HOE642对缺氧/复氧心肌细胞的保护机制

目的观察Na+/H+交换抑制剂HOE642对心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的保护作用,方法原代培养的心肌细胞分为对照组、A/R组、A/R+HOE642组、A/R+尼卡地平(Nic)组、A/R+蛋白激酶(PKC)阻滞剂(H7)组和A/R+丝裂元活化蛋白激酶(MAPK)阻滞剂(PD98059)组。检测各组心肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)、细胞活力、ATP含量及孵育液中乳酸脱氢酶(LDH)含量、MAPK和PKC活性。免疫印迹法检测心肌细胞钙蛋白酶(u-calpain和m-calpain)。结果A/R+Nic、A/R+HOE642使心肌细胞[Ca2+]i降低,且m-calpain蛋白表达亦降低。A/R+Nic、A/R+HOE642组心肌细胞孵育液中心肌激酶(LDH、CK)均低于A/R组(P<0.01);细胞活力、ATP含量、PKC和MAPK活性高于A/R组(P<0.05或P<0.01)。PKC抑制剂H7及MAPK抑制剂PD98059组心肌细胞孵育液中心肌激酶(LDH、CK)均高于A/R组(P<0.05),细胞活力、ATP含量明显低于A/R组(P<0.05)。结论HOE642与钙通道阻滞剂一样,可抑制心肌细胞内游离钙超载引起的心肌细胞A/R损伤,阻断PKC和MAPK,使A/R的心肌细胞损伤加剧。

maFGF及aFGF对培养大鼠心肌缺氧／复氧后细胞凋亡的影响

目的:观察并比较maFGF及aFGF对心肌缺氧/复氧后细胞凋亡的影响. 方法:利用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立体外心肌缺氧/复氧模型,实验分为12组:(1)对照组;(2)缺氧/复氧(A/R)组;(3)0.5μgL aFGF+A/R组;(4)5 μg/L aFGF+A/R组;(5)50 μg/L aFGF+A/R组;(6)500 μg/L aFGF+A/R组;(7)5 mg/L aFGF+A/R组;(8)0.5μg/L maFGF+A/R组;(9)5 μg/L maFGF+A/R组;(10)50 μg/L maFGF+A/R组;(11)500 μg/LmaFGF+A/R组;(12)5 mg/L maFGF+A/R组.利用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,比较maFGF及aFGF对缺氧/复氧后心肌细胞凋亡的影响.

双龙方对心肌缺氧复氧损伤的保护作用及活性成分筛选研究

目的研究中药双龙方及其组分人参总皂苷、丹参总酚酸对缺氧复氧心肌损伤的保护作用,并测定其活性成分。方法建立体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,采用MTT法检测给药各组细胞的存活率;同时采用HPLC-MS联用对双龙方进入细胞的成分进行鉴定。结果模型组细胞存活率明显降低,仅为8.26%,双龙方有效增加细胞存活率,为70.41%,且在各实验组中效果最好;液质鉴定其活性成分主要是:Re、Rg1、Rf、Rb1和Rd。结论双龙方对缺氧复氧引发的心肌细胞损伤有显著的保护作用,其机制可能与清除自由基、抑制心肌细胞钙离子超载有关。

七氟醚后处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用研究

目的探讨七氟醚后处理对抗心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤过程中,缺氧诱导因子-1α/巨噬细胞移动抑制因子(HIF-1α/MIF)信号轴发挥的调控作用及相关作用机制。方法运用大鼠心肌细胞(H9C2)建立H/R损伤模型,分为空白对照组(NOR组)、缺氧/复氧组(H/R组)、七氟醚后处理组(SPostC组)、HIF-1α抑制剂组(YC-1组)。采用乳酸脱氢酶(LDH)及细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;活性氧(ROS)和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)试剂盒检测细胞能量代谢;通过Western blot检测HIF-1α、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)和磷酸化AMPKα(p-AMPKα)的蛋白表达水平。结果(1)与NOR组和H/R组相比,SPostC组显著上调了HIF-1α的表达、抑制细胞凋亡、减少ROS生成、增加ATP含量和减少LDH含量,经比较差异具有统计学意义(P<0.05);(2)与H/R组相比,SPostC组和YC-1组中HIF-1α的表达水平分别与MIF和AMPK的蛋白表达呈正相关(P<0.05);(3)与SPostC组相比,YC-1组抑制HIF-1α的表达,MIF、AMPKα和p-AMPKα呈低表达,经比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论七氟醚后处理通过上调HIF-1α/MIF信号轴对抗心肌细胞H/R损伤。

