芦荟素减轻大鼠心肌细胞缺氧损伤:抑制氧化应激和铁死亡

背景:心肌细胞缺氧损伤与氧化应激和铁死亡密切有关。既往研究表明芦荟素具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种作用。目的:探讨芦荟素对缺氧诱导的H9C2细胞氧化应激及铁死亡的影响。方法:利用H9C2细胞构建缺氧模型,首先通过检测细胞活性,确定芦荟素无细胞毒性及最佳干预浓度。随后,利用试剂盒、超氧化物阴离子荧光探针及MitoSOX^(TM)Red荧光探针,分别评估芦荟素对缺氧诱导的H9C2细胞乳酸脱氢酶释放、活性氧产生以及线粒体氧化应激的影响。为了验证芦荟素对铁死亡的影响,采用荧光染色和流式细胞术,分别检测细胞内Fe^(2+)的含量和脂质过氧化程度。接着,利用蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR技术,检测铁死亡调节因子(谷胱甘肽过氧化物酶4、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4和核因子E2相关因子2)的表达。最后,通过运用铁死亡诱导剂Erastin,进一步确认铁死亡在芦荟素介导心肌保护过程中的重要作用。结果与结论:(1)与对照组相比,缺氧组H9C2细胞活力显著降低,乳酸脱氢酶释放、活性氧水平、线粒体氧化应激程度、Fe^(2+)含量及脂质过氧化程度显著上升,谷胱甘肽过氧化物酶4、核因子E2相关因子2的mRNA和蛋白表达明显降低,酰基辅酶A合成酶长链家族成员4的mRNA和蛋白表达显著升高(均P<0.05);(2)与缺氧组比较,芦荟素低、高剂量组逆转了上述指标变化(均P<0.05);(3)与缺氧+芦荟素组相比,缺氧+芦荟素+Erastin组H9C2细胞活力明显下降,乳酸脱氢酶释放显著升高(均P<0.01)。结果表明,芦荟素对缺氧处理的H9C2细胞具有保护作用,且呈剂量依赖性,主要通过抑制氧化应激和铁死亡实现的。

转染HACE1基因过表达或敲降病毒质粒对急性氧化应激损伤心肌细胞活性、凋亡及HO-1表达的影响

目的观察转染HACE1基因过表达或敲降病毒质粒对急性氧化应激损伤心肌细胞H9C2细胞活性、凋亡及急性氧化应激过程中血红素加氧酶(HO-1)表达的影响。方法取H9C2细胞分成对照组、HACE1过表达组、HACE1敲降组,HACE1过表达组、HACE1敲降组H9C2细胞分别转染HACE1基因过表达病毒质粒HACE1-OE、HACE1基因敲降慢病毒质粒HACE1 shRNA。三组细胞继续培养72 h后,应用缺氧小室将细胞缺氧培养4 h后复氧2 h模拟心肌细胞急性氧化应激损伤过程,构建急性氧化应激损伤心肌细胞模型。采用CCK-8法测算各组细胞活性,采用Hoechest33342染色法测算各组细胞凋亡率,采用Western blotting法检测各组细胞中氧化应激指标HO-1蛋白。结果对照组、HACE1过表达组、HACE1敲降组细胞活性分别为67.0%±4.4%、75.2%±4.2%、56.7%±3.0%,组间相比,P均<0.05。对照组、HACE1过表达组、HACE1敲降组细胞凋亡率分别为18.90%±1.02%、13.30%±0.86%、28.70%±0.67%,组间相比,P均<0.05。对照组、HACE1过表达组、HACE1敲降组细胞中HO-1蛋白相对表达量分别为1.00±0.17、0.71±0.19、1.96±0.28,组间相比,P均<0.05。结论转染HACE1基因过表达病毒质粒可提高急性氧化应激损伤心肌细胞H9C2的细胞活性,抑制其凋亡及氧化应激指标HO-1蛋白的表达;转染HACE1基因敲降病毒质粒可降低急性氧化应激损伤心肌细胞H9C2的细胞活性,促进其凋亡及氧化应激指标HO-1蛋白的表达。

