莲子心中具有心肌细胞保护活性的化学成分研究

为了寻找莲子心(Nelumbinis Plumula)具有心肌细胞保护活性的化学成分,本研究采用多种柱色谱技术分离和纯化莲子心的80%乙醇提取物,运用^(1)H NMR、^(13)C NMR等波谱技术和文献数据比对鉴定化合物结构,并对化合物进行心肌细胞保护活性筛选。从莲子心80%乙醇提取物分离纯化得到14个化合物,分别鉴定为柚皮苷(1)、山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷(2)、芹菜素-6-C-β-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-葡萄糖苷(3)、木犀草素-7-O-β-D-新橙皮苷(4)、木犀草素-3′-O-β-D-葡萄糖苷(5)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)、橙皮苷(7)、异夏佛塔苷(8)、松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷(9)、对香豆酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(10)、对香豆酸(11)、苯乙基6-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-β-D-葡萄糖苷(12)、淫羊藿次苷D1(13)、淫羊藿次苷F2(14)。化合物1~6、9、11~14均为首次从莲子心中分离得到。黄酮类化合物1~8对缺氧/复氧损伤下的小鼠HL-1心肌细胞具有明显的保护作用,对小鼠HL-1-STAT3-Luc细胞中STAT3的表达也具有促进作用,且均具有剂量依赖性。

荔枝草二萜类成分及其心肌细胞保护活性

目的研究荔枝草Salvia plebeia R.Br.二萜类成分及其心肌细胞保护活性。方法荔枝草95%乙醇提取物采用正反相硅胶柱色谱、Sephedex LH-20、MCI、半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。检测分离鉴定的化合物对心肌细胞H9c2的保护活性。结果从中分离得到12个化合物,分别鉴定为荔枝草素A(1)、(3-rac)-4,12-epoxy-14-chloro-3,11-cyclo-4,5-seco-20(10→5)-abeo-abieta-5(10),6,8,11,13-pentaene(2)、microstegiol(3)、1-oxomicrostegiol(4)、salvilenone(5)、salvilimbinol(6)、12-deoxyroyleanone(7)、16,17-dinorpisferal A(8)、sugiol(9)、丹参酮ⅡA(10)、隐丹参酮(11)、ferruginol(12)。化合物1~2、4、6~10对H9c2细胞的保护率分别为64.35%、45.31%、51.28%、34.27%、21.37%、31.22%、89.54%、71.94%。结论化合物1为新化合物,化合物2为新天然产物,化合物3~9、12为首次从该植物中分离得到。化合物1~2、4、6~10对心肌细胞H9c2具有一定的保护作用。

千里光化学成分及其心肌细胞保护活性

目的研究千里光Senecionis Scandentis Hebra化学成分及其心肌细胞保护活性。方法千里光95%乙醇提取物采用硅胶、Sephedex LH⁃20、MCI、半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。检测各化合物对心肌细胞H9c2的保护活性。结果从中分离得到7个化合物,分别鉴定为(R)⁃千里光萜醇(1)、(1S,10S),(4S,5S)⁃germacrone⁃1(10),4⁃diepoxide(2)、12⁃羟基⁃莎草酮(3)、urcumenone(4)、isopterchiayione(5)、curcumadione(6)、gibberodione(7)。化合物2~3、5的H9c2细胞存活率分别为(75􀆰2±0􀆰54)%、(66􀆰4±0􀆰79)%、(59􀆰7±0􀆰91)%。结论化合物1为新化合物,化合物2~7首次从该植物中分离得到。化合物2~3、5对心肌细胞具有保护作用。

bcl-2基因转染对热应激心肌细胞保护作用的机制探讨

目的 :探讨bcl 2基因转染对热应激心肌细胞保护作用的机制。方法 :分离、培养乳鼠心肌细胞 ,用脂质体转染法将bcl 2基因转染入心肌细胞 ,进行热应激。用化学发光法测定bcl 2基因转染对热应激心肌细胞线粒体H+ ATPase合成活力的影响 ,用荧光分光光度法测定bcl 2基因转染对热应激心肌细胞Caspase3活性的影响。 结果 :bcl 2基因转染可以使 4 1℃和 4 3℃热应激心肌细胞线粒体H+ ATPase合成活力与转染前相比显著升高 (P <0 .0 1) ,可以使 4 1℃和 4 3℃热应激心肌细胞Caspase3活性与转染前相比显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :bcl 2基因转染对热应激心肌细胞凋亡的保护作用可能与其保护心肌细胞线粒体H+ ATPase合成活力 。

