大鼠心肌缺血再灌流损伤的免疫组化研究

用16只 SD 大白鼠建立缺血再灌流心肌损伤模型,其中8只预先静脉注射吗啡以抗心律失常。此外,再用8只大鼠开胸作正常对照。其心脏标本进行 HE 染色及抗肌动蛋白单克隆抗体(HHF_(35))免疫组化观察:对照组心肌呈均匀一致的棕褐色染色;注射吗啡后再灌流组心肌呈小灶性分布的 HHF_(35)染色缺染区;未注射吗啡组心肌缺染呈广泛大面积分布。结果表明,HHF_(35)免疫组化法对显示实验性心肌缺血再灌流损伤有重要价值,且心肌缺血再灌流损伤程度与心律失常有关。

中药药理性预适应对心肌缺血再灌损伤的保护作用

1986年，Murry等在犬缺血再灌模型实验中观察到预先一次或反复短时间缺血可以对心肌缺血／再灌注损伤有保护作用，认为主要是由于心肌有较好的耐受能力，可以延缓心肌细胞死亡，并首次提出了心肌缺血预适应（IPC）。目前，IPC已越来越被研究人员和临床工作者所重视。

维药爱维心口服液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨爱维心口服液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:30只Wistar大鼠,体重200～250g,雄性,随机分为假手术组、缺血再灌(I/R)组、爱维心预处理组3组,每组各10只。建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,记录大鼠心功能指标。检测心肌丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和血清肌酸激酶(CK)含量,并观察大鼠心肌损伤的形态学改变。结果:爱维心口服液能够改善大鼠缺血复灌后的心功能,与缺血再灌组比,能显著降低心肌组织MDA和血清CK的含量(P<0.01),GSH-PX的活性明显升高(P<0.01),心肌损伤的形态学的改变明显减轻。结论:爱维心口服液对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与减轻膜脂质过氧化有关。

活体心肌缺血再灌自由基产生和清除的ESR研究

ＥＳＲ和自旅捕捉技术用于研究活体动物犬心肌缺血再灌产生的自由基，ＰＢＮ从冠状静脉血液中捕捉到了ＯＨ自由基，直接地证实了缺血再灌细胞膜损伤的活性氧自由基作用机制；实验还看到一种甾体皂甙药物具有保护心肌细胞．防止自由基损伤的功能．

芝麻素对大鼠心肌缺血再灌损伤的保护作用

目的:探讨芝麻素对缺血再灌所致大鼠心肌损伤的保护作用及其可能机制。方法:SD大鼠50只随机分为正常对照组、模型组、假手术组、芝麻素低剂量组[80 mg/(kg·d)]及芝麻素高剂量组[160 mg/(kg·d)],每组10只。芝麻素组灌胃给予芝麻素7 d,每日1次,结扎冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌模型;假手术组大鼠只穿线,不接扎。HE染色观察心肌病理学变化,比色法测定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及心肌组织MDA、SOD水平。结果:芝麻素明显改善缺血再灌所致大鼠心肌损伤,减轻细胞水肿、变性、坏死及心肌间质炎症细胞浸润,降低血清CK、LDH水平(P<0.05或P<0.01)。芝麻素显著提高大鼠血清和心肌组织SOD活力,降低MDA水平(P<0.05或P<0.01),改善缺血再灌诱导的氧化应激。结论:芝麻素可明显改善缺血再灌所致大鼠心肌损伤,其机制与提高机体抗氧化能力、减轻缺血再灌所致氧化应激损伤有关。

银杏内酯B对心肌缺血再灌注损伤大鼠保护作用的研究

目的观察银杏内酯B对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用并初步探讨其可能的作用机制。方法采用夹闭左冠状动脉前降支的方法制备大鼠心肌缺血再灌注模型;设假手术组、模型组和银杏内酯B(15、30、60 mg/kg)组,每组20只。监测各组大鼠心电图波动变化;通过高频率超声影像系统检测舒张末期左室内径(LVIDd)和收缩末期左室内径(LVIDs)、短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)、每搏输出量(SV);TTC染色法检测心肌梗死面积,生化分析法测定血清中心肌酶含量;HE染色法观察心肌组织病理变化;末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡状况。结果与模型组比较,银杏内酯B(15、30、60 mg/kg)组心电图明显改善,以银杏内酯B 60 mg/kg组最为显著;银杏内酯B(30、60 mg/kg)组LVIDd、LVIDs显著减小(P<0.05),FS显著提高(P<0.01),EF、SV显著升高(P<0.01);心肌组织梗死面积显著降低(P<0.05或P<0.01),血清心肌酶(AST、CPK、LDH)含量显著降低(P<0.05或P<0.01);心肌组织病变明显改善,心肌组织凋亡细胞数明显减少、凋亡指数(AI)显著降低(P<0.01)。结论银杏内酯B对心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。