热休克蛋白B1对大鼠心肌细胞氧化应激性损伤的作用

目的探讨线粒体在热休克蛋白 B1(HSPB1)抗氧化应激诱导的大鼠心肌细胞株 H9c2损伤中的作用。方法以培养的稳定高表达 HSPB1 H9c2(HSPB1细胞)和空载体转染的 H9c2(对照细胞)为模型,0～1000/μmol/L H_2O_2刺激2h,观察细胞形态学、线粒体内膜跨膜电位、内源性活性氧自由基(ROS)水平。结果 (1)HSPB1高表达显著减轻 H_2O_2诱导的细胞形态学的损伤变化;(2)HSPB1高表达显著减轻 H_2O_2诱导的线粒体跨膜电位丧失:0、75、150、300、500、1000μmol/LH_2O_2刺激后,HSPB1和对照细胞的跨膜电位分别为10.0±0.11和7.01±0.26,9.11±0.17和6.05±0.19,7.69±0.28和5.14±0.28,6.95±0.13和4.66±0.11,6.61±0.20和1.85±0.35,6.60±0.05和1.19±0.01,各组差异均有统计学意义(P<0.01);(3)HSPB1和对照细胞在0、75、150、300、500、1000μmol/L H_2O_2诱导后,内源性 ROS 水平分别为5527±248和5964±387、6719±336和8528±411、6469+160和7795±136、7042±12和7591±203、6148±208和6911±136、5468±546和6822±371,除0 μmol/L 外,其他各组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HSPB1高表达显著保护了大鼠心肌细胞因氧化应激诱导的形态学变化,这可能与稳定线粒体膜电位和抑制线粒体产生的 ROS 有关。

丹酚酸B对氧化应激损伤乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制

目的:探讨丹酚酸B对氧化应激损伤乳鼠心肌细胞的保护作用,阐明其作用机制。方法:体外原代培养Wistar乳鼠心肌细胞,随机分为正常对照组、模型组及低和高剂量丹酚酸B组。除正常对照组外,其余各组培养基中加入终浓度为100μmoL·L^(-1)的过氧化氢(H2O_2)造成心肌细胞氧化损伤,其中低和高剂量丹酚酸B组分别加入终浓度为20和40μmol·L^(-1)丹酚酸B。共同培养4h后,光镜下观察心肌细胞形态表现,MTT法检测心肌细胞存活率;同时收集各组细胞及细胞培养液,分光光度法测定心肌细胞中还原型谷胱甘肽(GSH)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,ELISA法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸磷酸激酶(CK)水平。结果:与正常对照组比较,模型组部分心肌细胞悬浮在培养液中,贴壁细胞数量减少,伪足回缩,体积变小,心肌细胞自律搏动明显缓慢。与模型组比较,20和40μmol·L^(-1)丹酚酸B组心肌细胞数量明显增多,伪足回缩少,自律搏动增强。与正常对照组比较,模型组心肌细胞存活率降低(P<0.01),心肌细胞中GSH水平降低(P<0.01),MAD水平升高(P<0.01),SOD活性降低(P<0.01),细胞培养液中LDH和CK水平升高(P<0.01)。与模型组比较,20和40μmol·L^(-1)丹酚酸B组心肌细胞存活率升高(P<0.05或P<0.01),心肌细胞中GSH水平和SOD活性升高(P<0.05或P<0.01),MDA水平降低(P<0.05或P<0.01),细胞培养液中LDH和CK水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:丹酚酸B对心肌细胞氧化应激损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与抑制过氧化反应和提高心肌细胞抗氧化能力有关。

运动疲劳诱导小鼠心肌细胞氧化应激与DNA损伤

目的:探讨运动疲劳对小鼠心肌细胞氧化应激与DNA损伤诱导作用。方法:选取24只雄性昆明小鼠,随机分成4组:对照组(CG)和运动后即刻(0SG)、24h(24SG)和48h(48SG)组,每组6只。采用反复力竭递增负荷跑台运动建立小鼠运动疲劳模型;用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术观察小鼠心肌细胞形态,用IMI1.0彗星分析软件测定DNA损伤指标;并测定心肌组织超氧化物岐化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:24SG组心肌细胞尾部的荧光强度增强,彗星样细胞的出现率明显升高;而在运动后48h心肌细胞慧尾消失。0SG和24SG组DNA损伤各指标显著高于CG组(P<0.001),且24SG组显著高于0SG(P<0.01)。0SG、24SG组SOD活性和MDA含量均显著高于CG组(P<0.001),24SG组较0SG组显著下降(P<0.05)。结论:运动疲劳可诱发小鼠心肌细胞的氧化损伤和DNA损伤,运动性氧应激是导致心肌细胞DNA损伤的机制之一。