肉豆蔻-8散通过JAK2/STAT3信号通路减轻缺氧/复氧心肌细胞的损伤

研究肉豆蔻-8散提取物对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其与酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导子和激活子3(STAT3)信号通路的关系。使用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立H9c2细胞缺氧/复氧损伤模型;采用CCK-8法检测细胞活力;采用全自动生化分析仪检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;采用试剂盒法测定细胞中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量;采用Hoechst染色法检测细胞凋亡程度;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组心肌细胞JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2、Bax的蛋白表达。Na2S2O4对H9c2细胞活力的半数抑制量为2mmol/L;与模型组比较,不同浓度肉豆蔻-8散提取物均能提高细胞活力;能显著降低细胞培养液中CK、LDH、AST的水平、能显著增加细胞中CAT、SOD、GSH-Px的水平;同时可显著增加p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2的蛋白表达、显著减少Bax的蛋白表达,而AG490阻断剂组可减弱肉豆蔻-8散提取物的作用。肉豆蔻-8散通过JAK2/STAT3信号通路发挥对Na2S2O4诱导缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用。

玉郎伞查尔酮激活Nrf2/ARE信号通路减轻缺氧/复氧所致的H9c2细胞凋亡及氧化应激损伤

研究玉郎伞查尔酮(YLSC)对缺氧/复氧所致的H9c2细胞损伤的影响及可能的作用机制。缺氧12 h、复氧24 h建立心肌细胞缺氧/复氧模型,并对细胞凋亡、氧化应激相关指标和Nuclear-Nrf2等蛋白表达进行了检测。结果显示,YLSC可明显增加细胞生存率,提高SOD、GSH-Px水平,降低细胞凋亡率和LDH、ROS、MDA水平。使Nuclear-Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达增高而Cleaved caspase 3、Bax蛋白表达减少,联合应用Nrf2抑制剂可抑制YLSC作用效果。结果表明,YLSC可以减轻缺氧/复氧所致的心肌细胞凋亡及氧化应激损伤,其机制可能与激活Nrf2/ARE信号通路有关。

气血并治方有效组分对缺氧/复氧损伤心肌保护作用的机制研究

目的:观察气血并治方组分配伍(Components of water extract from Qixue Bingzhi Recipe,CWQB)对缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)损伤心肌细胞的保护作用,探讨其改善心肌能量代谢从而防止细胞凋亡的相关性机制。方法:分离、提取、培养出生1-2天的SD乳鼠原代心肌细胞,缺氧3 h复氧2 h制作H/R模型,分为Control组(正常氧组)、H/R组(缺氧/复氧模型)、TMZ组(缺氧/复氧模型+100μmol/L曲美他嗪(Trimetazidine,TMZ))和CWQB组(缺氧/复氧模型+1mmol/L气血并治方有效组分)。采用高效液相色谱分析法(HighPerformance Liquid Chromato-graph,HPLC)测定各组细胞高能磷酸化合物-一磷酸腺苷(Adenosine mono-phosphate,AMP)、二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate,ADP)、三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)的含量并计算总腺苷酸量(Total adenylic acid,TAN)、能荷(Energy charge,EC)水平;酶联免疫吸附法(Enzyme linkedimmuno sorbent assay,ELISA)法检测心肌细胞损伤标志物肌酸激酶同工酶(Creatine kinase-MB,CK-MB)、肌钙蛋白T(Troponin,c Tn T)水平,流式细胞术检测心肌细胞早期凋亡率。Pearson相关性检验分析心肌损伤标志物、早期凋亡率与高能磷酸化合物含量之间的关系。结果:与H/R组比较,TMZ组、CWQB组AMP含量下降,ADP、ATP含量和TAN、EC水平均有所升高,其中TMZ组ADP、ATP、TAN升高程度较CWQB组更为显著(p<0.05);TMZ组、CWQB组CK-MB、c Tn T含量显著下降,其中CWQB组c Tn T含量下降更为显著(p<0.05);TMZ组、CWQB组早期凋亡率有所下降,TMZ组下降更为显著(p<0.05)。相关性分析显示,CK-MB水平与ADP浓度呈显著负相关;早期凋亡率与AMP浓度呈显著正相关,与ADP、ATP浓度呈负相关(P<0.01)。结论:CWQB能够在降低H/R心肌细胞AMP浓度,升高ADP、ATP浓度和TAN、EC水平的同时,减轻心肌损伤标志物CK-MB、c Tn T含量,抑制心肌细胞的早期凋亡率,从而发挥对H/R损伤心肌细胞的保护作用。

