环状RNA circHIPK3在氯氮平诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用及相关机制

目的探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)在氯氮平诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用及相关机制。方法通过细胞转染使H9C2细胞中circHIPK3过表达或沉默circHIPK3并用氯氮平处理H9C2细胞。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测circHIPK3的表达。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞存活率。采用试剂盒检测乳酸盐脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cTnI)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果氯氮平显著提高H9C2细胞circHIPK3、LDH、CK-MB、cTnI、MDA、凋亡率、Bax、cleaved Caspase-3水平(P<0.05),显著降低H9C2细胞存活率、SOD、GSH-Px、Bcl-2、线粒体膜电位(P<0.05)。circHIPK3过表达促进氯氮平对上述指标的影响(P<0.05),沉默circHIPK3逆转氯氮平对上述指标的影响(P<0.05)。结论氯氮平可通过促进circHIPK3表达诱导H9C2心肌细胞损伤,其机制可能与circHIPK3激活氧化应激与线粒体凋亡通路有关。

他汀类药物对心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡作用机制的研究进展

近年研究表明,细胞凋亡在心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中占有重要地位,细胞凋亡与MIRI之间有着密切关系。实验证实他汀类药物具有除调脂以外的心肌保护效应。现主要从他汀类药物的抗氧化作用和激活磷脂酰肌醇-3-激酶丝氨酸-苏氨酸激酶/一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)信号通路两个方面阐述在心肌缺血再灌注过程中他汀类药物抑制心肌细胞凋亡的主要机制。

醋酸铅诱导心肌细胞凋亡的机制研究

目的 明确铅暴露对心肌细胞的毒性损伤,进一步探索其诱导心肌细胞凋亡的具体机制。方法 将正常培养的AC16人源心肌细胞随机分为正常对照组和不同浓度的醋酸铅组;通过Cell Counting Kit-8和乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒测定细胞存活率以及LDH的释放率;利用活性氧荧光探针(DCFH-DA)和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位变化;Western blot法检测凋亡蛋白及内质网应激相关蛋白的表达;采用Image J对Western blot条带进行量化。结果 相较于正常对照组,当醋酸铅浓度≥25μg/mL时,AC16细胞存活率明显降低且具有浓度依赖性,差异具有统计学意义(P<0.05);同时当醋酸铅浓度≥25μg/mL时,AC16细胞LDH释放率显著升高且具有浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05);最后发现醋酸铅暴露将引起AC16细胞ROS的产生以及线粒体膜电位的下降。此外,相较于正常对照组,醋酸铅暴露后凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP和内质网应激相关蛋白Calpain 1、Bip的表达均明显增高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 醋酸铅存在明显心肌毒性,通过内质网应激和氧化应激诱导心肌细胞凋亡的发生。