心肌缺血再灌过程中自由基生成动力学的ESR研究(英文)

采用自旋捕捉ＥＳＲ方法研究了大白鼠和豚鼠在心肌缺血再灌注中自由基产生的动力学过程，首次测出复氧过程中羟基自由基变化的动力学曲线．同时结果还表明，在缺血后的复氧过程中除羟基·ＯＨ之外，还有碳中心自由基Ｒ·和可能的烷氧基ＲＯ·的生成，但其中·ＯＨ基生成的量经常是最大的．由于·ＯＨ基具有很高的反应活性，因而不可避免地就会通过它的夺氢作用导致碳中心自由基Ｒ的生成．特别有趣的是，羟基产生过程中其ＥＳＲ信号的强度总是随着时间不断地增强而达到一最大值，然后又逐步地缓慢衰减到趋于几乎消失，此现象迄今尚未见有文献报道．我们建立了可近似表征羟基自由基生成速度的上升和下降过程的动力学方程．自由基生成与变化过程亦可近似地用退化分支链反应图式来予以描述．在所提出的链反应过程图式中，可对于通常所谓脂质体过氧化的过程。

腹腔氢气和饱和氢盐水对家兔心肌缺血再灌注损伤及超微结构的影响

目的探讨腹腔氢气和静脉饱和氢盐水对家兔心肌缺血/再灌注损伤及心肌超微结构的影响。方法将40只家兔麻醉开胸随机分为假手术组(A组)、模型对照组(B组)、腹腔氢气组(C组)和饱和氢盐水组(B组)各10只。假手术组冠脉穿线不结扎,余3组冠脉结扎60min后再灌注同时,B组5只腹腔氧气10mL/kg一次性注入,5只静脉生理盐水10mL/kg10min泵入,C组腹腔氢气10mL/kg10min注入;D组静脉饱和氢盐水10mL/kg泵入。B组、C组D组均再灌480min。结果 A组、C组、D组超氧化物歧化酶(SOD)明显高于B组,但A组、C组、D组间两两比较差异无统计学意义(P>0.05);A组、C组、D组抑制羟自由基能力明显大于B组。电镜和Tunnul监测显示:A组、C组、D组细胞凋亡数明显少于B组,心肌结构相对完整,线粒体细胞核损伤较小,仅见少量溶酶体无自噬体,而B组心肌组织破坏严重细胞膜线粒体脊融合断裂较重,形成空泡部分溶酶体空泡形成,可见多个自噬体。结论两种给氢方法均能保护缺血再灌注损伤,这种保护作用与H_2清除自由基抗炎、抗凋亡有关。腹腔氢气较静脉氢盐水应用方便效果更佳。

心肌缺血再灌时内皮功能紊乱与心肌细胞凋亡的相关性研究

目的研究心肌缺血再灌时内皮细胞功能紊乱与心肌细胞凋亡的相关性 ,探讨通过保护内皮来减少心肌细胞凋亡以减轻缺血再灌注损伤。方法采用结扎左冠状动脉前降支 (LAD) 3 0min再灌注不同时间复制心肌缺血再灌注模型 ,经舌下静脉注入卡托普利作干预。Percoll密度梯度离心法分离循环内皮细胞 (CEC)并计数、紫外分光光度计检测血清一氧化氮 (NO)含量、放射免疫法检测血清内皮素(ET)值。TUNEL标记凋亡细胞计算出阳性细胞率。透射电镜观察心肌细胞凋亡的超微结构。结果①缺血再灌组随再灌时间延长 ,CEC、ET逐渐增多 ,NO逐渐下降且心肌细胞凋亡率逐渐增加 ;与缺血再灌组比 ,卡托普利干预各组CEC、ET下降 ,NO减少 ,心肌细胞凋亡率均下降 ;同时透射电镜观察显示缺血再灌心肌受损、可见部分心肌细胞呈现细胞凋亡的超微结构改变 ,用CPT干预后心肌损伤有一定减轻。②直线相关分析显示 :血中NO含量和心肌细胞凋亡率呈负相关 ;ET和心肌细胞凋亡率呈正相关。结论①缺血再灌注时内皮细胞功能紊乱、心肌细胞凋亡 ;卡托普利可改善内皮功能、减少心肌细胞凋亡率。