培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型与黄芩苷的影响

目的:观察黄芩苷对纯化培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其作用机制。方法:实验于2006-11/2007-01在郑州大学医学院药理实验室完成。①实验分组:选用出生1～3d的SD大鼠20只,雌雄不拘,培养乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型。实验分为5组:正常对照组以正常细胞培养,加入等数量的培养基,不加入任何药物,缺氧/复氧损伤模型组,缺氧/复氧损伤+0.1mg/L黄芩苷组,缺氧/复氧损伤+1mg/L黄芩苷组,缺氧/复氧损伤+10mg/L黄芩苷组。②实验评估:采用乳酸脱氢酶试剂盒测其释放量;采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活力;硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛含量;四唑盐比色法测定心肌细胞活力。结果:①丙二醛含量和乳酸脱氢酶活力:缺氧/复氧损伤组明显高于正常对照组(P<0.01),缺氧/复氧+10,1,0.1mg/L浓度黄芩苷组明显低于缺氧/复氧损伤组(P<0.01)。②心肌细胞超氧化物歧化酶活性:缺氧/复氧损伤组明显低于正常对照组(P<0.01),黄芩苷+10,1,0.1mg/L浓度黄芩苷组明显高于缺氧/复氧损伤组(P<0.01)。③心肌细胞活力:缺氧/复氧损伤组心肌细胞活力明显低于正常对照组,缺氧/复氧+10,1,0.1mg/L浓度黄芩苷组明显高于缺氧/复氧损伤组(P<0.01)。结论:黄芩苷具有对缺氧/复氧损伤所致心肌细胞的保护作用,可能与其抗氧化、抗自由基有关。

油茶皂甙对大鼠离体心脏缺氧/复氧损伤的保护作用

目的：对大鼠离体心脏进行Ｌａｎｇｅｎｄｏｆｆ灌流，观察油茶皂甙（ＳＱＳ）对心肌缺氧／复氧（Ｉ／Ｒ）损伤的保护作用。方法：灌流开始后，将心脏随机分为４ 组。Ｎｏｒｍ ａｌ组：有氧灌流；缺氧／复氧（Ｉ／Ｒ）组：缺氧４０ ｍ ｉｎ 复氧３０ ｍ ｉｎ；ＳＱＳ大剂量组（ＳＱＳＩ）：ＳＱＳ０５ ｍ ｇ／Ｌ预灌１５ ｍ ｉｎ，作Ｉ／Ｒ模型；ＳＱＳ小剂量组（ＳＱＳⅡ）：ＳＱＳ０２５ ｍ ｇ／Ｌ预灌１５ ｍ ｉｎ，作Ｉ／Ｒ模型。记录心功能，测量心肌酶活性。结果：ＳＱＳⅠ、Ⅱ组与Ｉ／Ｒ组相比，ＳＱＳ能增加心肌的收缩功能，提高心室最大收缩压（ＬＶＳＰ），左室内压最大变化速率（ｄｐ／ｄｔｍａｘ），加快心率（ＨＲ）；使冠脉流出液肌酸激酶（ＣＫ）生成减少；降低心肌组织钙含量，增强细胞膜Ｎａ＋ Ｋ＋ ＡＴＰａｓｅ 及线粒体膜Ｃａ２＋ ＡＴＰａｓｅ活性。结论：ＳＱＳ具有抗钙超载及心肌保护作用。

