE通路的中医药干预骨关节炎研究进展

骨关节炎是临床上常见的一种慢性筋骨疾病,其病程缠绵,反复发作,发病机制复杂,与氧化应激反应相关。Keap1/Nrf2/ARE信号通路是细胞氧化应激反应中的关键通路,其调控的下游抗氧化蛋白/酶在细胞防御保护中发挥重要作用。骨关节炎的病程中Nrf2、NQO1、HO-1等关键蛋白表达受到抑制,组织抗氧化及抗炎能力减弱,软骨细胞损伤,软骨结构破坏。目前西医的治疗侧重于缓解症状,但不能逆转骨关节炎的进展,急需有效的非手术策略来延缓骨关节炎的病理过程。近年来,大量基础及临床试验表明Keap1/Nrf2/ARE通路是中医药治疗骨关节炎的潜在靶点之一。基于骨关节炎本虚标实的病机,中医药以补虚、化瘀、解毒等法调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路,在发挥抗氧化及抗炎作用同时,还能调节软骨细胞外基质的稳态,发挥对骨关节炎的治疗作用。本文总结了中医药靶向干预Keap1/Nrf2/ARE信号通路防治骨关节炎的作用机制,旨在为中医药更合理的运用临床防治骨关节炎提供理论基础。

金雀异黄酮对糖尿病大鼠心肌Nrf2/HO-1通路的影响

目的:观察金雀异黄酮(genistein,Gen)对糖尿病大鼠心肌组织核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素氧化酶1(heme oxygenase-1,HO-1)通路的影响。方法:将32只雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照(NC)组、糖尿病对照(DM)组、低剂量Gen治疗(L-Gen)组和高剂量Gen治疗(H-Gen)组(n=8)。采用腹腔注射55mg/kg链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。造模成功后,L-Gen组和H-Gen组大鼠分别灌胃给予Gen溶液10和50 mg/kg。8周后,测定各组大鼠左心室动力学指标和空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)水平;测定心肌组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)水平;采用透射电镜观察心肌超微结构变化;RT-PCR检测心肌组织HO-1 mRNA表达,蛋白质印迹法检测Nrf2和HO-1蛋白表达。结果:与NC组比较,DM组左心室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP),左心室内压最大上升/下降速率(maximal rise/fall rate of left ventricular pressure,±dp/dtmax),GSH-Px,SOD和CAT水平明显降低(均P<0.01);左心室舒张末期压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP),FBG和MDA水平明显增高(均P<0.01);心肌超微结构损伤明显,心肌组织Nrf2和HO-1表达明显降低(均P<0.01)。与DM组比较,L-Gen组FBG无显著差异,±dp/dtmax和LVSP明显升高(均P<0.05),LVEDP和MDA水平明显下降(P<0.05或P<0.01),GSH-Px,SOD和CAT活性明显增高(P<0.05或P<0.01),心肌超微结构损伤减轻,Nrf2和HO-1表达升高(均P<0.01);H-Gen组上述指标改善更明显(P<0.05或P<0.01)。结论:金雀异黄酮可减轻糖尿病大鼠心肌氧化应激损伤,其机制与调节心肌Nrf2/HO-1通路,提高抗氧化酶活性相关。

