罗格列酮对急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的影响

目的探讨过氧化体增殖物激活型受体γ在调节急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶9、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1中的作用。方法用不同浓度罗格列酮干预急性冠状动脉综合征患者和对照者单核细胞源性巨噬细胞,然后测定各组上清液中基质金属蛋白酶9、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1浓度及单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1mRNA的表达。结果干预后,急性冠状动脉综合征组及对照组过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达上调,表达强度与罗格列酮浓度呈正变关系;基质金属蛋白酶9表达下调,在急性冠状动脉综合征组其下调程度与罗格列酮浓度呈反变关系;组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达无明显变化。结论罗格列酮干预可上调单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达,下调基质金属蛋白酶9表达,在急性冠状动脉综合征组尤其明显,对组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达无明显影响;可能存在稳定动脉粥样斑块的作用。

毛乳头细胞凝集性生长与细胞外基质分泌关系的组织化学研究

目的 研究毛乳头细胞的凝集性生长方式与其产生的细胞外基质之间的关系。方法 用人头皮分离的低传代毛乳头细胞与毛发上皮细胞共同培养形成的毛乳头细胞凝集性生长区及非凝集生长区的毛乳头细胞进行阿新蓝、过碘酸雪夫氏染色 ,观察染色反应的强弱。结果 新分离的毛乳头 ,阿新蓝和过碘酸雪夫氏染色均呈强阳性 ,培养的毛乳头细胞凝集性生长区阿新蓝—过碘酸雪夫氏染色亦显示强阳性 ,而非凝集区的毛乳头细胞显色呈弱阳性。结论 培养的毛乳头细胞凝集性生长后 。

软骨脱细胞基质复合脂肪源性干细胞构建软骨组织的实验研究

[目的]探讨软骨脱细胞基质支架材料的制备,及其体外复合脂肪源性干细胞构建软骨组织的技术方法。[方法]成年新西兰大白兔脂肪源性干细胞获得,培养,扩增。成年新西兰大白兔新鲜软骨,低温冻干12 h,后经曲拉通、DNA、RNA酶等处理制备成为软骨脱细胞基质支架材料,终浓度为2×107/L的脂肪干细胞种植于软骨脱细胞基质中于软骨细胞方向诱导培养基中培养2周,构建软骨组织。新鲜制备的软骨脱细胞基质及构建的软骨组织分别行组织学、免疫组织化学及透射电镜检测。[结果]实验制备的软骨脱细胞基质支架材料内无细胞结构存在,仅残留空白软骨陷窝。具有合适的孔隙率和孔径大小;复合脂肪源性干细胞后细胞向材料内部迁移,粘附,生长良好。部分载体内细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。[结论]软骨脱细胞基质可作为支架材料应用于软骨组织工程,复合脂肪源性干细胞培养可成功构建软骨组织。

狗骨髓基质干细胞体外分化为肌源性细胞的初步观察

用贴壁法体外分离骨髓基质干细胞 ,实验组 5 氮胞苷诱导 ,对照组加入等量培养基 ,用相差显微镜和免疫组织化学方法观察、鉴定培养细胞。探讨成年狗骨髓基质干细胞体外诱导分化为肌细胞的可行性 ,为心肌梗死和心力衰竭的细胞移植治疗提供新的细胞系。结果表明 ,实验组诱导后 4周 ,多数培养细胞由梭形变为杆状 ,免疫组织化学检查结蛋白、平滑肌肌动蛋白和肌钙蛋白I染色阳性 ;对照组多数培养细胞为梭形 ,免疫组织化学检查结蛋白染色弱阳性 ,平滑肌肌动蛋白染色弱阳性 ,肌钙蛋白I染色阴性。结果提示 ,成年狗骨髓基质干细胞体外可诱导分化为肌源性细胞。

