大鼠心肌缺血预适应相关基因5的克隆与特性分析

目的采用生物信息学分析表达序列标签AW918640以获得其所代表基因的全长序列,并对该基因进行初步的特性分析。方法利用基因银行(GeneBank)数据库,通过BLAST比对等生物信息学方法进行电子克隆,采用逆转录聚合酶链反应和基因测序等技术进行鉴定,采用mapviewer软件进行染色体定位,ExPASy和SMART软件对获得的全长基因进行翻译和蛋白质功能结构分析。结果AW918640(基因银行登录号)为一个在大鼠心肌缺血预适应后3h表达升高的表达序列标签序列,通过电子克隆得到其所代表基因的全长,且为一新基因,经逆转录取合酶链反应和基因测序证实后,将其命名为心肌缺血预适应相关基因5(MIP5),并在基因银行数据库上登录,登录号为AY553870。心肌缺血预适应相关基因5最大开放读码框为909bp,编码302个氨基酸,含有6个kelch重复基序。结论心肌缺血预适应相关基因5为一与大鼠心肌缺血预适应相关的新基因。

内源性降钙素基因相关肽在整体大鼠心肌缺血预适应中的作用

为确定预适应缺血时释放的内源性降钙素基因相关肽是否在整体大鼠心肌缺血预适应中起重要作用，分别用放射免疫法测定缺血预适应、降钙素基因相关肽多克隆抗体及对照组的血浆降钙素基因相关肽浓度。并用硝基四唑氮兰染色判定梗死区面积，以坏死区占危险区的百分数表示。结果表明，缺血预适应组第一次和第三次缺血末的血浆降钙素基因相关肽浓度均较对照组显著增高（Ｐ＜０．０１），以后者增加更为明显。缺血预适应能明显抑制缺血／再灌注所致的室性心律失常的发生和降低缺血／再灌注后的心肌梗死区面积，预先用降钙素基因相关肽多克隆抗体能明显减弱上述作用。提示降钙素基因相关肽在心肌缺血预适应中可能起重要作用。

降钙素基因相关肽在缺血和运动预适应中对心肌保护作用的研究

缺血预适应和运动预适应作为一种内源性防御机制,对心肌具有保护作用;降钙素基因相关肽(CGRP)是心肌内源性保护因子,在信号传导途径中可以作为触发因子发挥对心肌的保护作用。本文就CGRP在缺血预适应和运动预适应中对心肌的保护作用、作用机制进行综述。

降钙素基因相关肽在整体大鼠心肌缺血预适应中的作用及其与ATP敏感钾通道的关系

目的明确降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）是否在整体大鼠心肌缺血预适应（ＩＰＣ）中起作用。方法将 ９６只 ＳＤ大鼠随 机分为 ８组。所有动物均接受 ３０ ｍｉｎ缺血／ ２ ｈ再灌注，缺血预适应方案由 ３次 ５ ｍｉｎ缺血／ ５ ｍｉｎ再灌注组成。 ３０ ｍｉｎ缺血前 ２０ ｍｉｎ静脉注射 ＣＧＲＰ １０μｇ／ｋｇ·ｂ．ｗ．。预适应前 ３０ ｍｉｎ静脉注射优降糖（ＧＬＩ） ０．３ ｍｇ／ｋｇ·ｂ．ｗ．。首次预适应 缺血前静脉注射ＣＧＲＰ多抗（ＰｃＡｂ）２．５ｍｇ／ｋｇ·ｂ．ｗ．。梗死大小由硝基四唑氮篮染色判定，并以坏死区（ＩＳ）占危险区的百 分比表示。血浆ＣＧＲＰ浓度用放射免疫法测定。结果首次和第３次预适应缺血的血浆ＣＧＲＰ浓度均较对照组显著增 加（Ｐ＜０．０１），且后者增加更为明显（Ｐ＜０．０１）。ＩＰＣ能明显缩小心肌梗死范围和几乎完全抑制缺血和再灌注时室性心律 失常的发生，预先用ＣＧＲＰ－ＰｃＡｂ能明显减弱上述作用。ＣＧＲＰ预适应具有ＩＰＣ样心肌保护作用，但程度不及ＩＰＣ明显。 预先用ＧＬＩ均能取消ＩＰＣ和ＣＧＲＰ预适应缩小心肌梗死范围的作用，但对室性心律失常无影响。结论ＣＧＲＰ在整 体大鼠缺血预适应中可能起重要作用；