乌梅丸调控Keap-1-Nrf2/HO-1信号通路抑制溃疡性结肠炎小鼠氧化应激损伤

目的研究乌梅丸调控Kelch样ECH相关蛋白1(Keap-1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠氧化应激损伤的抑制作用。方法将40只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、低剂量实验组和高剂量实验组,每组8只。自由饮用2%DSS水溶液的方法复制UC模型。造模同时,正常组和模型组小鼠灌胃等体积0.9%NaCl,阳性对照组小鼠灌胃美沙拉嗪(5-ASA)溶液0.005 g·10 g^(-1)·d^(-1),低、高剂量实验组小鼠分别灌胃乌梅丸水煎液0.13、0.26 g·10 g^(-1)·d^(-1),持续7 d。评价小鼠疾病活动指数(DAI)和结肠长度变化;用实时荧光定量聚合酶链反应检测小鼠结肠组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、环氧酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平;用蛋白质印迹法检测小鼠结肠Kelch样ECH相关蛋白(Keap-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的表达水平。结果正常组、模型组、阳性对照组和低、高剂量实验组第7天的DAI分别为0、2.62±0.33、1.87±0.35、1.87±0.35和1.58±0.35,结肠长度分别为(8.16±0.47)、(5.98±0.24)、(7.58±0.38)、(7.33±0.24)和(7.48±0.51)cm,SOD mRNA表达水平分别为1.01±0.16、0.40±0.01、1.43±0.45、0.65±0.01和0.83±0.02,CAT mRNA表达水平分别为1.01±0.20、0.45±0.01、0.84±0.02、0.68±0.07和0.87±0.05,COX-2 mRNA表达水平分别为1.03±0.33、16.65±0.60、4.78±0.25、14.07±0.60和7.39±0.15,iNOS mRNA表达水平分别为1.04±0.40、20.71±0.66、8.09±0.93、15.44±0.68和11.66±0.06,Keap-1蛋白表达水平分别为1.22±0.16、1.10±0.05、1.18±0.05、1.94±0.08和1.17±0.08,Nrf2蛋白表达水平分别为1.12±0.16、0.76±0.15、0.65±0.13、0.70±0.16和0.82±0.18,HO-1蛋白表达水平分别为1.34±0.15、1.00±0.12、0.89±0.10、1.50±0.18和1.40±0.13。模型组的上述指标与正常组比较,低、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论乌梅丸对溃疡性结肠炎小鼠具有抗氧化应激损伤作用,其作用机制可能与调节结肠Keap-1-Nrf2/HO-1信号通路蛋白表达有关。

铁死亡相关调控信号通路在非酒精性脂肪肝中的研究进展

非酒精性脂肪肝是一种慢性肝病,随着高血压、肥胖、高脂血症、糖尿病的发生其发病率呈逐年递增趋势。铁死亡是一种新型的非凋亡形式受调控细胞死亡,其特征是脂质过氧化物的大量积累,引发多种疾病,以铁死亡的角度去研究疾病的治疗靶点可以为疾病的治疗提供新的临床解决方案。近年来研究发现,铁死亡相关调控信号通路在非酒精性脂肪肝的发生、发展过程中有重要意义,其中核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)均为常见的铁死亡相关信号通路。现就上述相关信号通路与非酒精性脂肪肝的研究进展进行梳理,为非酒精性脂肪肝的治疗提供指导。

Nrf2/HO-1信号通路在心肌梗死中的作用及中医药干预研究进展

心肌梗死(MI)是临床常见的一种心血管系统疾病,是造成心血管病死亡的主要原因之一,其发病机制复杂,与氧化应激反应相关。核转录因子E_(2)相关因子2(Nrf2)是调节氧化应激反应的关键因子,可调控其下游血红素氧合酶-1(HO-1)的表达,在机体中发挥维持氧化还原稳态的作用。MI的病程中Nrf2与HO-1的生物活性及含量水平均下降,组织抗氧化和抗炎能力减弱,心肌血管内皮受损,血管细胞黏附因子释放,血管内皮功能发生障碍。近年来,诸多基础研究探索中医药通过调控Nrf2/HO-1信号通路治疗MI的作用及机制,结果表明Nrf2/HO-1信号通路是中医药治疗MI的重要潜在靶点。该文就Nrf2/HO-1信号通路在MI中的作用机制及靶向调控该通路的中医药研究进展进行了综述,以期为MI疾病的防治以及进一步的药物开发提供理论依据。