血小板源性生长因子和碱性成纤维细胞生长因子对兔角膜基质成纤维细胞体外增殖的影响

目的:探讨重组人血小板源性生长因子(rh-PDGF-BB)和重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhb-FGF)单独及联合应用对兔角膜基质成纤维细胞(RCF)增殖的影响。方法:采用细胞培养技术及噻唑蓝比色法(MTT)。结果:rhPDGF-BB和rhbFGF对RCF的促增殖作用较对照组有明显提高(P<0.01),rhPDGF-BB在10～100μg/L之间时对RCF有较强的促增殖作用(P<0.01),并呈剂量效应关系。rhb-FGF在0.1～10μg/L浓度范围内与RCF增殖呈剂量效应关系(P<0.01),当浓度增大到100μg/L,促增殖作用减弱。rhPDGF-BB和rhb-FGF联合应用时其促增殖作用较两种因子在相同浓度单独应用时有显著性差异(P<0.05)。结论:rhPDGF-BB,rhb-FGF单独或联合应用时有促进RCF体外增殖的作用。

IL-10基因修饰骨髓源性肝干细胞移植对肝纤维化大鼠细胞外基质积聚的影响

目的:评价IL-10基因修饰骨髓源性肝干细胞(BDLSCs)移植对肝纤维化大鼠细胞外基质(ECM)积聚的影响.方法:利用免疫磁珠细胞分选(magnetic bead cell sorting,MACS)方法分选大鼠β2m-/Thy-1+BDLSCs.将腺病毒介导的IL-10基因转导至BDLSCs,采用ELISA法检测IL-10蛋白分泌水平.将大鼠随机分为4组:正常组、模型组、BDLSCs组及BDLSCs/IL-10组.采用PCR法检测Y染色体性别决定基因Sry;采用VG染色法观测肝组织胶原沉积面积;Western blot法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达;采用碱水解法检测肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)浓度;ELISA法检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)等细胞外基质含量.结果:MASC法能成功分选纯化BDLSCs.IL-10修饰BDLSCs持续高浓度分泌IL-10蛋白至胞外,移植后能顺利种植于肝内,减轻胶原沉积,减少α-SMA表达从而抑制肝星状细胞活化,与BDLSCs组比较,BDLSCs/IL-10组大鼠肝组织Hyp水平显著降低(255.0±50.5μg/gvs373.0±26.7μg/g,P<0.01),血清HA,LN及PCⅢ水平也有所降低,差异具有统计学意义(40.5±7.7μg/Lvs79.4±10.3μg/L,61.5±16.4μg/Lvs77.7±12.6μg/L,14.3±0.8μg/Lvs14.9±1.5μg/L,P<0.01或0.05).结论:IL-10基因修饰BDLSCs移植能有效减少肝纤维化大鼠ECM的积聚,为治疗肝纤维化提供了新思路.

缬沙坦与安体舒通联合治疗对原发性高血压心肌细胞外基质重塑的影响

目的 研究缬沙坦与安体舒通联合治疗对原发性高血压 (EH)心肌细胞外基质重塑的影响。方法 选择 76例EH患者 ,随机分为两组 :X组 ,缬沙坦 80mg/d ,X +A组 ,缬沙坦 80mg/d加安体舒通 2 0mg/d ,疗程 6月 ,应用放射免疫分析技术检测用药前后血清Ⅲ型前胶原 (PⅢP)、Ⅳ型前胶原 (PⅣP)、透明质酸 (HA)的含量变化 ,同时应用超声心动图记录左室结构及舒缩功能参数。结果 两组患者治疗 6月后血压均明显下降 (P <0 0 1) ,两组血压下降幅度比较无明显差异 (P >0 0 5 ) ,两组患者PⅢP、PⅣP、HA治疗 6月后均有下降 ,X +A组下降明显 (与X组比较P <0 0 1) ,两组伴左室肥厚患者 (2 6例和 2 7例 )治疗 6月后室间隔厚度 (IVSD)、左室后壁厚度 (LPWD)、左室舒张末期内径 (LVIDD)、左室重量指数 (LVMI)较治疗前均有下降 ,但以X +A组下降更明显 (与X组比较 ,P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,同时 ,X +A组左室舒张和收缩功能也得到明显改善 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,两组均无明显不良反应发生。结论 缬沙坦与安体舒通联合治疗能更好地抑制肾素 -血管紧张素 -醛固酮系统 ,减轻心肌细胞外基质重塑 ,改善心室收缩和舒张功能 ,有利于提高EH患者的生活质量。