牛磺酸的心肌细胞保护作用

牛磺酸的心肌细胞保护作用石湘芸，姚松朝综述唐朝枢审校（解放军海军总医院，北京１０００３７）牛磺酸（Ｔａｕｒｉｎｅ），化学名称为２－氨基乙磺酸（Ｈ２Ｎ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＳＯ３Ｈ），是一种含硫的β氨基酸亚磺酸类似物，早在１９２７年就已在牛胆计中发现，但长...

纳洛酮对缺氧心肌细胞保护作用的实验研究

大量临床和实验研究均已证明纳洛酮在心肌缺血再灌注损伤中对心肌有保护作用．可以改善心肌能量代谢，稳定溶酶体膜，抑制中性粒细胞释放超氧阴离子、抗心律失常等，但对细胞凋亡及炎性介质的影响未见报导。本研究从凋亡和坏死后炎症两个方面观察了纳洛酮对缺氧心肌细胞的保护作用。

大株红景天化学成分及其心肌细胞保护活性研究

目的对大株红景天Rhodiola wallichiana var.cholaensis根茎的化学成分进行研究,并探讨其对心肌细胞H9c2损伤的保护作用。方法采用动态轴向压缩柱色谱、硅胶柱色谱以及HPLC等方法进行分离纯化,利用现代波谱学技术鉴定化合物结构。对分离得到的化合物进行细胞损伤保护活性实验。结果从大株红景天根茎中共分离并鉴定了16个单体化合物,分别为红景天苷（1）、没食子酸（2）、没食子酸甲酯（3）、槲皮素（4）、邻苯三酚（5）、6″-O-galloylsalidroside（6）、没食子酸乙酯（7）、山柰酚-7-O-α-L-鼠李糖苷（8）、草质素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（9）、草质素-7-O-（3″-O-β-D-葡萄糖基）-α-L-鼠李糖苷（10）、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（11）、草质素（12）、草质素-7-O-α-L-鼠李糖苷（13）、小麦黄素（14）、芦丁（15）、山柰酚-3-O-（2″-O-β-D-木糖基）-β-D-葡萄糖苷（16）。样品质量浓度为25μg/m L时,化合物2、6、8、12和15对心肌细胞H9c2的保护率分别为20.40%、31.54%、67.61%、44.27%和47.84%。结论化合物5为首次从红景天属植物中分离得到,化合物7~16为首次从该植物中分离得到。化合物2、6、8、12和15在一定程度上对心肌细胞H9c2损伤具有保护作用。

苦参素对H2O2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤保护作用的研究

目的研究苦参素(oxymatrine,OMT)对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法无菌环境下分离并培养乳鼠心肌细胞72h后随机分为空白对照组、H_2O_2(200μmol/L)干预组、OMT(20、40、60μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组,每组设10个复孔。药物干预12h后,MTT法检测细胞存活率,采用氧敏感荧光探针DCFH-DA检测氧自由基(ROS);测定细胞中抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,检测细胞培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)含量,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡并计算凋亡率,Western blot法检测细胞中caspase-3、NF-κB蛋白表达并进行半定量分析。结果与H_2O_2(200μmol/L)干预组比较,OMT(40、60μmol/L)干预12h能够显著提高H_2O_2诱导损伤乳鼠心肌细胞存活率,降低ROS含量,改善SOD、GSH-Px、CAT活性并降低MDA含量,降低培养基中AST、CPK、LDH含量,降低细胞凋亡率,降低caspase-3、NF-κB蛋白表达,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论苦参素可能通过改善抗氧化酶活性而提高氧自由基清除能力、抑制促凋亡蛋白表达而降低细胞凋亡,对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤起到保护作用。