线粒体通透性转换孔在天麻素抗心肌细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨H9c2心肌细胞发生氧化应激损伤时,线粒体膜上的线粒体通透性转换孔(mPTP)在天麻素抗氧化应激损伤的保护机制中所发挥的作用。方法本实验分为6组:正常组,过氧化氢组,天麻素+过氧化氢组,天麻素组,环孢菌素A组,环孢菌素A+天麻素+过氧化氢组。通过加入环孢菌素A(mPTP开放剂)观察天麻素的保护作用是否被抑制。用MTT法初步检测各组细胞存活率,采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪观察细胞早期凋亡率,大鼠三磷酸腺苷(ATP)试剂盒检测ATP的含量,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)的含量,激光扫描共聚焦显微镜观察Jc-1标记的线粒体膜电位,Western blot检测细胞内细胞色素C(Cyt C)含量,Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的酶活性。结果环孢菌素A+天麻素+过氧化氢组线粒体的相对膜电位低于天麻素+过氧化氢组(1.98±0.18 vs 3.08±0.14),差异有统计学意义(P=0.014)。环孢菌素A可以阻断氧化应激时天麻素降低细胞内活性氧和相关凋亡因子的含量、抑制相关因子活性的作用(P<0.05),并且在一定程度上阻断了天麻素的抗凋亡作用(5.77±0.75)%vs(1.97±0.82)%,两者差异有统计学意义(P<0.001)。结论天麻素可以通过抑制心肌细胞发生氧化应激损伤时mPTP的开放,最终通过减少凋亡来发挥一定的抗氧化应激损伤的作用。

苦参素对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞氧化应激和细胞凋亡的影响

目的研究苦参素(OMT)对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞氧化应激和细胞凋亡的影响。方法无菌环境下分离SD大鼠乳鼠心肌细胞并培养72 h后随机分为:空白对照组、缺氧/复氧(H/R)模型对照组、OMT(20μg/m L、40μg/m L和80μg/m L)干预组和舒血宁注射液(SXN,100μg/m L)干预组(阳性对照组),每组设10个复孔。药物干预6 h后,通过MTT法检测细胞存活率;检测细胞培养液中心肌酶[谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)]释放量;测定细胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)]活性和丙二醛(MDA)含量;通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过RT-PCR检测细胞中bcl-2mRNA、BaxmRNA表达并计算bcl-2/Bax比值,通过Western blot方法检测细胞caspase-3蛋白表达水平并进行半定量分析。结果与模型对照组比较,OMT40μg/m L、80μg/m L干预组、SXN干预组乳鼠心肌细胞存活率显著升高,培养液中AST、CPK、LDH释放量显著降低,细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,细胞凋亡状况显著改善、凋亡率显著降低,细胞中bcl-2 mRNA表达显著上调且Bax mRNA表达显著下调、bcl-2/Bax表达比值显著升高,细胞中caspase-3蛋白表达显著升高,上述差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);其中OMT 80μg/m L干预组细胞中GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。结论苦参素对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞氧化应激和细胞凋亡具有抑制作用,其作用机制可能与苦参素能有效改善抗氧化酶活性、调节凋亡相关基因表达有关。

敲低蛋白酶激活受体2基因对缺氧/复氧损伤后H9c2心肌细胞氧化应激的影响

目的探讨敲低蛋白酶激活受体2(PAR2)基因对缺氧/复氧(H/R)损伤后H9c2心肌细胞氧化应激的影响。方法将H9c2心肌细胞分为非特异性干扰组(NS组)和特异性干扰组(SI组),分别转染非特异小干扰RNA(siRNA)和PAR2 siRNA。转染48 h后检测两组PAR2 mRNA表达情况以评价PAR2敲除效率。取成功转染siRNA的H9c2细胞,建立H/R模型,采用化学比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活力,硫代巴比妥酸显色法测定细胞丙二醛的含量。结果转染48 h后,SI组PAR2 mRNA表达水平低于NS组(P<0.05),且降至NS组30%以下。SI组ROS相对荧光强度、丙二醛及LDH含量均低于NS组(均P<0.05),SOD活力高于NS组(均P<0.05)。结论 PAR2基因敲低可减轻损伤后H9c2心肌细胞的氧化应激,从而发挥心肌保护作用。