心肌缺血再灌流损伤HSP70m RNA原位杂交研究

目的观察家兔早期缺血再灌流损伤心肌组织热休克蛋白70mRNA的表达变化,为心性猝死的法医病理学诊断寻找新的方法。方法建立家兔心肌缺血再灌流损伤模型,通过原位杂交技术观察研究。结果心肌缺血15min再灌流30min后,缺血区HSP70mRNA阳性反应增强,阳性颗粒均匀散布于心肌全层,随着缺血时间的延长,阳性反应细胞数目逐渐增多,染色加深。结论HSP70mRNA原位杂交检测可望为早期心肌缺血再灌流损伤的死后诊断提供新方法。

替米沙坦对大鼠心肌缺血再灌注诱导的心肌炎症反应的影响

目的探讨替米沙坦对大鼠心肌缺血再灌注诱导的心肌炎症反应的影响。方法将24只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、替米沙坦组,每组8只。通过大鼠在体结扎和松开冠状动脉左前降支的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。建模结束后,检测比较三组大鼠的心功能,通过HE染色观察比较三组大鼠的心肌损伤情况,采用Westernblot检测比较三组大鼠心肌组织中NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平。结果三组大鼠的左心室舒张末期压力(LVEDP)表现为模型组>替米沙坦组>假手术组;左心室收缩压力(LVSP)、左心室压力上升的最大变化率(+dp/dtmax)和左心室压力下降的最大变化率(-dp/dtmax)表现为模型组<替米沙坦组<假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色光镜下观察发现,三组大鼠心肌损伤的严重程度表现为模型组>替米沙坦组>假手术组,三组大鼠的心肌损伤评分分别为(2.343±0.378)分、(1.502±0.228)分和(0.317±0.130)分,模型组>替米沙坦组>假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。三组大鼠心肌NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达水平表现为模型组>替米沙坦组>假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论替米沙坦能减轻大鼠心肌缺血再灌注诱导的心肌炎症反应,改善心功能,可能与下调炎症相关基因的表达水平密切相关。

六味通心颗粒对大鼠心肌缺血再灌损伤模型心功能的影响

目的观察六味通心颗粒对大鼠心肌缺血再灌损伤模型左室收缩压（LVSP）、左室舒张末压（LVEDP）、左心室的最大收缩速率（＋dp／dtmax）、左心室最大舒张速率（-dp／dtmax）的影响，探讨六味通心颗粒对大鼠心肌缺血再灌损伤模型的作用。方法雄性SD大鼠36只，体重180—220g，按体重随机分为三组，假手术组、缺血再灌注组、预防给药组；预防给药组连续给药4周后实验，连续观察2h各组大鼠心电图及心功能LVSP、LVEDP、＋dp／dtmax、-dp／dtmax的水平，腹主动脉取血离心去血清-80℃储存备用，取300mg心脏组织匀浆离心取上清-80℃储存，取部分心脏组织放于中性甲醛溶液固定。结果与模型组比较，预处理组在缺血期、再灌注期能升高LVSP、＋dp／dtmax水平一dp／dtmax，对LVEDP的升高有一定的抑制作用（P〈0．05、P〈0．01）。结论预防给药组对大鼠心肌缺血再灌损伤模型心功能有一定的改善作用。