大鼠心肌缺血预适应诱导表达上调基因的筛选和鉴定

采用反复短时间结扎及松解左冠状动脉前降支构建大鼠心肌缺血预适应动物模型 ,运用抑制消减杂交技术建立大鼠心肌缺血预适应诱导表达上调基因的消减cDNA文库 ,通过反向RNA点杂交对部分文库基因进行差异表达初筛 ,选取表达差异最明显的 85个基因进行测序 ,获得了 3 1个核编码基因和 18个新基因 (EST) ,核编码基因中有相当一部分与细胞保护或信号转导有关 ,新基因已被GenBank收录 .从已测序基因中任选 5个进行RT PCR检测 ,并任选 2个进行RNA印迹检测 ,均证实在缺血预适应时表达增高 .

用cDNA芯片检测大鼠心肌缺血预适应后基因表达谱的改变

为了检测缺血预适应后大鼠心肌基因表达谱的改变 ,采用cDNA芯片方法对缺血预适应后大鼠心肌基因谱的改变进行检测。结果发现 ,缺血预适应大鼠心肌中差异表达基因共 75项 ,其中表达上调基因 4 8项 ,表达下调基因 2 7项。采用逆转录—聚合酶链反应进一步验证了cDNA芯片结果的可靠性 ,并初步分析了基因表达谱改变在缺血预适应诱导的心肌内源性保护作用中有一定意义。以上研究有助于从基因水平阐明缺血预适应诱导的心肌保护的分子机制 ,为临床防治缺血 再灌注损伤及缺血性心脏疾病提供新的思路。

降钙素基因相关肽及IP3信号通路介导1型糖尿病大鼠离体心脏缺血预适应保护作用

目的研究降钙素基因相关肽(CGRP)及IP3信号通路在1型糖尿病大鼠离体心脏缺血预适应(IPC)中的作用,探讨1型糖尿病大鼠心脏IPC保护作用减弱的机制。方法将80只造模成功的SD大鼠随机分为1型糖尿病4周(D-4w)组(n=40)和8周(D-8w)组(n=40),并进一步将两组各自随机分为模型对照(D-Cont)组、1型糖尿病缺血再灌注(IR)组、IPC组、CGRP(IPC+CGRP)组和IP3抑制剂wortmanin(IPC+WMN)组5个亚组;另取16只大鼠作为正常对照(N-Cont)组。采用Langendorff方法建立离体心脏体外灌流模型,灌流期间外源性给予CGRP或wortmanin(WMN)。采用多道生物信号分析系统监测各组大鼠离体心脏左室功能,记录冠脉流量,ELISA法检测大鼠血清CGRP含量;生化法测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)的活性;NBT染色法测量心肌梗死面积;TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况。结果与N-Cont组大鼠相比,1型糖尿病大鼠血清CGRP含量随着时间进行性降低,且心脏基础左心功能降低,冠脉流出液中LDH和CK活性增加,心肌梗死面积和心肌细胞凋亡指数增加(P<0.05);IR组与D-Cont组相比,左心功能更为降低,心肌损伤明显;IPC可改善D-4w IR心肌损伤情况,而对D-8w IR损伤无保护作用;IPC+CGRP组与IPC组相比,其左心功能明显改善;IPC+WMN组可阻断IPC对D-4w组大鼠心肌保护作用。结论CGRP及IP3信号通路参与1型糖尿病大鼠离体心脏的IPC保护作用。