碱性成纤维细胞生长因子诱导老年大鼠心肌细胞保护及其机制研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对老年大鼠心肌细胞缺氧 /复氧 (H/R)损伤的影响及其保护机制。 方法 在分离的老年大鼠心肌细胞H/R模型上 ,观察bFGF预孵育对H/R后心肌细胞乳酸脱氢酶 (LDH)漏出、ATP含量和细胞存活率的影响 ,并采用滤纸法测定心肌细胞外信号调节激酶 (ERKs)活性的变化。 结果 bFGF激活ERKs,并呈剂量依赖性减轻H/R所致心肌细胞损伤 ,表现为细胞存活率〔bFGF 10ng组 (70 0± 4 6 ) % ,H/R组 (5 3 0± 4 5 ) % ,P <0 0 1〕和细胞内ATP含量〔bFGF 10ng组 (2 3 1± 2 3)nmol/ 10 6细胞 ,H/R组 (12 3± 2 1)nmol/ 10 6细胞 ,P <0 0 1〕升高 ,细胞浆酶LDH漏出〔bFGF 10ng组 (2 5 7 3± 5 1 0 )U/L ,H/R组 (372 5± 6 9 2 )U/L ,P <0 0 5〕减少 ;ERKs上游激酶抑制剂PD0 980 59完全消除上述保护作用〔PD0 980 59组细胞存活率 (5 7 0± 5 8) % ,ATP含量 (15 1± 2 6 )nmol/ 10 6细胞 ,培养液中LDH活性 (32 5 5± 5 9 0 )U/L ,与bFGF 10ng组比较均为P <0 0 1〕。 结论 bFGF可以提高老年大鼠心肌细胞对于缺氧的耐受性 ,其保护机制涉及ERKs的活化。

c-jun反义基因转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞保护作用的分子机制研究

目的 探讨c -jun反义基因转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞保护作用的分子机制。方法 烧伤血清采自3 0 %TBSAⅢ度烫伤Wistar大鼠 ;采用含 1%O2 的混和气体作为缺氧模型 ;采用基因重组技术构建c -jun反义基因重组体 ;由Lipo fectaminekit介导心肌细胞转染 ;缺氧复合烧伤血清处理后 12、2 4和 48h不同时相点采用Westernblot检测c -jun蛋白 ,PKCα和JNK的表达变化。结果 加入烧伤血清并造成缺氧的非转染心肌细胞 (非转染组 ) ,c -jun蛋白 ,PKCα和JNK均显著表达 ,2 4h达最高峰 ;转染c -jun反义基因重组体 (转染组 )后 ,c -jun蛋白 ,PKCα和JNK表达均明显下降。结论 c

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤保护作用研究

目的研究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法将对数生长期的H9C2心肌细胞随机分为4组:空白对照、H_2O_2(200μmol/L)干预、GB(100μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预、GB(200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预,每组设10个复孔。经药物干预16h后观察各组细胞形态,采用MTT法检测细胞存活率;检测培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性;测定细胞中抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;酶联免疫法(ELISA)测定培养液中炎性因子(CRP、TNF-α、IL-1、IL-6)含量水平;采用流氏细胞术检测细胞凋亡状况并计算细胞凋亡率,采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测细胞中bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达并计算bcl-2/Bax表达比值,Western blot法检测细胞中NF-κB蛋白表达并进行半定量分析。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞培养液中AST、CPK活性和TNF-α、IL-6、CRP、MDA含量均显著降低,SOD、CAT活性显著升高,细胞凋亡率显著降低;bcl-2 mRNA表达显著上调、Bax mRNA表达显著下调,bcl-2/Bax表达比值显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);其中GB(200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞生存状态明显改善、存活率显著升高,LDH活性、IL-1含量以及NF-κB蛋白表达量显著降低,细胞中GSH-Px活性显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 GB对H_2O_2诱导损伤H9C2心肌细胞具有保护作用,作用机制可能与GB能够有效改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤,上调抑凋亡基因bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高bcl-2/Bax表达比值,下调NF-κB蛋白表达,降低炎性因子含量相关。