蜂胶及其活性成分抗心肌细胞氧化性损伤作用探析

蜂胶是西方蜜蜂采集植物树脂后,混入蜂蜡和其它分泌物经加工咀嚼而成的一种粘稠物质。蜂胶作为一种天然活性物质,其成分极其复杂,具有抗菌、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性,是作为保健食品、药品制品的重要活性成分。随着人们饮食结构的改变、空气质量不断下降以及我国老龄化现象的加剧,心血管疾病已逐渐成为威胁我国公民健康的重大疾病之一。心血管疾病的发病机制极其复杂,其中氧自由基引起的心肌细胞氧化性损伤是造成心血管系统结构与功能异常的重要原因之一。大量研究证实,许多心血管疾病的病理过程中都有过量的氧自由基产生。

丹参多酚酸盐对H_(2)O_(2)所致心肌细胞氧化应激损伤及PPARγ/Nrf2/HO-1通路的影响

目的探讨丹参多酚酸盐(SAL)对过氧化氢(H_(2)O_(2))所致H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响及过氧化物酶体增殖子活化受体(PPARγ)/核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/抗血红素加氧酶-1(HO-1)通路在其中的调控作用。方法以100μmol/L的H_(2)O_(2)干预对数生长期H9c2细胞4 h建立心肌细胞氧化损伤模型,设置H_(2)O_(2)组、SAL 50 mg/L组、SAL 100 mg/L组、SAL 200 mg/L组;另取对数生长期H9c2细胞作为正常组。药物干预24 h后,四唑盐(MTT)法和Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞增殖和凋亡率,2,7-双乙酸二氯荧光(DCFH-DA)探针检测细胞活性氧(ROS)含量,生化分析法检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化法、钼酸铵法分别检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测PPARγ、Nrf2、HO-1、核转录因子-κB(NF-κB)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果与H_(2)O_(2)组比较,SAL 50 mg/L组、SAL 100 mg/L组、SAL 200 mg/L组细胞增殖率升高且凋亡率降低,ROS含量和CK-MB、LDH漏出量降低,MDA含量降低且SOD、CAT活性升高,PPARγ、Nrf2、HO-1蛋白表达上调且NF-κB、Cleaved Caspase-3表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论SAL对H_(2)O_(2)所致H9c2心肌细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与激活PPARγ/Nrf2/HO-1通路有关。

开放线粒体K_(ATP)通道对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:观察ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂二氮嗪对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:采用过氧化氢(500μmol.L-1)诱导法制备大鼠培养心肌细胞氧化应激损伤模型,通过检测培养液中乳酸脱氢酶以及用流式细胞仪结合罗丹明-123和碘化丙啶双标记法检测线粒体膜电位和细胞存活状态,观察二氮嗪(100μmol.L-1)对氧化应激损伤的保护作用。结果:二氮嗪预处理后,细胞培养液中乳酸脱氢酶活性较过氧化氢处理组显著降低(P<0.01),细胞存活率升高,并可减少氧化应激造成的线粒体膜电位的丢失,其作用可被线粒体KATP通道阻断剂5-羟基癸酸酯所拮抗。结论:二氮嗪对过氧化氢造成的培养心肌细胞氧化应激损伤具有保护作用,其可能通过激活线粒体KATP通道介导。

右美托咪定调控Nrf2/HO-1通路对H2 O2诱导心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨右美托咪定通过调控核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)通路对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞氧化应激损伤发挥保护作用。方法:体外培养H9c2心肌细胞,选择对数生长期细胞进行实验,分为对照组、模型组、右美托咪定低、中、高剂量组。对照组不进行处理;模型组加入终浓度为200μmol·L^-1的H2O2;右美托咪定低、中、高剂量组分别加入终浓度为5,10,20μmol·L^-1的右美托咪定,同时给予终浓度为200μmol·L^-1的H2O2,继续培养24 h后,检测各组细胞存活率、凋亡率、细胞中抗氧化指标、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、HO-1和Nrf2蛋白变化情况。结果:与对照组相比,模型组和右美托咪定各剂量组H9c2细胞存活率、谷胱甘肽(GSH)、NO、HO-1和Nrf2蛋白水平降低(P<0.05),凋亡率、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、TNF-α和IL-6升高(P<0.05);与模型组相比,右美托咪定各剂量组H9c2细胞存活率、GSH、NO、HO-1和Nrf2蛋白水平升高(P<0.05),凋亡率、LDH、MDA、ROS、TNF-α和IL-6降低(P<0.05),且右美托咪定各剂量组之间上述指标呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:右美托咪定可能通过激活Nrf2/HO-1通路,减轻心肌细胞的氧化损伤,促进细胞增殖和抑制细胞凋亡,从而发挥心肌保护作用。