银丹心脑通及主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究银丹心脑通及其主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤的保护性作用。方法:采用全心停灌再灌注的方法建立大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型。SD大鼠分为空白组(control),模型组(model),银丹心脑通全方组(YDXNTC),银杏提取物组(GBE),丹参醇提物组(SM-E),丹参水提物组(SM-H),混合物组(灯盏细辛,三七,山楂,绞股蓝,大蒜,天然冰片;MC),银杏+丹参醇提物配伍组,银杏+丹参水提物配伍组,丹参醇提物+丹参水提物配伍组。离体心脏平衡后,空白组正常灌流70 min;模型组正常灌流10 min,停灌30 min,复灌30 min;给药组以含有相应药物的灌流液正常灌流10 min,余同模型组。实验过程中全程记录心电图,观察室性心动过速/室颤(VT/VF)发生率,心脏停跳时间,复跳时间,正常律动时间及心率失常持续时间。复灌结束后,将心肌匀浆,测定SOD活力,MDA,LDH,CK-MB和心肌钙蛋白I(cTnI)释放量。结果:①银丹心脑通全方组,丹参醇提物,丹参水提物,混合物能够延长心脏停跳时间,缩短复跳时间、正常律动时间及心率失常持续时间,但对VT/VF发生的发生没有明显作用。银杏提取物对减少复跳时间、正常律动时间及心率失常持续时间有较好作用,同时能够改善VT/VF的发生。除银杏+丹参水提配伍对心脏停跳时间无明显影响以外,主要成分配伍对心脏停跳时间,复跳时间,正常律动时间及心率失常持续时间均有良好作用,且银杏+丹参醇提对VT/VF发生也有明显作用。②银丹心脑通全方组,银杏提取物,丹参醇提物,银杏+丹参醇提物配伍组,丹参醇提物+丹参水提物配伍组能够提高心肌SOD活力,降低MDA含量;丹参水提物,混合物,银杏+丹参水提物配伍组仅使MDA含量降低。③银丹心脑通全方组和丹参水提物减少了LDH的释放。银杏提取物,丹参醇提物,丹参水提物及银杏+丹参醇提物配伍降低了CK-MB含量。④银杏+丹参醇提物配伍抑制了cTnI的释放。结论:银丹心脑通、主要成分及主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与抗氧化,减轻钙超载有关。

线粒体通透性转换孔在精脒介导的心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的:研究线粒体通透性转换(PT)孔在精脒介导的心肌缺血/再灌注损伤中的作用。方法:采用Langendorff灌流离体大鼠心脏,全心停灌30min,复灌120min造成心肌缺血复灌模型。采用高效液相色谱法测定心肌组织精脒含量;复灌前10min给予不同浓度精脒,记录左室收缩压(LVSP)、左室压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)和左室舒张末期压力(LVEDP);用紫外分光光度法检测复灌10min的冠状动脉(冠脉)流出液乳酸脱氢酶(LDH)活性;用TTC染色法测心肌梗死面积。检测不同浓度精脒对心肌线粒体PT孔开放改变(520nm吸光度变化)。结果:与对照组比较,大鼠心肌缺血期及再灌期精脒含量均减少(P<0.05);与单纯缺血/复灌组相比,于复灌前10min给予线粒体通透性转换孔特异性阻断剂环孢菌素A(CsA 0.2mol/L)和精脒(0.1mol/L、1μmol/L、5μmol/L),左室收缩舒张功能改善,其中LVSP上升(P<0.01),LVEDP下降(P<0.01),±dp/dtmax提高(P<0.01);冠脉流出液中LDH含量明显减少(P<0.01),梗死面积减少(P<0.01)。而于复灌前10min给予精脒(10μmol/L,15μmol/L),与单纯缺血/复灌组比较,LVSP均明显下降(均P<0.01),LVEDP明显上升(P<0.01),±dp/dtmax下降(P<0.01);复灌10min后冠脉流出液中LDH含量明显增加(P<0.01),梗死面积均增加(均P<0.01);在分离的线粒体给予精脒,高浓度PT孔开放幅度增加;低浓度开放受到抑制。结论:精脒可通过抑制或增强线粒体PT孔开放而对缺血/再灌心肌产生保护或加重损伤的作用。