病理性瘢痕组织中基质金属蛋白酶-1、金属蛋白酶组织抑制剂-1、血小板源性生长因子、增殖细胞核抗原的表达

目的探讨病理性瘢痕组织中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、血小板源性生长因子(PDGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测58例病理性瘢痕、16例正常皮肤及16例非病理性瘢痕组织中MMP-1、TIMP-1、PDGF及PCNA的表达情况。结果病理性瘢痕组织中MMP-1、TIMP-1、PDGF阳性表达率及PCNA指数均高于非病理性瘢痕及正常皮肤组织(P均<0.05)。病理性瘢痕组织中TIMP-1与PDGF、MMP-1、PCNA及PDGF与PCNA表达均呈正相关(P均<0.05)。结论病理性瘢痕的形成与MMP-1、TIMP-1、PDGF及PCNA相互作用失衡有关。

组织工程中生物合成性细胞外基质的研究进展

通过组织工程构建出一种全新组织 ,移植或植入后替代丢失的或者功能不正常器官和组织。由生物可降解性、相容性细胞外基质为新组织的生长和构建提供支架 ,并通过多种途径调节、促进和保持细胞的粘附、生长增殖、分化和特异性基因的表达 ,在新组织的功能中发挥重要的作用。组织攻程细胞外基质的研究在组织发生生物学机制研究、组织器官移植和基因治疗等领域具有重要意义。

细胞外基质与牙源性肿瘤

细胞的生长、移动和分化与细胞之间通过细胞外基质的相互作用有关,而肿瘤细胞的生长、浸润和转移与细胞外基质的成分密切相关。本文就细胞外基质与牙源性肿瘤关系的研究进展作一综述报道。

软骨细胞外基质源性微粒修复山羊负重区大面积软骨缺损

背景:随着组织工程技术的发展,使用天然的生物材料作为支架可以加快新生软骨组织的生成,有利于软骨缺损的修复。目的:探究软骨细胞外基质源性微粒修复负重区软骨大面积缺损的能力。方法:刮取山羊膝关节软骨,通过脱细胞技术制备细胞外基质源性微粒。取12只中国山羊(解放军总医院动物实验中心提供),制作右股骨内外髁负重区直径8 mm、深2 mm的全层骨软骨缺损模型,随机分为2组,实验组(n=6)于缺损处植入同种异体软骨细胞外基质源性微粒,并用纤维蛋白胶固定;对照组(n=6)仅填入纤维蛋白胶。植入3,6个月取右膝关节股骨远端样本,进行组织学及生物力学评价。结果与结论:(1)苏木精-伊红染色:对照组植入3个月时缺损基本无修复,有少量纤维组织填充,缺损区凹陷,基质无异染,两侧交界面整合差;植入后6个月缺损区仍主要为纤维组织,少量纤维软骨填充,新生组织与周围正常组织仍有明显界限。实验组植入3个月时缺损处面积较对照组小,新生组织为纤维软骨与透明软骨复合体,内部可见典型软骨陷窝,细胞排列较为有序;植入6个月时缺损区组织透明软骨比例增大,表面较为平滑,与周围正常软骨组织类似,并整合良好,放大可见典型软骨陷窝,细胞排列有序;(2)番红O-固绿染色:植入3个月时,对照组缺损区基本无蛋白多糖红染,实验组缺损区显示明显蛋白多糖着色;植入6个月时,实验组新生组织中蛋白多糖着色明显多于对照组,且实验组新生组织透明软骨比例大,与周围正常软骨类似;(3)生物力学:植入后6个月,实验组平均杨氏模量明显高于对照组(P <0.05);(4)结果表明:使用软骨细胞外基质源性微粒可促进软骨缺损的修复。

脱细胞基质与血管内皮细胞体外相容性的研究

目的 将猪血管内皮细胞和异体猪血管脱细胞基质相结合 ,探讨开发一种制备血管移植物的新方法。方法 分别利用 0 .1%胰蛋白酶、0 .0 2 %乙二胺四乙酸钠 (EDTA)和 1.0 % Triton X- 10 0对猪主动脉作用 2 4小时和 176小时进行脱细胞。异体猪血管内皮细胞分离出来并进行体外细胞扩增 ,再将脱细胞的血管内表面种植上血管内皮细胞。通过光镜和扫描电镜检测脱细胞血管基质是否存在细胞成分和内皮细胞是否生长其上。 结果 酶 -化学除垢剂的脱细胞方法几乎使细胞完全脱落 ,且基质纤维的三维结构变得疏松。体外扩增的异体猪血管内皮细胞可以种植在脱细胞基质上并且具有伸展和增殖功能。 结论 Triton X- 10 0和胰蛋白酶制备的脱细胞基质与异体猪血管内皮细胞具有良好的生物相容性 ,能结合到一起并在体外生成血管移植物。