吗啡预处理对缺氧/复氧诱发的心肌细胞线粒体动力学变化的影响

目的探讨吗啡(Mor)对缺氧/复氧(H/R)诱发的心肌H9c2细胞线粒体动力学变化的影响。方法将心肌H9c2细胞分为空白组(正常培养)、模型组(H/R处理)、对照组(5μmol·L^(-1) Mor处理)、实验组(H/R+5μmol·L^(-1) Mor处理)。用透射电子显微镜(TEM)观察线粒体的形态,用活性氧(ROS)、四甲基罗丹明乙酯(TMRE)、线粒体复合体Ⅰ和Ⅲ活性检测试剂盒分别检测ROS含量、线粒体膜电位(MMP)、复合体Ⅰ和Ⅲ活性,用蛋白质印迹法检测线粒体动力学相关蛋白GTP酶动力蛋白相关蛋白1(Drp1)、细胞色素氧化酶Ⅳ亚型(COXⅣ)和线粒体外膜转位酶20(TOM20)蛋白的表达水平。结果实验组细胞核膜光滑完整,线粒体大小一致,嵴排列整齐,空泡化减少,线粒体基质电子密度增加,自噬体数量减少。空白组、模型组、对照组和实验组细胞的ROS含量分别为1.03±0.04、1.53±0.10、1.06±0.06和1.10±0.11,MMP分别为1.00±0.15、0.80±0.16、1.06±0.19和1.00±0.19,复合体Ⅰ活性分别为1.00±0.08、2.28±0.82、1.05±0.26和1.13±0.37,复合体Ⅲ活性分别为1.00±0.09、2.13±0.38、0.83±0.22和0.96±0.11,Drp1蛋白相对表达水平分别为1.00±0.14、1.27±0.07、0.97±0.21和0.93±0.17,线粒体裂变蛋白1(Fis1)蛋白相对表达水平分别为1.00±0.16、1.33±0.18、1.17±0.25和0.99±0.05,COXⅣ蛋白相对表达水平分别为1.00±0.25、0.62±0.08、0.79±0.26和0.97±0.16,TOM20蛋白相对表达水平分别为1.00±0.13、0.67±0.15、0.75±0.13和0.89±0.05。模型组的上述指标与空白组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.0001);实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.0001)。结论吗啡可能通过抑制心肌线粒体自噬和分裂,以及降低呼吸链复合体Ⅰ和Ⅲ的活性减轻氧化应激损伤,进而维持线粒体动力学稳态,减轻H/R诱发的心肌细胞损伤。

异丙酚对鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的保护作用

心肌缺血/再灌注损伤是围术期经常面临的一种病理生理变化,静脉麻醉药异丙酚结构上的特殊性使其对各种因素(如缺血/再灌注)所致的氧化应激的诸多环节均有阻断作用,异丙酚的抗氧化性可能为其心肌保护作用的机制之一.本文研究了异丙酚预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及该作用是否与其抗氧化性有关.

藏药八味沉香散对Na_2S_2O_4所致乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究八味沉香散(TBP)对连二亚硫酸钠(Na2S2O4)所致乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法:采用SD乳鼠心肌细胞原代培养,采用Na2S2O4诱导心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,用TBP 10,30,100 mg·L-13种不同剂量预处理24 h后,检测培养液中半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)和细胞凋亡;测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD),和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与模型组比较,TBP 3个剂量组明显减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤后Caspase-3和细胞凋亡(P<0.05);降低LDH,CK,AST的活性和MDA含量(P<0.05),同时能够升高SOD,GSH-Px活性(P<0.05)。结论:八味沉香散对Na2S2O4所致乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有明显的保护作用。