从凋亡信号通路探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的机制

为探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的分子机制 ,采用热休克对原代培养的新生大鼠心肌细胞进行预处理 ,以诱导热休克蛋白的表达 ,观察热休克蛋白对过氧化氢所致心肌细胞凋亡的保护作用。结果发现 ,热休克预处理导致心肌细胞热休克蛋白 70及αB 晶状体蛋白表达明显增加 ,同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放 ,抑制Caspase 8、Caspase 9和Caspase 3活化及随后的心肌细胞凋亡。以上结果提示 ,热休克蛋白通过抑制线粒体信号通路与死亡受体通路的活化保护过氧化氢导致的心肌细胞凋亡 。

四逆汤在过氧化氢引起的心肌细胞氧化应激性损伤中的保护效应

目的:观察四逆汤对乳鼠心肌细胞在过氧化氢损伤中的保护效应,探讨Bcl- xL/xSmRNA在四逆汤抗过氧化氢损伤保护心肌细胞中的作用。方法:采用过氧化氢诱导损伤制备乳鼠心肌细胞氧化应激性损伤模型,分别用含不同浓度的四逆汤含药血清DMME培养基培养细胞,应用流式细胞仪检测培养细胞的存活率,筛选合适的四逆汤含药血清培养细胞的浓度;用1mmol/L过氧化氢处理心肌细胞,分别在处理0. 5h, 1h, 2h, 3h, 4h, 8h后检测细胞内丙二醛(MDA)和过氧化物歧化酶(SOD)的活性,并用流式细胞仪检测不同作用时间的细胞凋亡率和坏死率;在过氧化氢处理心肌细胞1h和8h后,收获细胞,检测细胞胞浆Bcl- xL和Bcl- xSmRNA的表达情况。结果:采用含15%四逆汤含药血清的DMEM培养基是心肌细胞生长的合适浓度;过氧化氢对心肌细胞的损伤程度与处理时间成正相关;与单纯过氧化氢处理组相比,四逆汤含药血清组细胞内MDA的含量降低,SOD的活性增加,细胞的凋亡率和坏死率降低,Bcl- xLmRNA表达增加,Bcl- xSmRNA表达减少。结论:四逆汤含药血清有较好的抗氧化应激性损伤保护心肌细胞的作用,这种保护作用可能通过增加Bcl- xLmRNA的表达,降低Bcl- xSmRNA的表达来实现。

人参皂苷Rg1保护心肌细胞免于缺氧-复养损伤涉及PKCε-activatedERK1／2径路

目的：人参皂苷Rg1是人参、三七等人参属药材的主要活性成分。众多研究表明人参总皂苷和三七总皂苷具有心血管方面的活性及治疗作用。本研究旨在观察人参皂苷Rg1单体心肌保护作用及作用机制。方法：培养大鼠乳鼠心肌细胞，缺氧3小时复养1小时后检测心肌细胞乳酸脱氢酶（LDH）的渗漏，心肌细胞内总超氧化物歧化酶（T-SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性，还原型谷胱甘肽的含量。利用DFH为探针检测细胞内活性氧（ROS）水平，Fluo-4探针检测细胞内钙水平。采用WesternBlot技术检测细胞PKCe在细胞膜和细胞浆的分布，以及ERK1/2、P38和JNK的蛋白磷酸化水平，选择PMA为PKCε的激动剂，PD98059、SP600125、SB203580为ERK1/2、P38和JNK的抑制剂。结果：人参皂苷Rg1具有缺氧一复氧损伤保护作用，可明显降低乳酸脱氢酶的渗漏。人参皂苷Rg1可抑制ROS的产生，并可升高细胞内的抗氧化酶活性。与模型组比较Rg1 120μM处理组T-SOD、CAT、GSH分别升高85．8％、73．1％和36．9％，细胞内ROS水平下降了63．8％。