TNF-α联合H_(2)O_(2)诱导对大鼠心肌细胞氧化应激和炎症损伤的影响

为探究TNF-α联合H_(2)O_(2)诱导对大鼠心肌细胞氧化应激和炎症损伤的影响,建立更贴近于心肌细胞氧化应激和炎症损伤模型,采用200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)作用1 h联合80 ng·mL^(-1)TNF-α作用H9c2细胞12 h,通过CCK-8、ELISA以及流式细胞术等实验,发现氧化应激指标MDA水平增高,抗氧化酶SOD降低,NF-κB信号通路下游炎症相关的蛋白表达和mRNA表达增强。说明200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)作用1 h联合80 ng·mL^(-1)TNF-α作用12 h共同刺激H9c2细胞,可诱导大鼠心肌细胞氧化应激和炎症损伤,其作用机制可能与靶向调控NF-κB信号通路有关。

右美托咪定调控Nrf2/HO-1通路对H_(2)O_(2)诱导心肌细胞氧化应激损伤的作用研究

目的探讨右美托咪定调控核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导心肌细胞氧化应激损伤的作用。方法体外培养大鼠H9C2心肌细胞,设置对照组、H_(2)O_(2)组、1μmol右美托咪定+H_(2)O_(2)组、5μmol右美托咪定+H_(2)O_(2)组、10μmol右美托咪定+H_(2)O_(2)组。CCK-8法检测各组H9C2细胞增殖情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组H9C2细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测各组H9C2细胞Nrf2、HO-1 mRNA相对表达量;Western blotting检测各组H9C2细胞Nrf2、HO-1蛋白相对表达量。结果与对照组比较,H_(2)O_(2)组H9C2细胞存活率、SOD水平、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对表达量降低,MDA水平升高(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,1μmol右美托咪定+H_(2)O_(2)组、5μmol右美托咪定+H_(2)O_(2)组、10μmol右美托咪定+H_(2)O_(2)组H9C2细胞存活率、SOD水平、Nrf2、HO-1mRNA及蛋白相对表达量均升高,MDA水平降低(P<0.05),且呈右美托咪定浓度依赖性。结论右美托咪定可能通过激活Nrf2/HO-1通路,发挥对H_(2)O_(2)诱导心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。

KLF9通过增加氧化应激对心肌细胞缺血损伤的影响

目的探讨Kruppel样转录因子9(KLF9)通过增加氧化应激对心肌细胞缺血损伤的影响。方法将心肌细胞H9c2分为以下两组,正常组:将心肌细胞H9c2放于10%胎牛血清的DMEM、100 U/ml的青霉素和链霉素中培养;缺血组:用无血清代替培养基,添加至10μg/ml转铁蛋白和10μg/ml胰岛素中培养。通过逆转录聚合酶链式反应(Rt-PCR)检测KLF9的mRNA水平,采用免疫印迹(Western blotting)检测KLF9蛋白的表达,对乳酸脱氢酶(LDH)的活性进行测定,MTT法检测心肌细胞活力,应用缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,对活性氧(ROS)进行测定。结果心肌细胞中KLF9 mRNA的表达水平较正常组比较明显增加(P<0.05);心肌细胞中KLF9蛋白水平较正常组比较明显升高(P<0.05);缺血组的心肌细胞LDH的释放能力明显高于正常组(P<0.05),在转染siKLF9#1和siKLF9#2后的缺血组LDH的释放能力较siCtrl中的缺血组相比明显减弱(P均<0.05);缺血组的心肌细胞活力的明显高于正常组(P<0.05),在转染siKLF9#1和siKLF9#2后的缺血组细胞活力较siCtrl中的缺血组相比明显降低(P均<0.05);缺血组的心肌细胞凋亡能力的明显低于正常组(P<0.05),在转染siKLF9#1和siKLF9#2后的缺血组细胞凋亡能力较siCtrl中的缺血组相比明显降低(P均<0.05);缺血组的心肌细胞ROS水平明显低于正常组(P<0.05),在转染siKLF9#1和siKLF9#2后的缺血组细胞ROS水平较siCtrl中的缺血组相比明显降低(P均<0.05)。结论KLF9可增加ROS的水平加重心肌细胞缺血性损伤,靶向KLF9可能有助于维持心肌细胞的活力,减少心肌梗死期间心肌细胞的损伤。

miR-19b对H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞H9c2氧化应激损伤的保护作用及机制研究