Nur77在缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡中的作用及其机制的研究

目的:观察Nur77通过线粒体转位对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法:原代培养l-2天SD大鼠心肌细胞,建立H/R模型。随机分为正常对照组、H/R组、Nur77组,采用免疫荧光检测横纹肌肌动蛋白(α-actin)鉴定心肌细胞;采用TUNEL染色法及Caspase-3酶活性检测心肌细胞凋亡情况;采用Western blot检测细胞核及线粒体Nur77蛋白表达、线粒体及胞浆Omi/HtrA2蛋白表达。结果:H/R组细胞核中Nur77蛋白表达明显低于正常对照组;而在线粒体中则相反。Nur77组线粒体中的Omi/HtrA2蛋白表达明显低于正常对照组;而在胞浆中则相反。结论:在心肌细胞H/R损伤时,Nur77线粒体转位促使Omi/HtrA2蛋白从线粒体释放入胞浆,从而导致心肌细胞凋亡。

双参宁心方的正常与心肌缺血模型大鼠血清对缺氧/复氧H9C2细胞作用的比较

目的:比较大鼠在正常状态与心肌缺血状态下制备的双参宁心方(SSNX)空白及含药血清对体外缺氧/复氧H9C2心肌细胞活力的影响。方法:分别设立正常组、心肌缺血模型组。大鼠心肌缺血模型由冠状动脉结扎法建立,术后缝合伤口继续喂养。术后2 h除正常空白、模型空白、模型假手术组给予生理盐水外,均按高、中、低剂量(180,90,45 mg.kg-1)分别ig给予SSNX 5日。末次给药后30,90,150 min分批处死大鼠,分别制备正常及模型血清。将其作用于缺氧/复氧H9C2细胞。MTT法检测H9C2细胞活力。结果:正常空白血清与模型空白血清对缺氧/复氧H9C2心肌细胞活力影响差异明显(P<0.05),正常动物SSNX含药血清与心肌缺血模型动物SSNX含药血清均有提高缺氧/复氧H9C2心肌细胞活力的作用,分别与正常动物空白血清及模型动物血清比较(P<0.05);各时间点正常含药血清与相应时间点模型含药血清相比更显著提高了H9C2心肌细胞活力。结论:2种方法制备的SSNX血清对体外缺氧/复氧H9C2心肌细胞活力的作用趋势一致,但强度有一定差异。

miR-101-3p通过MAPK信号通路保护心肌缺血再灌注损伤的机制研究

目的:观察miRNA(miR)-101-3p对小鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤心脏的作用及缺氧/复氧(H/R)H9C2细胞存活的影响,并探究其作用机制。方法:建立I/R小鼠模型和H/R H9C2细胞模型。miR-NC、miR-101-3p注射入I/R小鼠再进行I/R模型制作;脂质体法将agomiR-NC、agomiR-101-3p转入H9C2细胞再进行H/R模型制作,部分细胞用二甲基亚砜(DMSO)、丝裂原活化激酶(MAPK)信号通路抑制剂SB203580预处理30 min;心脏超声检测小鼠左室舒张末压(LVDP)、左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)等指标;细胞计数试剂盒(CCK8)、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素-碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞增殖率、凋亡率;双荧光素酶报告实验检测细胞荧光活性;蛋白质印迹法(WB)检测细胞MAPK1、MAPK6、MAPK8蛋白表达。结果:与对照组小鼠心脏或H9C2组细胞相比,I/R组小鼠和H/R H9C2细胞中miR-101-3p的表达均显著降低,小鼠心脏LVDP、LVEF、LVFS均显著下降,细胞增殖率显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。过表达miR-101-3p后,小鼠心脏LVDP、LVEF、LVFS均显著上升,细胞增殖率显著升高,凋亡率显著降低(P<0.05);miR-101-3p显著抑制野生型MAPK1、MAPK6、MAPK8细胞的荧光活性,并负向调控其蛋白表达;MAPK信号通路抑制剂加强了miR-101-3p过表达对H/R H9C2细胞的促进增殖和抑制凋亡的作用。结论:miR-101-3p可保护缺血再灌注心肌损伤,促进心肌细胞增殖,抑制凋亡,其机制与直接靶向抑制MAPK信号通路活性有关。