芝麻素预处理激活Akt/eNOS通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤

目的:观察芝麻素对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的改善作用,并探讨其可能机制。方法:将50只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组及芝麻素高(160 mg/kg)、低(80 mg/kg)剂量组,每组10只,连续给药7 d。采用冠状动脉左前降支结扎40 min再灌注120 min的方法建立大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型,比色法检测血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(c TnⅠ)、乳酸脱氢酶(LDH)及血清和心肌组织总抗氧化能力(TAOC)、一氧化氮(NO)水平,并检测心肌组织Caspase-3活性;TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡水平;Western blot法检测心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)磷酸化水平、蛋白激酶B(Akt)蛋白磷酸化水平及超氧化物歧化酶(SOD)蛋白表达水平。结果:芝麻素预处理能明显改善缺血-再灌注所致大鼠心肌损伤,降低血清c TnⅠ、LDH水平,提高血清及心肌组织总抗氧化能力和NO水平(P<0.05或P<0.01),并能显著提高心肌组织SOD蛋白表达及Akt、eNOS蛋白磷酸化水平,降低Caspase-3活性,减少心肌细胞凋亡(P<0.05或P<0.01)。结论:芝麻素预处理能减轻缺血-再灌注所致大鼠心肌损伤,其机制与增强机体抗氧化能力、激活Akt/eNOS信号通路、增加NO合成,进而抑制心肌细胞凋亡有关。

心肌缺血后适应和Toll样受体在心肌再灌注损伤中的作用

近年来随着急性心肌梗死发病率的不断增高,促进了溶栓、经皮穿刺冠状动脉介入治疗和冠状动脉旁路移植术(CABG)等再灌注疗法的广泛开展,由缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,IRI)引起的心脏损伤日益受到重视。因此,研究减轻心肌缺血/再灌注损伤安全、有效的方法对防治心脏疾病具有重大的价值和意义。近期国内外很多研究发现心肌缺血后适应(ischemic postconditioning,IPOC)及Toll样受体(Toll like receptor,TRL)在心肌缺血再灌注损伤中起重要作用,本文对此进行综述。

一个大鼠心肌缺血-再灌诱导表达上调的新基因Mip1的克隆和特性分析

采用生物信息学方法和 5′cDNA末端快速扩增法 (RACE)技术相结合 ,克隆了一个大鼠心肌缺血 再灌诱导表达上调的新基因Mip1,并经RT PCR测序及多组织膜RNA印迹证实 .生物信息学分析显示 ,MIP 1定位于大鼠染色体 1q12区 ,含 5个外显子和 4个内含子 ,开放阅读框 (ORF)为 182 7bp ,编码 6 0 8个氨基酸 ,其编码蛋白N端含KRAB结构域 ,C端含 14个连续的C2H2型锌指蛋白结构域 ,氨基酸第 2 77位至 2 93位为双向的核定位信号 ,多组织膜RNA印迹显示该基因在脑组织表达最高 ,其次是心脏 ,在其他组织表达较低或无表达 .进一步深入研究该基因的功能具有重要生物学意义 .

培养心肌细胞内的SDH图象分析——大豆磷脂脂质体对缺血再灌心肌膜损伤的影响

琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性在判断心肌缺血,再灌性损伤中起重要作用。本文通过IBAS图象分析系统对缺血再灌的培养心肌细胞内的SDH定量评估,以求探讨大豆磷脂脂质体对心肌缺血再灌性损伤的保护作用。结果表明,在缺血及再灌组的心肌细胞内出现较强的SDH损伤性反应,大豆磷脂脂质体能明显减轻这种反应,提示大豆磷脂脂质体对缺血及缺血/再灌心肌具有明显的保护作用。

自由基对心肌缺血——再灌流的损伤

冠状动脉损伤对心肌不能供应动脉血时可使心功能下降,继而导致心肌细胞坏死。对这种缺血性心脏病病因的探讨一向是从心肌供氧不足引起能量缺乏为主的代谢方面进行研究。因而,一般认为随缺血所致糖酵解系统亢进而产生以乳酸为代表的最终代谢产物蓄积可使心肌细胞内pH下降,同时又是损害心肌细胞功能的主要原因。然而另一方面已知,①在缺血心肌儿茶酚胺的游离增加,②随心肌酸中毒,ATP分解为次亚黄嘌呤,③黄嘌呤脱氢酶(XD)在血管内皮细胞内转化为黄嘌呤氧化酶(XO)即D→O转化,④环氧化酶被激活等。在厌氧条件下,这些代谢性变化通过儿茶酚胺的自动氧化和以黄嘌吟为底物的黄嘌呤氧化酶反应以及前列腺素G_2(PGG_2)转化为前列腺素H_2(PCH_2)