降钙素基因相关肽预适应心肌保护作用的实验研究

目的观察降钙素基因相关肽(CGRP)预适应在整体大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用并探讨CGRP能否诱导延迟性预适应效应。方法50只SD大鼠随机平均分为5组。所有动物均接受1h缺血/2h再灌注处理,A组于术前24h及术前分别静脉注射CGRP10μg/kg;B组于术前静脉注射CGRP10μg/kg;C组于术前24h静脉注射CGRP10μg/kg;D组于术前24h及术前分别静脉注射相同体积的生理盐水;E组无预处理。用硝基四唑氮篮(TTC)染色判定梗死大小,并以坏死区占危险区的重量百分比表示;取血清测心肌酶学改变,用免疫组化方法检测心肌热休克蛋白70(HSP70)的表达。结果A组、B组、C组较D组、E组心梗面积明显缩小(P<0.01),心肌酶CK、LDH明显降低(P<0.01),A组心肌HSP70表达升高,C组心肌HSP70表达显著升高,B组、D组和E组心肌HSP70基本无表达,A组与B组、C组,D组与E组在心梗面积、心肌酶学的改变方面无明显差异(P>0.05)。结论CGRP预适应在整体大鼠能诱导早期及延迟性效应,缩小心梗面积,减少心肌酶漏出,对大鼠心肌缺血/再灌注损伤起保护作用;CGRP预适应在第一窗口期与第二窗口期的心肌保护作用无明显叠加。

芪参益气滴丸预适应诱导大鼠心肌延迟保护作用与降钙素基因相关肽表达的关系

目的探讨芪参益气滴丸预适应大鼠心肌延迟保护作用与降钙素基因相关肽(CGRP)表达的关系。方法基于心肌缺血预适应原理,采用RT PCR及ELISA方法 ,检测不同处理对CGRP表达的影响。随机将36只成年Wistar大鼠分成6组:正常组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、芪参益气滴丸预适应组(QS组)、缺血预适应组(DPC组)、阻断剂加缺血预适应(DPC+GAP组)、阻断剂加芪参益气滴丸预适应加缺血预适应组(DPC+CAP+QS组),给予不同的处理。结果 QS组与DPC组大鼠血清中CGRP m RNA、CGRP蛋白含量升高,与DPC组相比,加入辣椒素(CAP)后CGRPm RNA表达、CGRP蛋白含量下调,而芪参益气滴丸预适应可以使降低的CGRPm RNA表达、CGRP蛋白含量提高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论芪参益气滴丸预适应通过增高CGRP的表达发挥其延迟保护作用。

凋亡抑制基因Survivin在大鼠心肌缺血预适应中的表达及其与心肌细胞凋亡的关系

目的探讨Survivin基因在大鼠心肌缺血预适应中的表达及其与心肌细胞凋亡的关系。方法36只大鼠随机分为缺血预适应组、单纯缺血组和正常组三组。分别检测三组大鼠心肌中Survivin mRNA和心肌细胞凋亡率。结果缺血预适应组Survivin mRNA的表达水平最高,单纯缺血组表达水平较缺血预适应组降低,正常组只有微弱的表达。单纯缺血组大鼠心肌细胞凋亡率最高,缺血预适应组大鼠心肌细胞凋亡率较单纯缺血组大鼠低。结论在心肌缺血过程中Survivin可以减少心肌细胞的凋亡,具有心脏保护作用。

运动预适应对大鼠背根神经节降钙素基因相关肽表达的影响

目的:探讨运动预适应对大鼠背根神经节降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达的影响。方法:健康雄性Sprague-Dawley大鼠50只,随机分为对照组和运动预适应组。运动预适应组进行连续3周的间歇跑台训练建立运动预适应动物模型。用实时荧光定量PCR技术检测背根神经节CGRP mRNA的表达,用免疫组织化学SABC法观察背根神经节CGRP的表达。结果:运动预适应组背根神经节CGRP mRNA表达与对照组相比变化不明显(P>0.05);运动预适应组背根神经节CGRP免疫反应与对照组相比明显增强,CGRP免疫反应阳性表达面积和平均光密度均显著高于对照组(P<0.05)。结论:运动预适应未引起背根神经节CGRP mRNA的表达发生明显变化;运动预适应使背根神经节CGRP的表达增强,以促进外周神经末梢CGRP的储备和释放,介导运动预适应的内源性保护作用。