缺血和药物预处理对模拟缺血再灌注培养心肌细胞蛋白激酶C活性的影响

目的：通过观察短暂缺血及药物预处理对模拟缺血再灌注培养心肌细胞蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性的影响，探讨ＰＫＣ在预处理中的作用机制。方法：培养心肌细胞分别经短暂缺血及佛波酯、去甲肾上腺素、腺苷预处理，行模拟缺血再灌注，以特异性多肽ＧＳ为底物，通过测定掺入ＧＳ的γ－３２Ｐ－ＡＴＰ放射性活度计算ＰＫＣ活性。结果：缺血可诱导心肌细胞ＰＫＣ激活，再灌注抑制ＰＫＣ活性的继续激活；短暂缺血及药物预处理可引起细胞ＰＫＣ明显上调，在缺血再灌注过程，ＰＫＣ活性持续激活，而Ｈ７则抑制预处理对ＰＫＣ的这种持续激活作用。结论：ＰＫＣ介导的细胞信息传递参与了缺血预处理过程，ＰＫＣ可能在缺血预处理中起着关键的作用。

连续性血液过滤对急性药物中毒患者心肌细胞保护的效果评价

目的：分析连续性血液过滤对急性药物中毒患者心肌细胞保护的临床效果。方法：收集我院2012年7月～2013年7月期间诊治的急性药物中毒患者34例作为研究对象，对所有患者应用连续性血液过滤治疗，观察治疗效果。结果：研究结果显示，本组患者经连续性血液过滤治疗后取得了良好的临床效果，患者的血浆脑钠素（ BNP）、Ⅲ型前胶原N末端肽（ NPⅢ）、心肌肌酸磷酸激酶同工酶（ CK～MB）、乳酸脱氢酶（ LDH）出现了明显的变化，治疗前后各项数据比较具有明显差异（ P＜0．05）。结论：连续性血液过滤对急性药物中毒患者心肌细胞保护具有良好的临床效果，值得在临床应用上推广。

Bcl-2介导的芹菜素抗心肌细胞缺氧/复氧损伤作用

目的探讨芹菜素(apigenin,Api)在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用,并阐明Api对心肌损伤的保护作用是否主要由Bcl-2介导。方法培养H9c2心肌样细胞;随机分为正常对照(Cont)组、缺氧/复氧(Anoxia/Reoxygenation,A/R)组、Api预处理组、Api+ABT-737组。MTT法检测细胞存活率;Western blot法检测Bcl-2表达;比色法检测培养液LDH活性、细胞SOD及GSH-Px活性、MDA含量;流式细胞仪检测心肌细胞ROS含量、线粒体膜电位及细胞凋亡。结果 Api预处理25 h后,心肌细胞Bcl-2表达呈剂量依赖性上调(P<0.01);细胞存活率升高,培养液LDH活性降低,细胞SOD、GSH-Px活性升高,MDA含量与ROS生成减少,线粒体膜电位更为稳定,细胞凋亡减少(P<0.01);Bcl-2抑制剂ABT-737则可取消Api的上述心肌保护作用。结论Api抗心肌A/R损伤作用涉及Bcl-2信号通路,至少部分依赖于其对Bcl-2表达水平的上调。

左旋氨氯地平对缺氧心肌细胞乳酸脱氢酶和肌钙蛋白的影响

目的 探讨钙离子拮抗剂左旋氨氯地平对缺氧心肌细胞损伤标记物及细胞内游离钙离子浓度的影响。方法 在离体乳鼠心肌细胞培养基础上制备心肌细胞缺氧模型 ,随机分为正常对照组、缺氧损伤组和钙拮抗剂干预缺氧损伤组。分别测定各组心肌培养基中乳酸脱氢酶、肌钙蛋白的含量 ,心肌细胞内游离钙离子的浓度 (荧光探针法 )。结果 缺氧损伤组心肌培养基中乳酸脱氢酶和肌钙蛋白的含量及心肌细胞内游离钙离子浓度较正常对照组明显增加 (P均 <0 .0 1) ;经左旋氨氯地平干预后细胞培养基中乳酸脱氢酶和肌钙蛋白的含量及心肌细胞内游离钙离子浓度较缺氧损伤组明显降低 (P均 <0 .0 1)。结论 左旋氨氯地平对缺氧心肌细胞具有保护作用 。