硫氧还蛋白相互作用蛋白介导的炎症反应及细胞凋亡在心肌梗死中的作用

背景:近年来有研究发现,在心肌梗死小鼠的心肌组织中,硫氧还蛋白相互作用蛋白表达升高。硫氧还蛋白相互作用蛋白是核苷酸结合寡聚化域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain-like receptor containing pyrin domain 3,NLRP3)炎性小体的内源性激活物,那么,其是否通过激活炎症小体参与心肌梗死的病理过程目前尚不清楚。目的:探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白对心肌梗死后心肌细胞凋亡和NLRP3炎症小体的影响,为临床心肌梗死的预防和治疗提供新思路。方法:选取8周龄雄性硫氧还蛋白相互作用蛋白基因敲除纯合子小鼠30只和同窝野生C57BL/6J小鼠30只,2种小鼠均随机分为心肌梗死组和伪手术组(n=15),建立心肌梗死模型。术后4 d取部分小鼠(n=10)麻醉处死,取心脏组织,TUNEL法(n=5)检测心肌细胞凋亡水平,Western blot(n=5)检测硫氧还蛋白相互作用蛋白、NLRP3、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1、凋亡相关斑点样蛋白、活化白细胞介素1β和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3蛋白的表达水平;其余小鼠(n=5)于术后1个月采用小动物超声仪检测心脏功能,随后麻醉处死留取心脏组织,用于其他指标检测。结果与结论:①与野生伪手术组相比,野生心梗组硫氧还蛋白相互作用蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);②与各自伪手术组相比,野生心肌梗死小鼠和硫氧还蛋白相互作用蛋白基因敲除心肌梗死小鼠的心肌中NLRP3活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1、凋亡相关斑点样蛋白、活化白细胞介素1β和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3等蛋白表达均明显上调(P<0.05);③与野生心肌梗死小鼠相比,硫氧还蛋白相互作用蛋白基因敲除心肌梗死小鼠的梗死心肌中上述5种蛋白表达均明显降低,心肌细胞凋亡减少,心功能明显改善(P<0.05);④证明硫氧还蛋白相互作用蛋白基因敲除可抑制心肌梗死后NLRP3、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1、凋亡相关斑点样蛋白、活化白细胞介素1β和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3的表达,减少心肌细胞凋亡,最终改善缺血心脏功能,有望为临床心肌梗死的治疗提供靶点。

缺氧诱导的心肌细胞凋亡及一氧化氮的保护作用

目的 研究缺氧在新生大鼠心肌细胞凋亡中的作用及一氧化氮 (NO)的保护作用。方法 取体外培养的新生大鼠心肌细胞置 95 0mL/LN2 ,5 0mL/LCO2 孵箱中培养16 ,32和 48h ,造成缺氧损伤的细胞模型 ,观察凋亡发生的情况 ;将NO供体SNAP加入培养基中 ,使其终浓度为 10 0μmol/L ,置于上述缺氧环境中培养 16 ,32和 48h ,检测细胞凋亡。结果在缺氧条件下培养 16 ,32 ,48h后 ,心肌细胞的凋亡率分别为 :( 2 9± 0 5 ) % ,( 6 2± 0 8) %和 ( 2 6 6±3 0 ) % ;而加入NO供体后 ,凋亡率分别为 :( 0 2± 0 3) % ,( 3 4± 0 4) %和 ( 11 8± 1 2 ) %。结论凋亡是心肌细胞缺氧损伤的主要形式 ;

蒺藜皂苷对NaCN诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及机制

目的 :探讨蒺藜皂苷 (GSTT)对 Na CN诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的影响。方法 :采用 Na CN建立心肌细胞内缺氧模型 ,GSTT干预后流式细胞术检测凋亡百分率及线粒体膜电位 ,激光共聚焦显微系统检测细胞内钙水平 ,Western blotting检测 Bcl- 2 / Bax的蛋白表达。结果 :Na CN诱导的心肌细胞凋亡百分率 GSTT组[(3.31± 0 .2 4 ) % ]与模型组 [(16 .6 5± 0 .18) % ]比较明显降低 (P<0 .0 1) ;心肌细胞膜电位 (m V ) GSTT组(15 8.2 9± 0 .4 0 )高于缺氧模型组 (12 1.71± 0 .80 ) (P<0 .0 1) ,低于正常对照组 (16 7.10± 0 .70 ) (P<0 .0 1) ;细胞内钙水平 (色密度 ) GSTT组 (32 3.73± 6 8.19)低于缺氧模型组 (496 .6 5± 80 .10 ) ,高于正常对照组 (2 80 .18±4 8.10 ) (P<0 .0 1)。 Bcl- 2蛋白表达强度上调 ,Bax蛋白表达强度下调。结论 :GSTT对 Na CN诱导心肌细胞凋亡具有抑制作用 ,该作用与其调节 Bcl- 2 / Bax蛋白表达、稳定线粒体膜电位以及改善细胞内钙超载有关。