麝香对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的:探讨麝香对阿尔兹海默症(AD)细胞模型氧化应激损伤及凋亡的保护作用。方法:使用LC-MS/MS法分析麝香化学成分。通过β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))诱导PC12细胞建立体外AD细胞模型,采用CCK-8法测定PC12细胞存活率,考察Aβ_(1-42)对PC12的细胞毒性及麝香对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞损伤的保护作用;采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测麝香对Aβ_(1-42)致PC12细胞凋亡的影响,JC-1法检测麝香对Aβ_(1-42)致PC12细胞线粒体膜电位的影响;采用探针DCFH-DA检测麝香对Aβ_(1-42)致PC12细胞内活性氧(ROS)的影响;采用超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒检测麝香对Aβ_(1-42)致PC12细胞内抗氧化酶活性水平的影响;采用Western blot法检测PC12细胞内相关凋亡蛋白BAX、BCL-2和Cleaved caspase-3的表达以及核因子红细胞2相关因子2(Nrf-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)和Kelch样ECH相关蛋白1(Keap 1)的表达。结果:通过LC-MS/MS法鉴定出麝香的7种化学成分分别为:次黄嘌呤、雄烯二酮、表睾酮、十六碳酰胺、麝香酮、油酸酰胺、硬脂酰胺。与空白对照组比较,模型对照组PC12细胞存活率显著降低(P<0.01),细胞内ROS水平、细胞凋亡率显著升高(P<0.01),线粒体膜电位明显降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活力明显降低(P<0.05或P<0.01),BAX、Cleaved caspase-3和Keap 1蛋白表达明显上调,BCL-2、Nrf-2和HO-1蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,麝香0.025、0.05、0.1 mg/mL组细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01),细胞内ROS水平、细胞凋亡显著减少(P<0.01),SOD活力明显升高(P<0.05或P<0.01);其中0.05和0.1 mg/mL组中线粒体膜电位显著升高(P<0.01),BAX、Cleaved caspase-3和Keap 1蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);麝香0.1 mg/mL组GSH-Px活力显著升高(P<0.01),BCL-2、Nrf-2和HO-1蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:麝香通过Nrf-2/HO-1通路显著改善Aβ_(1-42)诱导的AD细胞模型的氧化应激和凋亡。

miRNA-589-5p调控氧糖剥夺人脑微血管内皮细胞损伤的机制

目的 微小核糖核酸-589-5p(miRNA-589-5p)、组蛋白去乙酰化酶(HDAC)3对氧糖剥夺人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响,并探索其潜在的作用机制。方法 HBMEC细胞分为对照组、氧糖剥夺组;运用脂质体法将氧糖剥夺+miRNA-con组(转染miRNA-con)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p组(转染miRNA-589-5p的模拟物序列)、氧糖剥夺+miRNA-si-con组(转染miRNA-si-con)、氧糖剥夺+si-HDAC3组(转染si-HDAC3)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p+pcDNA组(共转染miRNA-589-5p的模拟物序列和pcDNA)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p+pcDNA-HDAC3组(共转染miRNA-589-5p mimics和pcDNA-HDAC3)转染至HBMEC,并行氧糖剥夺处理;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western印迹检测细胞中miRNA-589-5p、HDAC3 mRNA表达和HDAC3、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2、核因子2相关因子(NRF)2、血红素氧合酶(HO)-1蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH);膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC/PI)试剂盒检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测细胞荧光活性。结果 与对照组相比,氧糖剥夺组细胞miRNA-589-5p表达水平明显降低,HDAC3表达、LDH、细胞凋亡率、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达、NRF2/HO-1信号通路关键基因NRF2核蛋白/PCNA、HO-1蛋白表达均显著降低(P<0.05);过表达miRNA-589-5p或沉默HDAC3均可明显抑制氧糖剥夺对HBMEC细胞上述指标的调控。双荧光素酶报告实验显示,miRNA-589-5p明显抑制野生型HDAC3细胞的荧光活性,并负向调控HDAC3的蛋白表达。过表达HDAC3部分逆转过表达miRNA-589-5p对氧糖剥夺诱导HBMEC细胞的LDH、凋亡的抑制和NRF2/HO-1信号通路的激活作用。结论 miRNA-589-5p抑制氧糖剥夺对HBMEC细胞的损伤,其作用机制与靶向HDAC3,激活NRF2/HO-1信号通路有关。