雪旺细胞复合细胞外基质凝胶移植对神经元逆行性死亡保护作用的研究

目的 雪旺细胞 (SC)和细胞外基质 (ECM)凝胶复合 ,修复周围神经缺损 ,研究 SC的成活和对背根神经节内神经元逆行性死亡的保护作用。 方法 1将 SC制成 1× 10 8/ ml的 ECM凝胶后 ,置入 PL A中空纤维管中 ,修复大鼠 10 mm坐骨神经缺损 ,以单纯 ECM凝胶组和生理盐水组作为对照。术后 8、 12周 ,组织学检测 ,评价其效果。 2将Brd U标记的 SC复合 ECM凝胶后 ,置入 PL A中空纤维管中 ,修复大鼠坐骨神经缺损 ,术后 3、6周取材 ,Brd U免疫组织化学染色 ,观察 SC存活情况。 结果 1SC和 ECM凝胶复合移植 ,多数细胞可存活至 3周 ,部分细胞可存活至 6周。2 SC和 ECM凝胶复合组、ECM凝胶组 ,L5背根神经节内成活的神经元数量分别是健侧的 83.5 %和 81.3% ,显著高于单纯生理盐水组的 72 .9% (P<0 .0 5 )。 结论 SC和 ECM凝胶复合移植 ,多数细胞能成活并能使背根神经节内 83.5

利用月经血建立的经血源性基质干细胞系

背景:经血源性基质干细胞被证实是一种新型的成体干细胞,目前国内关于其系统的建系方法报道极少。目的:建立经血源性基质干细胞系,并鉴定其表型和多能性。方法:收集健康成年女性的月经血,通过密度梯度离心法分离出经血源性基质干细胞进行培养,观察细胞的形态及增殖特性;采用CCK-8法检测各株细胞的增殖能力,定期收集细胞进行核型分析,采用流式细胞术检测细胞表面抗原CD34,CD38,CD44,CD45,CD73,CD90,CD105,Oct-4的表达,对细胞进行体外成脂和成骨诱导分化并鉴定。结果与结论:成功从6名健康志愿者的经血中分离获得4株经血源性基质干细胞系。细胞呈现典型的梭状结构,具有46,XX核型,能在体外稳定迅速增殖,传代后大约48 h进入对数生长期,表达CD44,CD73,CD90,CD105及Oct-4,不表达CD38,CD34,CD45;成脂诱导22 d后油红O染色阳性,成骨诱导2周后茜素红染色阳性。实验表明经血源性基质干细胞具备扩增迅速、核型稳定、多潜能性等优点,通过建立经血源性基质干细胞系,为进一步的临床治疗应用以及科学研究奠定了基础。

细胞外基质的免疫原性及组织相容性研究进展

组织工程与修复再生医学旨在实现对器官和组织的功能性再生,目前的研究热点是如何采用不同的人工与生物材料通过与自身组织细胞或者干细胞整合来实现组织修复与器官再生的个体化[1]。虽然各类生物材料的自体及异体移植在整形外科和修复重建领域运用已比较广泛,但目前正在大力研发的用于组织工程支架的细胞外基质异体移植的可行性尚较少得到关注。细胞外基质是组织内常驻细胞的“自制产物”,是细胞分泌到细胞外的富含胶原和多糖的大分子网状物;不仅是支撑组织、细胞生长的支架,还能诱导和调控细胞的黏附、生长、增殖和分化[2]。