缺氧对乳鼠心肌细胞凋亡的诱导作用

目的 观察缺氧对心肌细胞凋亡的诱导作用。方法 体外培养的Wistar乳鼠心肌细胞分别缺氧 2小时、1 2小时、2 4小时 ,采用流式细胞术、TdT介导的dUTP末端标记法 (TUNEL)以及形态学方法检测心肌细胞凋亡。结果 各缺氧组心肌细胞凋亡数量均显著高于对照组 ,随着缺氧时间延长凋亡细胞数量逐渐增加 ,对照组、缺氧 2小时、1 2小时、2 4小时组凋亡细胞数量分别为 9 3 3± 0 62 % ,1 7 2 9± 0 95% ,3 3 59± 2 0 9% ,76 0 1± 4 60 % (P <0 0 1 )。缺氧 2 4小时心肌细胞TUNEL染色阳性 ,HE染色及透射电镜观察心肌细胞表现出凋亡的形态特征。结论 缺氧可以诱导乳鼠心肌细胞凋亡。

血府逐瘀汤对大鼠缺血再灌注心肌损伤及心肌细胞凋亡的干预作用

目的:现察血府逐瘀汤对缺血再灌注致大鼠心肌损伤与细胞凋亡的干预作用。方法:采用结扎冠状动脉左前降支后再通的方法,复制家兔心肌缺血再灌注的动物模型,观察心肌的病变程度;DNA电泳及原位末端标记法检测心肌细胞凋亡。结果:血府逐瘀汤治疗组的梗死面积小于再灌注组;DNA电泳发现再灌注组是凋亡的典型表现,血府逐瘀汤治疗组梯形条带中DNA含量较心肌缺血再灌注组明显减少TUNEL染色发现再灌注组有大量的阳性标记,且积聚成团,血府逐瘀汤治疗组较再灌注组明显减少。结论:缺血再灌注可诱导心肌细胞凋亡,血府逐瘀汤可抑制缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡发生。

热休克蛋白70对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的 探讨热休克蛋白 70 (HSP 70 )对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法 体外培养大鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生HSP 70 ,用过氧化氢 (H2 O2 )造成心肌细胞损伤。采用免疫组化 ,DNALadder,流式细胞仪 ,细胞色素C氧化酶比活力的测定 ,电镜观察等作为检测指标。结果 温度诱导后HSP 70在胞浆中大量表达 ,损伤组与保护组凋亡率、细胞色素C氧化酶比活力差异有显著意义 (P <0 .0 1)电镜观察损伤组细胞的细胞膜、细胞器损伤明显 ,并出现凋亡小体。结论 HSP 70可延迟细胞凋亡 。

次乌头碱对H_2O_2致大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的:探讨次乌头碱对H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤所致细胞凋亡的保护作用及其可能的分子机制。方法:采用250ng/ml的次乌头碱预处理心肌细胞,之后加入100μmol/L的H2O2,应用MTS方法检测细胞的增殖活力,流式细胞术AnnexinV/PI检测细胞凋亡率,Western Blot检测凋亡蛋白Caspase3和9的表达。结果:100μmol/LH2O2可引起心肌细胞凋亡增加,而次乌头碱预处理后,心肌细胞增殖活力及凋亡率可明显改善,并显著减少了Caspase3和9蛋白的表达。且次乌头碱单独处理组与正常对照组相比心肌细胞增殖活力、凋亡率及Caspase3和9的蛋白表达均未见明显变化。结论:适宜浓度的次乌头碱对H2O2所致的心肌细胞凋亡有明显的改善作用;其机理可能与其降低凋亡蛋白的表达,增加细胞的增殖活力相关。