氧化苦参碱调节Nrf2/HO-1信号通路对HUVEC细胞损伤的改善作用

【目的】探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)氧化应激(oxidative stress,OS)损伤的保护机制,为进一步研发预防高原缺氧药物提供理论依据。【方法】将HUVEC分为以下5组:(1)对照组:不给予任何处理。(2)模型组:细胞培养液中加入终浓度450μmol/L的H2O2培养2 h。(3)、(4)和(5)OMT预处理组:分别将10、20和30μmol/L OMT加入细胞培养基中预处理12 h,再向其加入终浓度为450μmol/L的H2O2培养2 h。观察5组细胞的代谢活力、细胞形态、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽还原酶(glutathione,GSH)活性、细胞凋亡情况和B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemias-2,Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(bcl-2 associated x protein,Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)、心肌组织核因子相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达水平。【结果】与模型组比较,OMT低、中、高预处理组细胞形态逐渐恢复,代谢活力显著升高;细胞上清液中LDH漏出量降低,细胞内SOD、GSH活性增加,MDA含量下降;细胞凋亡率降低;Bax、Caspase3蛋白水平表达下降,Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白水平表达升高,具有统计学意义(P<0.05)。【结论】OMT通过提高细胞内源性抗氧化酶活性、上调Nrf2/HO-1信号通路及抑制细胞线粒体凋亡途径保护OS损伤的HUVEC细胞。

补阳还五汤对特发性肺纤维化大鼠Keap1/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路的影响

目的:观察补阳还五汤对特发性肺纤维化(IPF)大鼠Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)抗氧化信号通路的影响,探讨该方干预IPF的作用机制。方法:将40只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、尼达尼布组,每组10只。除假手术组外,其余各组气管内滴注博来霉素(0.005 g·kg^(-1))制备IPF大鼠模型。补阳还五汤组灌服补阳还五汤煎液(14.84 g·kg^(-1)),尼达尼布组灌服尼达尼布混悬液(0.1 g·kg^(-1)),假手术组、模型组灌服等容积生理盐水,共28 d。肺功能检测后,取血清及肺组织。苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色观察肺组织病理改变并行半定量分析;检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;测定血清和肺组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测Keap1、Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠呼吸系统阻力和弹力增高,顺应性显著降低(P<0.01);肺指数和病理评分、HYP含量显著升高(P<0.01);血清和肺组织MDA含量增加,SOD、GSH-Px、CAT活性显著降低(P<0.01);肺组织Keap1 mRNA与蛋白表达降低,Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,补阳还五汤组大鼠呼吸系统阻力和弹力下降,顺应性显著升高(P<0.01);肺指数、病理评分、肺组织HYP含量显著降低(P<0.01);血清和肺组织MDA含量下降、SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高(P<0.01);肺组织Keap1表达降低,Nrf2、HO-1表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:补阳还五汤可启动Keap1/Nrf2/HO-1介导的抗氧化效应,增强机体抗氧化能力,延缓IPF大鼠病理进程。

芒柄花素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制

目的探究芒柄花素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芒柄花素低、中、高剂量组及维拉帕米组(阳性对照),除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法构建心肌缺血再灌注损伤大鼠模型,芒柄花素低、中、高剂量组分别灌胃10、20、40 mg/kg芒柄花素,维拉帕米组灌胃20 mg/kg维拉帕米。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清心肌损伤和炎症反应指标,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理损伤,生化试剂盒检测氧化应激指标,Western印迹检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化(p)-Akt、细胞内核因子E2相关因子(Nrf)2、p-Nrf2及血红素加氧酶(HO)-1的表达。结果与假手术比较,模型组磷酸肌酸激酶同工酶(CK-Mb)、肌红蛋白(Mb)、心肌肌钙蛋白(cTn)I、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、丙二醛(MDA)均升高,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物歧化酶(GSH-Px)、p-Akt/Akt、p-Nrf2/Nrf2、HO-1表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,维拉帕米组、芒柄花素中、高剂量组CK-Mb、Mb、cTnI、TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA均降低,SOD、GSH-Px、p-AKT/AKT、p-Nrf2/Nrf2、HO-1表达均升高,差异有统计学意义(均P<0.05),而芒柄花素高剂量组与维拉帕米组上述指标的比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论芒柄花素可保护大鼠心肌缺血再灌注损伤,减轻炎症反应和氧化应激水平,可能与上调Akt/Nrf2/HO-1表达有关。