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的骨髓基质干细胞移植抑制大鼠脑出血后神经细胞的凋亡

目的探讨移植胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因修饰的骨髓基质干细胞(BMSCs)对大鼠脑出血后神经细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法通过脑立体定位仪向SD大鼠脑尾壳核注射胶原酶和肝素建立脑出血动物模型,将48只模型大鼠随机分为BMSCs组、GDNF/BMSCs组和生理盐水组,各组又根据细胞移植后再喂养时间的不同(1周、2周)分为2个亚组,每亚组8只大鼠。于建模后第3天在脑出血部位分别移植BMSCs、GDNF/BMSCs或注射生理盐水,采用神经功能缺失评分和HE染色评估大鼠神经功能缺失情况和脑损伤面积,RT-PCR法观察GDNF mRNA的表达,原位缺口末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学染色观察细胞凋亡数及Bax和Bcl-xl蛋白的表达。结果与生理盐水组和BMSCs组相比,GDNF/BMSCs组神经功能恢复更好,脑损伤面积所占比率显著降低,GDNF mRNA表达上调,凋亡细胞数明显下降。在1周和2周时间点,GDNF/BMSCs组与BMSCs组和生理盐水组相比,Bcl-xl阳性细胞数明显增加,而Bax阳性细胞数则减少。结论 GDNF基因修饰的BMSCs移植至脑出血大鼠后,可能通过上调GDNF基因的表达、抑制细胞凋亡、增加Bcl-xl蛋白的表达和降低Bax蛋白的表达发挥神经保护作用。

基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在急性心肌梗死后左室重构中的作用

急性心肌梗死后左室重构是临床上常见的进行性发展的病理生理过程 ,是反映心肌梗死后心功能的敏感指标 ,也是远期发生心脏性死亡最重要的危险因素之一。近年研究表明 ,细胞外基质合成或降解代谢失衡在心肌梗死后的左室重构过程中起重要作用。基质金属蛋白酶是降解细胞外基质成分的最主要酶系 ,金属蛋白酶组织抑制因子是其内源性特异性抑制剂。抑制基质金属蛋白酶的活性及表达为急性心肌梗死后左室重构的防治提供新的途径。

血小板源性生长因子提高血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2活性的机制

目的研究在血小板源性生长因子作用下,大鼠血管平滑肌细胞表达膜型基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制物的变化,同时探讨两者对基质金属蛋白酶-2活性的影响。方法体外培养的血管平滑肌细胞经血小板源性生长因子处理0 min、20 min和6 h后进行如下检测:利用明胶SDS-PAGE酶谱检测血管平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶-2活性;基因芯片和RT-PCR技术检测血管平滑肌细胞表达膜型基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制物的变化。结果明胶酶谱测定表明:血小板源性生长因子显著提高血管平滑肌细胞分泌的基质金属蛋白酶-2的活性;基因芯片和RT-PCR结果显示:血小板源性生长因子对血管平滑肌细胞表达膜型基质金属蛋白酶有明显的诱导作用,作用20 min和6 h后的表达是对照组(0 min)的1.86倍和2.93倍(P<0.05);同样血小板源性生长因子显著增强基质金属蛋白酶组织抑制物的表达,作用20 min和6 h后的基因表达是对照组(0 min)的1.35倍和1.82倍(P<0.05)。结论血小板源性生长因子显著增强了血管平滑肌细胞对膜型基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制物的表达,同时两者的协调作用使MMP-2的活性呈明显的增加趋势。

新型脱细胞半月板细胞外基质的制备及其生物相容性的研究

目的探索新型脱细胞半月板细胞外基质(d MECM)的制备方法,并对其细胞相容性进行研究。方法无菌条件下收集新鲜的猪半月板组织,切碎,采用湿法粉碎、差速离心的方法制备dM ECM生物材料。通过天狼猩红、甲苯胺蓝染色方法分别比较天然半月板与dM ECM中胶原以及糖胺聚糖含量的区别;采用Hoechst 33258荧光染色法观察脱细胞后dM ECM中DNA残留情况。将P3代的兔内侧半月板细胞种植在铺有dM ECM的盖玻片上,体外培养7 d后行扫描电镜检测其细胞相容性。结果本实验制备的dM ECM天狼猩红、甲苯胺蓝染色均呈阳性,并且与天然半月板染色类似;dM ECM行Hoechst33258染色呈阴性;扫描电镜结果显示种植于d MECM表面上的半月板细胞黏附紧密,可见大量细胞ECM的分泌。结论本实验制备的dM ECM可以很好地保留天然半月板ECM成分,有效地去除DNA物质,并且具有良好的生物相容性,是未来半月板组织工程领域非常有前景的支架材料。