目的研究microRNA(miR)-19b是否在H2O2诱导的心肌细胞的氧化应激损伤中具有保护作用。方法将大鼠H9c2心肌细胞株分为6组,空白对照组(L1),H2O2组(L2),H2O2+miR-19b mimic阴性对照(NC)组(L3),H2O2+miR-19b mimic组(L4),H2O2+miR-19b inhibitor组(L5),H2O2+miR-19b inhibitor NC组(L6)。NC组细胞转染随机合成的miRNA片段作为阴性对照。采用CCK8和流式细胞术检测细胞活性和凋亡情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测miR-19b的表达量,并利用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,Western blot法检测核因子相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)表达水平。结果与L1组比较,L2组和L3组中miR-19b表达量、H9c2细胞活性和细胞内SOD、GSH水平均显著降低(P<0.01),细胞凋亡率和细胞内LDH、MDA水平、Nrf2和HO-1表达水平均显著增加(P<0.01)。与L2组及L3组比较,L4组中miR-19b表达量、H9c2细胞活性和细胞内SOD、GSH水平、Nrf2和HO-1表达水平均显著增加(P<0.01),细胞凋亡率和细胞内LDH、MDA水平均显著降低(P<0.01),L5组中miR-19b表达量和H9c2细胞活性和细胞内SOD、GSH水平、Nrf2和HO-1表达水平均显著降低(P<0.01),细胞凋亡率和细胞内LDH、MDA水平均显著增加(P<0.01),L6组miR-19b表达量、H9c2细胞活性、细胞凋亡率、细胞内SOD、GSH、LDH、MDA水平以及Nrf2和HO-1表达水平均未见统计学差异(P>0.05)。结论miR-19b高表达可显著抑制H9c2细胞的氧化应激损伤,发挥心肌细胞保护作用。

AMPK/Nrf2通路介导艾司氯胺酮对H_(2)O_(2)诱导心肌细胞损伤的保护作用

目的探究艾司氯胺酮对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导H9c2心肌细胞损伤的作用及其机制。方法采用H_(2)O_(2)处理的H9c2细胞为心肌细胞毒模型,将细胞分为空白组、模型组(H_(2)O_(2)处理H9c2细胞)及艾司氯胺酮组(H_(2)O_(2)和艾司氯胺酮共同处理H9c2细胞)。处理24 h后,检测H9c2细胞增殖、凋亡,细胞内凋亡蛋白天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3/8/9,细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6和IL-1β的mRNA浓度,细胞内AMP依赖的蛋白激酶(AMP-dependent protein kinase,AMPK)磷酸化浓度及细胞核核因子相关因子2(nuclear factor-related factor 2,Nrf2)浓度。结果空白组、模型组、艾司氯胺酮组细胞增殖率分别为75.55%±3.39%、41.62%±5.88%、63.13%±6.06%。与空白组相比,模型组细胞增殖水平显著降低、凋亡细胞数量显著增加,而艾司氯胺酮组细胞增殖显著优于模型组、凋亡细胞数量显著少于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组细胞内切割caspase 3/8/9蛋白,ROS,MDA及TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA浓度显著高于空白组,而艾司氯胺酮组细胞内切割caspase 3/8/9蛋白、ROS、MDA及TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA浓度显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步发现模型组细胞磷酸化AMPK及核内Nrf2浓度显著低于空白组,而艾司氯胺酮组细胞内上述指标浓度显著高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论艾司氯胺酮能够通过抑制氧化应激改善H_(2)O_(2)诱导心肌细胞损伤,其作用机制与AMPK/Nrf2通路有关。