芪参益气滴丸对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的:探讨芪参益气滴丸(QSYQ)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌细胞凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药对照组(6.75 mg·kg^-1·d^-1卡托普利)、低剂量(135 mg·kg^-1·d^-1)QSYQ组和高剂量(270 mg·kg^-1·d^-1)QSYQ组,每组12只。采用冠状动脉前降支结扎法建立CHF模型,造模成功后连续灌胃给药4周,超声心动图检测大鼠心功能,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标志法(TUNEL)检测大鼠心肌细胞凋亡率,比色法测定大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平,流式细胞术检测大鼠心肌组织中活性氧(ROS)水平,Western blotting法检测大鼠心肌组织中凋亡相关蛋白和核因子E2相关因子2(Nrf2)及血红素氧化酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠左室收缩末期内径(LVSD)和左室舒张末期内径(LVDD)明显增加(P<0.05),左室射血分数(EF)和左室短轴缩短率(FS)明显降低(P<0.05),棕黄色心肌细胞数明显增多(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),血清中LDH活性及ROS和MDA水平明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05),心肌组织中活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-Caspase-3)和B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2、Nrf2和HO-1蛋白水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,高剂量QSYQ组和阳性药对照组大鼠LVSD和LVDD明显降低(P<0.05),EF和FS明显升高(P<0.05),棕黄色心肌细胞数明显减少(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),血清中LDH活性及ROS和MDA水平明显降低(P<0.05),SOD活性明显升高(P<0.05),心肌组织中Cleaved-Caspase-3和Bax蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而低剂量QSYQ组大鼠上述各相关指标差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,高剂量QSYQ组大鼠心肌组织中Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),阳性药对照组和低剂量QSYQ组大鼠心肌组织中Nrf2和HO-1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:QSYQ可抑制CHF大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路、降低氧化损伤有关。

三七总皂苷对冠心病大鼠心肌的保护作用

目的 观察三七总皂苷(PNS)对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的保护作用,探究其作用机制。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、PNS组、PNS+ML-385(Nrf-2抑制剂)组和ML-385组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠用高脂饲料喂养联合垂体后叶注射液腹腔注射建立CHD模型。连续给药治疗4周后,观察心肌组织损伤,检测血脂水平、心肌损伤指标、炎性因子及氧化应激因子的水平,RT-qPCR检测心肌半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA水平,Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf-2)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达情况的改变。结果 与对照组比较,模型组大鼠心肌损伤明显,血脂水平异常,血清心肌损伤指标及炎性因子水平显著升高,氧化应激反应加重,心肌组织Caspase-3和Bax mRNA表达增加,Bcl-2 mRNA表达降低,Nrf2和HO-1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,PNS可减轻CHD大鼠心肌损伤,调整血脂水平,减轻炎症和氧化应激反应,心肌组织Caspase-3和Bax mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达增加,Nrf2和HO-1蛋白表达水平增加,而Nrf-2抑制剂ML-385可显著减弱PNS对CHD的治疗作用,抑制Nrf-2/HO-1信号通路的激活(P<0.05)。结论 PNS能够改善CHD大鼠心肌损伤,其机制可能与调控Nrf-2/HO-1信号通路的激活有关。