降压药物对未成年自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 观察不同种类降压药物对未成年自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响及二者的关系 ,探讨预防性药物干预改善高血压心脏重塑的机制以及心肌细胞凋亡的变化在高血压病早期心脏重塑中的作用和意义。方法 3 6只 4周龄自发性高血压大鼠 (SpontaneouslyHypertensiveRats ,SHR) ,按随机区组设计分为 6组 ,分别应用普萘洛尔 ( 50mg/kg·d) ,依那普利 ( 3 0mg/kg·d) ,硝苯地平 ( 3 5mg/kg·d) ,缬沙坦 ( 3 0mg/kg·d)和双氢氯噻嗪 ( 75mg/kg·d)干预 4周 ,另设一组为对照组。计算心肌重量指数 (CPI)、左心室肥厚指数 (LVHI)和右心室肥厚指数 (RVHI)。采用末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的带荧光的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)对左心室游离壁心肌的凋亡细胞进行检测并进行半定量分析 ,计算心肌细胞凋亡指数 (CMAI)。透射电子显微镜下观察凋亡心肌细胞的形态学变化。结果 1 依那普利和缬沙坦组CPI和LVHI较对照组明显下降 (分别为P <0 0 5,P <0 0 1) ,依那普利、硝苯地平和缬沙坦组CMAI均较对照组显著升高 (P <0 0 1)。普萘洛尔和硝苯地平组CPI和LVHI与对照组比较呈下降趋势 ,双氢氯噻嗪组CPI和LVHI呈上升趋势 ,普萘洛尔组CMAI呈上升趋势但均未达到统计学意义 (P >0 0 5)。 2 未成年SHRLVHI。

参麦注射液对老年大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡干预作用

目的:观察参麦注射液对缺血再灌注致老年大鼠心肌损伤与细胞凋亡的干预作用。方法:采用结扎冠状动脉左前降支后再通的方法,复制老年大鼠心肌缺血再灌注的动物模型,观察心肌的病变程度;DNA电泳及原位末端标记法检测心肌细胞凋亡。结果:参麦注射液治疗组的梗死面积小于再灌注组;DNA电泳发现再灌注组呈凋亡的典型表现,参麦治疗组梯形条带中DNA含量较心肌缺血再灌注明显减少;TUNEL染色发现再灌注组有大量的阳性标记,且积聚成团,参麦治疗组较再灌注组明显减少。结论:参麦注射液对缺血再灌注心肌损伤具有显著的保护作用,参麦可抑制缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡发生,并具有量效关系。

lncRNA KCNQ1OT1通过miR-499a-5p/TXNIP调控缺氧心肌细胞活性和凋亡的机制

目的探讨长链非编RNA(lncRNA)、KCNQ1重叠转录物(KCNQ1OT)1对缺氧心肌细胞活性和凋亡的影响及分子机制。方法将心肌细胞随机分为对照(NC)组、缺氧预处理(HPC)组、si-NC+HPC组、si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组、miR-NC+HPC组、miR-499a-5p+HPC组、si-硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)+HPC组、pcDNA-NC+si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组、pcDNA-TXNIP+si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组;用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-499a-5p和TXNIP mRNA的表达水平;Western印迹法检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别检测MDA含量和细胞SOD活性;双荧光素酶报告实验检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-499a-5p、TXNIP之间的靶向关系。结果心肌梗死患者血清及缺氧诱导的心肌细胞中lncRNA KCNQ1OT1表达水平显著升高(P<0.05)。下调lncRNA KCNQ1OT1、下调TXNIP或上调miR-499a-5p后,心肌细胞H9C2中CyclinD1表达、细胞活性、SOD活性显著升高,Cleaved-caspase-3表达、细胞凋亡率、MDA含量显著降低(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1通过靶向miR-499a-5p调控TXNIP表达。过表达TXNIP可以逆转lncRNA KCNQ1OT1下调对缺氧诱导的心肌细胞H9C2的影响。结论下调lncRNA KCNQ1OT1可能通过miR-499a-5p/TXNIP轴抑制缺氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激,促进细胞存活。

