卡托普利晚期预处理对缺氧复氧心肌细胞游离钙的影响

目的观察卡托普利晚期预处理对缺氧复氧心肌细胞游离钙的影响,评价其延迟心肌的保护作用。方法建立培养乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型。设正常对照组、缺氧复氧组、缺氧预适应组、卡托普利预处理组、蛋白激酶C阻断剂+卡托普利组、一氧化氮合酶阻断剂+卡托普利组和核因子κB阻断剂+卡托普利组。利用分光光度计测定丙二醛和超氧化物岐化酶含量;全自动生物化学分析仪测定乳酸脱氢酶含量。Flou3AM负载染色和流式细胞分析技术测定细胞内钙离子浓度。结果卡托普利预处理和缺氧预处理均可减轻缺氧再灌注时心肌细胞内钙离子浓度增加(594±5nmolL、507±32nmolL比789±9nmolL,P<0.01),抑制乳酸脱氢酶和丙二醛的增加和超氧化物岐化酶含量的降低;但与对照组(414±37nmolL)比较钙内流仍有轻度增加(P<0.05);预先分别加入蛋白激酶C阻断剂、一氧化氮合酶阻断剂、核因子κB阻断剂与卡托普利共同孵育细胞,行缺氧复氧损伤所测得细胞内钙离子浓度分别为676±32nmolL、700±37nmolL和689±11nmolL,与卡托普利预处理组比较有所增加(P<0.05);但与缺氧复氧组比较仍有降低(P<0.05)。结论以上提示,卡托普利预处理可抑制缺氧复氧时的钙超载及其脂质过氧化损伤。其机制可能是通过轻度增加钙内流、启动心肌延迟保护作用;其过程可能涉及蛋白激酶C、一氧化氮合酶和核因子κB信号转导通路中的多个环节。

黄芩甙预处理对缺血再灌注大鼠心功能和心肌细胞游离钙的影响

目的:观察黄芩甙预处理对缺血/再灌注(I/R)大鼠离体心功能和心肌细胞游离[Ca2+]i的影响,探讨其对心脏I/R损伤的保护作用及可能机制。方法:SD大鼠50只,摘取心脏后采用Langendorff心脏灌流系统分为五组进行实验,对照组采用正常Tyrode液灌流90min;I/R组先用正常Tyrode液灌流30min后,再行I/R各30min;三种浓度(10、20、40μmol/L)黄芪甙预处理组于停止灌注前,用正常Tyrode液灌流10min后再用不同浓度黄芩甙液灌流20min,最后行I/R各30min。观察各组心功能指标冠脉流量(CF)、左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左室收缩压最大上升/下降速率(dp/dtmax和dp/dtmin);分离单个心肌细胞,检测心肌细胞内Ca2+荧光染色强度,计算[Ca2+]i。统计学分析各组各指标测值差异及其相关性。结果:方差分析显示,心功能指标和[Ca2+]i在各组大鼠之间差异有统计学意义(P<0.01)。两两比较表明,I/R组各心功能指标明显低于对照组,[Ca2+]i高于对照组(P均<0.01);3种浓度黄芩甙预处理后,心功能指标值明显升高,[Ca2+]i明显降低(P<0.05,P<0.01)。相关性分析表明,黄芩甙预处理浓度与心功能指标变化呈正相关,与[Ca2+]i变化呈负相关(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩甙预处理可显著改善I/R心肌的舒缩功能,其机制可能与黄芩甙降低I/R心肌细胞内游离[Ca2+]i有关。

人参皂甙Rg1对缺氧豚鼠心肌细胞游离钙浓度降低作用的研究

目的 :探讨人参皂甙 (ginsenosides,Gin)单体Rgl及维拉帕米 (verapamil,Ver)对豚鼠心肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)变化的影响。方法 :采用离体豚鼠心脏Langendorff法灌注 ,胶原酶I型分离心肌细胞 ,用荧光指示剂方法 (Fura 2 /AM)标记心肌 ([Ca2 + ]i)变化。将心肌细胞悬液分为 3组 :对照组、Rgl组和Ver组。观察缺氧后心肌[Ca2 + ]i 的变化。结果 :(1)正常氧状态心肌 [Ca2 + ]i 均值为 (12 5 .4± 10 .3)nmol/L(n =2 0 )。 (2 )缺氧状态下 ,心肌[Ca2 + ]i 增加与缺氧时间 (程度 )直线相关 ,相关系数r为 0 .98左右。 (3)Rgl对缺氧后心肌 [Ca2 + ]i 增加明显延缓。结论 :Rgl在缺氧条件下 ,使心肌 [Ca2 + ]i 明显下降 ,从而阻止心肌细胞内钙超载 ,其作用与Ver相似 。