冠状动脉内应用腺苷联合远程缺血后适应对急性ST段抬高型心肌梗死患者经皮冠脉介入治疗术后的心肌保护作用

目的研究冠状动脉内应用腺苷联合常规经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)术后远程缺血后适应对急性ST段抬高型心肌梗死(ST elevation myocardial infarction,STEMI)患者的心肌保护作用。方法将新乡医学院附属焦作市人民医院2019年1月至2021年1月接诊的124例STEMI患者按照随机数字表法分为对照组60例和试验组64例。对照组患者行PCI,试验组患者于PCI术前于冠状动脉内给予腺苷注射液200μg,然后行常规PCI术,术后连续14d行双上肢远程缺血后适应(remote ischemic postconditioning,RIpostC),比较两组患者术后慢血流/无复流发生情况、矫正心肌梗死溶栓试验(thrombolysis in myocardial infarction,TIMI)帧数(cTFC)、TIMI心肌灌注分级(TIMI myocardial perfusion grades,TMPG)和ST段抬高总和回落百分比(sum-ST-segment resolution,sumSTR);检测患者治疗前后肌酸激酶同工酶、肌钙蛋白I和降钙素基因相关肽水平;比较随访6个月后两组患者主要不良心脑血管事件发生率。结果试验组患者术中慢血流/无复流发生率低于对照组(P=0.027);试验组PCI术后即刻cTFC和TMPG均优于对照组(P<0.001),术后试验组sumSTR≥30%的比率高于对照组(P=0.02);两组患者术后24h的CKMB和cTNI均高于术前,但试验组术后24h的CKMB和cTNI均低于对照组术后测定值(P=0.03,P=0.03);试验组术后14d的CGRP测定值高于术前,且高于对照组术后14d的CGRP测定值(P<0.001,P<0.001);随访6个月,试验组MACCE发生率低于对照组(P=0.013)。结论冠状动脉内应用腺苷联合远程缺血后适应能够改善STEMI患者冠状动脉及心肌灌注水平,降低心肌损伤,改善STEMI患者临床预后。

短期和长期运动预适应对大鼠血液和心脏降钙素基因相关肽的影响

目的:探讨短期和长期运动预适应对大鼠血液和心脏降钙素基因相关肽(calcitonin gene-relatedpeptide,CGRP)的影响及其对心肌保护的作用机制;方法:健康雄性SD大鼠75只,随机分为对照组(C组)、3天运动预适应组(3dEP组)和3周运动预适应组(3周EP组)。3dEP组和3周EP组分别进行3天和3周的间歇跑台训练建立短期和长期运动预适应动物模型。用酶联免疫法检测血清CGRP含量的变化,用western blot方法和免疫组织化学方法检测心脏CGRP定量和定位表达的变化;结果:与C组比较,3dEP组血清CGRP含量变化不明显,3周EP组血清CGRP含量明显升高(P<0.05);与C组比较,3dEP组心脏CGRP表达明显减少,CGRP免疫反应阳性表达面积和平均光密度明显降低(P<0.05),3周EP组心脏CGRP表达变化不明显,CGRP免疫反应阳性表达面积和平均光密度无明显变化;结论:短期运动预适应使心脏CGRP表达下降,提示短期运动预适应可促进心脏CGRP的释放,对心肌产生保护作用;长期运动预适应使血清CGRP水平升高,提示长期运动预适应可提高机体CGRP的释放水平,对心肌产生保护作用。

大鼠心肌缺血预适应对I/R心肌细胞凋亡及bcl-2表达的影响

目的 :对缺血预适应 (IP)第一保护窗对大鼠缺血再灌注 (I/R)心肌细胞凋亡和凋亡抑制基因bcl- 2表达的影响进行研究。方法 :采用TUNEL法、免疫组化和原位杂交方法测定大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡和bcl- 2的表达。结果 :①IP +I/R3h组TUNEL法阳性心肌细胞核数量及阳性心肌细胞核占总心肌细胞核数的百分比均明显少于I/R3h组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ;②IP +I/R3h组表达bcl- 2蛋白阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R3h组 (P <0 0 1) ;IP +I/R1h组表达bcl- 2mRNA阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R1h组 (P <0 0 1)。结论 :①大鼠心肌IP第一保护窗能够显著减少I/R心肌细胞凋亡 ;②IP通过上调凋亡抑制基因bcl-