血塞通(三七皂苷)对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤的抑制作用

目的研究三七皂苷(血塞通)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法将H9c2心肌细胞随机分成5组:对照组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂组。对照组细胞正常培养不做任何处理;模型组调整培养基,再进行缺氧/复氧处理;低剂量实验组、高剂量实验组和Nrf2抑制剂组:用0.30,0.60 mg·mL^(-1)血塞通溶液和0.60 mg·mL^(-1)血塞通溶液+2μmol·L^(-1)Nrf2抑制剂ML385预处理后,再进行缺氧/复氧处理。检测各组细胞存活率;用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量和细胞凋亡;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞凋亡相关蛋白及Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平。结果对照组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和Nrf2抑制剂组的细胞存活率分别为(100.00±1.23)%,(47.93±6.69)%,(63.11±5.90)%,(75.56±4.20)%和(48.27±4.63)%,凋亡率分别为(3.66±0.69)%,(69.10±4.26)%,(49.98±5.79)%,(26.44±5.78)%和(67.62±5.72)%;细胞上清LDH水平分别为(154.22±6.45),(255.47±9.37),(216.87±11.27),(185.98±14.18),(246.74±8.61)U·L^(-1);SOD活性分别为(34.80±3.81),(15.43±2.12),(20.83±1.11),(33.11±2.51),(21.65±2.44)U·mg^(-1);MDA含量分别为(1.29±0.20),(3.57±0.41),(3.19±0.22),(1.53±0.30),(3.32±0.18)nmol·mg^(-1);ROS相对荧光强度分别为1.07±0.17,3.88±0.61,3.16±0.31,1.65±0.26,3.19±0.28;模型组与对照组比较,高、低剂量实验组间,高、低剂量实验组与模型组比较,Nrf2抑制剂组与高剂量实验组、对照组、模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。蛋白质印迹结果显示,缺氧复氧处理显著提升了H9c2细胞中cleaved-caspase 3和Bax表达水平,降低了Bcl-2表达(P<0.05)。随着血塞通处理浓度的上调,cleaved-caspase 3和Bax的高表达被抑制,Bcl-2,Nrf2和HO-1的表达上调(P<0.05)。加入Nrf2抑制剂后,血塞通对cleaved-caspase 3和Bax的表达抑制,Bcl-2和HO-1的表达增强功能均消失(P<0.05)。结论血塞通可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤,发挥对心肌细胞损伤的保护作用。

原花青素对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤的抑制作用

目的探讨原花青素(PCs)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法取对数期H9c2心肌细胞随机分成5组:对照组、模型组、Nrf2抑制剂组和低、高剂量实验组。用噻唑蓝(MTT)法测定各组细胞活力,以比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量和细胞凋亡,用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白及核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平。结果对照组、模型组、低、高剂量实验组和Nrf2抑制剂组的细胞存活率分别为(100.00±2.00)%,(47.67±4.05)%,(64.39±5.11)%,(83.19±2.83)%,(58.23±4.72)%;细胞上清LDH水平分别为(156.82±6.30),(258.32±9.42),(215.97±10.67),(171.88±14.18),(247.84±7.71)U·L^-1;SOD活性分别为(35.70±3.81),(17.32±2.12),(21.53±1.11),(32.11±2.51),(20.65±2.44)U·mL^-1;MDA含量分别为(1.12±0.20),(3.45±0.41),(3.07±0.22),(1.49±0.30),(3.12±0.18)nmol·mL^-1;ROS相对荧光强度分别为1.02±0.12,3.87±0.61,3.17±0.31,1.63±0.26,3.17±0.28;细胞内激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase-3)蛋白相对表达量分别为1.00±0.04,4.34±0.43,3.83±0.41,1.09±0.18,2.58±0.16;B淋巴瘤-2基因相关X(Bax)蛋白相对表达量分别为0.99±0.03,3.23±0.21,2.65±0.21,1.30±0.04,2.04±0.13;B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白相对表达量分别为1.00±0.03,0.30±0.04,0.62±0.07,3.45±0.17,0.33±0.02;Nrf2蛋白相对表达量分别为1.00±0.04,1.00±0.30,1.09±0.17,3.09±0.18,0.80±0.09;HO-1蛋白相对表达量分别为0.99±0.03,1.11±0.20,1.00±0.14,2.88±0.32,0.84±0.06。上述指标,高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);Nrf2抑制剂组与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论PCs可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤,发挥对心肌细胞损伤的保护作用。