一氧化氮对缺氧豚鼠心肌细胞游离钙浓度的影响

目的 :探讨左旋精氨酸 (L - arginine,L - arg)及 NG-亚硝基 - L -精氨酸甲酯 (NG- nitric- L - arginine- methyl ester,L NAME)对缺氧豚鼠心肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)变化影响。 方法 :采用离体豚鼠心 L angendorff法灌注 ,胶原酶 I型分离细胞 ,再用荧光指示剂方法 (Fure- 2 / AM)标记心肌[Ca2 + ]i 变化。分为 3组 :对照组、L - arg组和 L - NAME组。观察缺氧后心肌 [Ca2 + ]i的变化。 结果 :1正常氧状态下 ,心肌 [Ca2 + ]i 均值为 12 0 .0± 14.3nmol/ L(n=10 )。2缺氧状态下心肌 [Ca2 + ]i 增加与缺氧时间 (程度 )成正相关 ,相关系数 r为 0 .99左右。 3一氧化氮 (NO)在缺氧条件下对心肌 [Ca2 + ]i 有影响。 结论 :在短期轻度缺氧条件下 ,NO不足使心肌 [Ca2 + ]i 增加 ,若能设法增加细胞内的 NO含量 ,可以提高心肌细胞的自我保护作用。在长时间重度缺氧条件下 。

酮替芬对新生大鼠心肌细胞内游离钙的影响

观察了酮替芬 (Ket)对新生鼠心肌细胞内游离钙的影响 ,以酶法制备新生大鼠心肌细胞悬液 ,用荧光探针Fura - 2 /AM检测心肌细胞内游离钙浓度的变化。结果表明 :Ket对静息状态下 [Ca2 +]i无影响 ,Ket(10～ 5 0 0 μmol/L)剂量依赖性抑制高钾去极化及NE所致的 [Ca2 +]i 升高。提示 :Ket对心肌细胞膜上电压依赖性钙通道有抑制作用 。

Egb761对SD乳鼠心肌细胞外钙内流的影响研究

目的探讨银杏叶提取物（ Egb761）对 SD乳鼠心肌细胞外钙内流的影响。方法选择三天鼠龄的雄性 SD乳鼠心肌，按 Hoffman法行心肌细胞培养 10 12天。实验分二组：对照组和实验组（ Egb761分成三种浓度 10－ 3mol、 10－ 5mol、 10－ 7mol）。应用 Fura 2荧光探针的方法，观察各组静息状态和加氯化钾（浓度为 20mmol）后的心肌细胞游离钙浓度的改变。结果（ 1）基础状态下，氯化钾能促进心肌细胞外钙内流，使心肌细胞内游离钙浓度增高 (P<0.001)；（ 2） Egb761对氯化钾激发的细胞外钙内流的增加有抑制作用 (P<0.05)。结论 Egb761具有抑制 SD乳鼠心肌细胞外钙内流的作用，提示 Egb761可能对钙超载所致的心肌细胞损伤具有防治作用。

黄芪抑制去甲肾上腺素诱导大鼠心肌细胞内游离钙含量升高的作用

目的 :研究黄芪对去甲肾上腺素 (NE)诱导大鼠心肌细胞内游离钙 [Ca2 + ]i 含量升高的作用。方法 :应用AR CM MIC阳离子检测系统 ,采用Ca2 + 指示剂Fura 2 /AM检测培养新生大鼠单个心肌细胞内游离钙的浓度 ,并观察Am对NE诱导大鼠心肌细胞内 [Ca2 + ]i 升高的影响。结果 :当细胞外Ca2 + 浓度为 1 .3mmol/L时 ,大鼠心肌细胞 [Ca2 + ]i 为 ( 97.1 1 +8.2 1 )nmol/L ,给予 1 0 -5mol/L的NE ,可使大鼠心肌细胞 [Ca2 + ]i 增至 ( 2 91 .73± 1 5 .0 3 )nmol/L,而经黄芪处理的大鼠心肌细胞的 [Ca2 + ]i则由 ( 95 .98±8.1 4)nmol/L增至 ( 1 1 4.2 8± 9.2 9)nmol/L。结论 :NE能诱导大鼠心肌细胞内游离钙含量明显升高 ,黄芪对心肌细胞静息 [Ca2 + ]i无明显影响 ,但能抑制NE诱导大鼠心肌细胞 [Ca2 + ]i

脱氢紫堇碱在心肌细胞钙调控中的作用

背景已有动物实验表明脱氢紫堇碱(DHC)可能通过阻止心肌细胞内钙超载,提高心肌细胞的自我保护作用,但还没有相关实验阐明DHC调控心肌细胞保护的分子机制。目的探讨DHC对心肌细胞内Ca2+超负荷及Ca2+调控相关蛋白的表达变化。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对心肌细胞Ca2+调控相关蛋白,包括钙三磷酸腺苷酶(Ca2+-ATPase)、磷酸受钠蛋白(PLB)、斯里兰卡肉桂碱受体2(RYR2)、L型钙通道和肌集钙蛋白(CASQ)的mRNA在转录水平的改变进行了检测,在此基础上,又用western blot法做蛋白表达水平的检测。结果缺氧导致心肌细胞的Ca2+-ATPase、PLB、L型钙通道和CASQ的mRNA转录水平明显减低(P<0.01),而RYR2的mRNA转录水平却升高了(P<0.05)。DHC能使正常、缺氧心肌细胞的RYR2转录表达水平明显减低40%、10%,但CASQ却明显增加36%、82%(P<0.01)。结论心肌细胞的Ca2+-ATPase、CASQ、L型钙通道、PLB和RYR2的表达异常可能是缺氧引起心肌细胞内Ca2+超负荷的分子机制;DHC对缺氧心肌细胞的保护作用与其降低正常和缺氧心肌细胞RYR2及增加CASQ基因转录和蛋白表达有关。