桦褐孔菌对人体心肌细胞凋亡的颉颃作用分析

分析桦褐孔菌对人体心肌细胞凋亡的颉颃作用,为桦褐孔菌在人体心肌方面的临床研究中做铺垫。首先,将310株桦褐孔菌当作主要菌种,选择固体和液体培养基,调配染色液当作材料,并选择试验仪器;其次,描述了人体外细胞的复苏与培养,将人体心肌细胞株进行随机分组,选取对数人体心肌细胞并在其中添加0.25%的胰酶来进行药物处理,根据PI荧光染色方法对每组培养瓶中的人体心肌细胞进行收集,利用流式细胞仪和软件Cell Quest来检测人体心肌细胞的凋亡率;最终完成了桦褐孔菌对人体心肌细胞凋亡颉颃作用的分析。通过试验,分别测试了桦褐孔菌对人体心肌细胞活力的影响以及对人体心肌细胞凋亡率的影响。通过测试得到,桦褐孔菌醇有效能够提升心肌细胞活力,抑制心肌细胞凋亡,并且在利用流式细胞仪测试桦褐孔菌对人体心肌细胞凋亡的影响时,发现桦褐孔菌能够抑制人体心肌细胞的凋亡,桦褐孔菌能够对人体心肌细胞凋亡产生颉颃作用。

自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡及缬沙坦的干预作用

目的:研究遗传性高血压及左室肥厚过程中心肌细胞凋亡及特异性血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂缬沙坦对心肌细胞凋亡的影响,探讨高血压左室肥厚及心肌细胞凋亡的可能机制。方法:实验选用10周龄自发性高血压大鼠30只,随机均分为缬沙坦治疗组和未治疗组,每组15只;以10周龄健康Wistar鼠15只作为正常对照组。缬沙坦治疗组给予缬沙坦20mg/(kg·d),溶解于特制饮水器中每天一次胃管灌入。其他两组每天饮用水10mL/kg灌胃。观察期限为12周,每2周测鼠尾动脉血压。12周后采用TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡情况。结果:未治疗组大鼠心肌TUNEL阳性细胞计数犤(116.7±11.3)核/高倍镜视野犦显著高于正常对照组及缬沙坦治疗组犤(23.3±3.3),(35.0±1.3)核/高倍镜视野犦(P<0.01)。自发性高血压大鼠随周龄增长,血压增高、心肌肥厚的同时发生心肌细胞凋亡,缬沙坦用药12周后,心肌细胞凋亡显著降低至接近正常对照组(P<0.05)。结论:心肌细胞凋亡是代偿性心肌肥厚发展为心力衰竭的可能机制之一。高血压早期缬沙坦在降压同时有效抑制心肌细胞凋亡。

HGF对心肌细胞凋亡保护作用的机制研究

目的分析肝细胞生长因子(HGF)对于心肌细胞凋亡的保护作用机制。方法分离培养乳鼠心肌细胞,将培养的乳鼠心肌细胞饥饿处理8 h后,采用流式细胞仪观察HGF减少过氧化氢(H2O2)引起的心肌细胞凋亡的保护作用,计算凋亡细胞百分率;采用蛋白质免疫印迹法检测凋亡相关蛋白FOXO3a变化;并观察使用lipofectamin2000转染技术敲除FOXO3a基因后,HGF对H2O2引起心肌细胞凋亡保护作用的变化。结果与对照组相比,研究组HGF可以显著减少,H2O2处理引起的心肌细胞凋亡,检测显示心肌细胞内FOXO3a含量基本无变化,磷酸化的FOXO3a的含量随时间变化有所增加。而在敲除FOXO3a基因后,HGF抑制心肌细胞凋亡的能力显著减低。结论 HGF抑制心肌细胞凋亡损伤,使心肌细胞中的FOXO3a磷酸化增加,提示HGF促进FOXO3a的磷酸化可能与其对心肌细胞凋亡的保护作用相关。

他汀类药物抗心肌细胞凋亡机制

近来实验证实他汀类药物具有除降血脂以外的心肌保护效应。现主要从他汀类药物激活磷脂酰肌醇-3激酶丝氨酸- 苏氨酸激酶／一氧化氮舍酶(PI3K／Akt／eNOS)信号通路、抑制氧化应激和抑制糖原合成激酶3β(GSK3β)三个方面阐述他汀类药物抑制心肌细胞凋亡的主要机制。