tBHQ对膜性肾病大鼠肾组织损伤、氧化应激抑制及肾皮质和细胞核Nrf2/NF-κB信号通路调控作用

目的观察特丁基对苯二酚(tBHQ)对膜性肾病(MN)大鼠肾组织损伤、氧化应激的抑制及肾皮质和细胞核Nrf2/NF-κB信号通路的调控作用,以探讨tBHQ对MN的潜在治疗作用及机制。方法采用随机数字表法将32只大鼠均分为正常对照组、tBHQ对照组、模型组及tBHQ干预组。正常对照组腹腔注射3 mL正常兔血清;tBHQ对照组同法注射正常兔血清后予tBHQ 50 mg/kg灌胃,每天1次,共15次;模型组腹腔注射3 mL兔Fx1A抗血清建立被动Heymann肾炎(PHN)模型;tBHQ干预组建立PHN模型后tBHQ 50 mg/kg灌胃,每天1次,共15次。结束实验当天检测各组大鼠肾病综合征相关指标[24 h尿蛋白(24 h-UPro)、血清白蛋白(ALB)、总胆固醇(T-CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)]、肾功能相关指标[sCr、尿素氮]、肾脏足细胞损伤情况(足细胞足突融合、肾小球Podocin/Desmin表达及分布)]、肾皮质氧化应激标志物[丙二醛(MDA)、8-异前列腺素(8-iso-PG)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)]、肾皮质抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)]活力及肾皮质和细胞核Nrf2/NF-κB信号通路相关蛋白。结果与正常对照组相比,模型组24 h-UPro、T-CHOL、TG、HDL、LDL、sCr、尿素氮均升高,ALB降低(P均<0.05);肾小球上皮下电子致密物沉积,足细胞足突弥漫性融合,足细胞足突宽度增加,Podocin表达量减少、分布异常,Desmin表达量上调;肾皮质MDA、8-iso-PG、8-OHDG均升高(P均<0.05),SOD、CAT、γ-GCS活力均降低(P均<0.05);肾皮质及细胞核Nrf2均下调,NF-κB p65、p-NF-κB p65(Ser536)均上调(P均<0.05)。与模型组相比,tBHQ干预组24 h-UPro、T-CHOL、TG、HDL、LDL、sCr均下降,ALB上升(P均<0.05);足细胞足突弥漫性融合减轻,足细胞足突宽度下降,Podocin/Desmin表达及分布趋向正常;肾皮质MDA、8-iso-PG、8-OHDG均下降(P均<0.05),SOD、CAT、γ-GCS活力均上升(P均<0.05);肾皮质及细胞核Nrf2均上调,NF-κB p65、p-NF-κB p65(Ser536)均下调(P均<0.05)。结论tBHQ对MN大鼠肾组织损伤及氧化应激均有抑制作用,可调控肾皮质及细胞核Nrf2/NF-κB信号通路。tBHQ可能通过激动Nrf2、抑制NF-κB活化,从而抑制肾组织氧化应激反应,进而减轻MN大鼠肾组织损伤。

lncRNA NEAT1调控miR-206对缺氧复氧大鼠心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1调控miR-206对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响和机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧模型。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺氧复氧诱导后lncRNA NEAT1和miR-206的表达水平。将lncRNA NEAT1小干扰RNA(si-lncRNA NEAT1)、miR-206模拟物(miR-206 mimics)分别转染H9c2细胞,缺氧复氧诱导后,检测细胞中丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量以及细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)和cleaved Caspase-9蛋白表达。利用荧光素酶报告基因实验以及RT-qPCR验证lncRNA NEAT1和miR-206的靶向结合关系。结果缺氧复氧诱导后H9c2细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高,miR-206的表达显著降低(P<0.05)。转染si-lncRNA NEAT1或miR-206 mimics处理缺氧复氧H9c2细胞,细胞存活率显著升高,MDA、ROS含量以及LDH活性显著降低,cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9蛋白的表达显著降低,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。lncRNA NEAT1靶向miR-206并负调控miR-206表达。抑制miR-206部分逆转沉默lncRNA NEAT1对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化损伤和凋亡的影响(P<0.05)。结论沉默lncRNA NEAT1通过上调miR-206可减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,进而发挥心肌保护作用。

干姜对心肌细胞缺氧缺糖性损伤的保护及其抗血小板聚集功能的实验研究

干姜为传统温里药之一，具有温中散寒、回阳通脉之功效。本实验运用心肌细胞缺氧缺糖性损伤模型，观察了干姜对其保护作用。１材料与方法１．１材料１．１．１干姜制备将干姜６０℃烘干，粉碎后过１００目筛，制成粉末。１．１．２动物大耳白兔，雄性，体重２ｋｇ～３ｋｇ...