缺血预适应减少心肌缺血损伤机制的研究

目的 通过对心肌缺血预适应的动物模型观察 ,探讨细胞凋亡在其中的作用 ,以及p5 3,bcl 2 ,Bax基因对其发生进行的调控。方法 采用TUNEL标记技术研究心肌缺血预适应心肌细胞中细胞凋亡现象 ,并采用免疫组化染色技术及原位分子杂交技术研究p5 3,bcl 2及Bax基因的蛋白及mRNA的表达。结果 缺血预适应组 (P)及非缺血预适应组 (NP)非缺血区均未见凋亡细胞 ,但在P组缺血区可见散在的凋亡细胞 ,而在NP组缺血区则多见。P组p5 3蛋白表达显著低于NP组 ,bcl 2蛋白表达在P组显著高于NP组 ,Bax蛋白表达在P组显著低于NP组 ,并且bcl 2 /Bax的比值P组与NP组相比显著升高。P组p5 3基因mRNA表达显著低于NP组 ,bcl 2基因mRNA表达在P组显著高于NP组。结论 心肌缺血预适应对心肌的保护可通过抑制细胞凋亡来实现 ,并且通过bcl 2表达增加 ,p5 3、Bax表达减少对其进行调控。

缺血预适应对大鼠乳鼠心肌细胞缺血/再灌损伤的保护作用

目的探讨缺血预适应对乳鼠心肌细胞缺血/再灌损伤的保护作用。方法复制大鼠乳鼠心肌细胞培养模型,试验分为四组:正常对照组:正常培养乳鼠心肌细胞;缺血再灌注组:缺血3h,再灌注9h;预适应组:先缺血90min,再灌注60min,再缺血3h,再灌注9h;预适应加caffeine组:缺血90min,再灌注20min后加入caffeine继续缺血40min后,再缺血3h,再灌注9h。分别测定乳鼠心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;HE检测各组心肌细胞损伤情况。结果检测乳鼠心肌细胞培养液中LDH活力、MDA水平和SOD活力时发现,缺血再灌注组和预适应加caffeine组的培养液中LDH活力、MDA水平与对照组相比明显增加,而SOD活力与对照组相比则是降低。培养的乳鼠心肌细胞的HE染色可见缺血再灌注组细胞体积变小,胞核浓缩,胞质嗜酸性增强,其病理学改变比预适应组和预适应加caffeine组严重。结论缺血预适应对大鼠乳鼠心肌细胞缺血/再灌损伤有保护作用。

心肌缺血预适应环氧化酶-2、血管内皮因子的表达及其远隔器官效应

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)在晚期缺血预适应(DPC)心肌及远隔器官(RPC)肝脏中的表达。方法:新西兰兔20只,随机分为DPC组及正常对照组,每组各10例。结扎兔冠状动脉左前降支建立缺血预适应模型,24h后取心肌及肝脏组织,免疫组化法测定心肌及肝脏COX-2、VEGF表达。结果:兔DPC心肌及肝脏COX-2、VEGF表达量比对照组明显增强,差异有显著性(P<0.05)。心肌非缺血区与对照组表达有显著差异性(P<0.05)。结论:缺血缺氧可刺激心肌COX-2、VEGF表达明显增强,心肌非缺血区及远隔器官肝脏也大量表达,COX-2、VEGF可能是参与抗缺血、冠状动脉侧枝血管形成及远隔器官保护效应中的重要物质。

糖尿病时K_(ATP)通道对心肌缺血预适应的影响

糖尿病时心脏KATP通道活性的降低或消失 ,可能是影响糖尿病患者心肌缺血预适应保护作用的重要原因。糖尿病时KATP通道基因突变、晚期糖基化终末产物生成增多、能量代谢紊乱、一氧化氮生成减少等均可导致该通道活性或数量的降低。全面了解糖尿病时KATP通道改变的机制 ,对进一步探寻糖尿病心血管并发症新疗法具有重要意义。